胰岛素对PC12细胞神经型一氧化氮合酶表达及活性的影响

为探讨胰岛素对神经细胞中神经型一氧化氮合酶 (nNOS)的表达及活性的影响 ,应用流式细胞术、原位杂交、电子自旋共振等技术方法研究胰岛素对PC12细胞中神经型一氧化氮合酶的影响 .胰岛素作用PC12细胞9h后 ,神经型一氧化氮合酶的免疫荧光强度显著升高 ,且呈浓度依赖关系 ,其最大效应为对照的 (155± 13 ) %(P <0 0 1,n =3 ,t test) .加入胰岛素 (16mU /L ,6h)也能够显著上调nNOSmRNA的表达 ,为对照的 (182± 13 ) % (P <0 0 1,n =3 ,t test) .另外加入胰岛素 (16mU /L)作用 9h后 ,神经型一氧化氮合酶的活性也显著升高 ,为对照的 (167± 15) % (P <0 0 1,n =4,t test) .由上述结果可知 。

印防己毒素对Btzinger复合体吸气抑制的阻断作用

Ｂｏｔｚｉｎｇｅｒ复合体（Ｂｏｔ．Ｃ）以呼气递增型神经元为主，其轴突广泛投射到延髓及脊髓呼吸神经元群，是吸气神经元呼气相突触后抑制的来源，在呼吸节律形成中起关键性作用。然而关于其吸气抑制的递质基础尚不清楚。尽管有资料表明Ｂｏｔ．Ｃ神经元为ＧＡＢＡ能，...

提高脑组织冰冻切片质量的几点体会

目的:探讨减少脑组织冰冻切片脱片和增加脑组织冰冻切片免疫组织化学染色结果准确性的方法,为脑组织冰冻切片的广泛使用进一步奠定实验基础。方法:在保证实验真实性和科学性的前提下,将现有的脑组织冰冻切片技术结合在脑组织冰冻切片过程中所遇到的问题,以明胶硫酸铬钾处理载玻片,预冷的NS和4%多聚甲醛灌注固定组织,液氮速冻脑组织进行冰冻切片。结果:明胶硫酸铬钾处理载玻片的方法减少了冰冻切片脱片,预冷的NS和4%多聚甲醛提高了脑组织灌流固定效果,液氮速冻脑组织减少了冰晶产生。结论:此方法使脑组织冰冻切片脱片情况下降,冰晶产生减少,提高了脑组织冰冻切片免疫组织化学染色结果的准确性,该方法值得在临床和科研实验室中积极推广使用。

神经节苷脂对急性脑出血患者神经功能缺损程度及日常生活活动能力的影响

目的探讨临床中神经节苷脂对急性脑出血患者神经功能缺损程度与日常生活活动能力的影响。方法选取泰安市中心医院2012年1月~2013年12月收治的120例急性脑出血患者作为临床研究对象,按照随机数字法将其分为对照组(n=60)和研究组(n=60)。对照组给予常规治疗,研究组在常规治疗基础上加用神经节苷脂。观察2组患者神经功能缺损程度与日常生活活动能力变化。结果治疗前研究组和对照组患者美国国立卫生研究院卒中量表(national institute of health stroke scale,NIHSS)评分和日常生活活动能力(activities of daily living,ADL)评分无显著性差异;治疗2周、12周后对照组和研究组患者的NIHSS评分、ADL评分较治疗前有不同程度的降低,且研究组改善程度均优于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论临床中对于急性脑出血患者应用神经节苷脂治疗能够改善患者神经功能缺损程度与日常生活活动能力。

神经元型一氧化氮合酶的核转位现象

目的:研究神经元型一氧化氮合酶(neuronalnitricoxidesynthase,nNOS)的亚细胞分布。方法:以体外培养的大鼠星形胶质细胞以及神经细胞株PC12、R2为研究对象,应用共聚焦激光扫描显微镜及WesternBlotting技术检测nNOS的亚细胞分布。结果:次传代后的前6天,nNOS主要分布于星形胶质细胞的细胞质内,细胞核内几乎没有分布。在次传代后的第7天,nNOS主要分布于细胞核内,且持续时间近10h。此后,nNOS又主要分布于细胞质内。然而,在神经细胞株PC12、R2没有发生nNOS核转位。结论:在一定的体外培养时间,星形胶质细胞发生nNOS核转位,并且nNOS核转位是原代培养神经细胞特有的一种生物学行为。

冠状动脉外膜炎症在动脉粥样硬化病灶形成中的作用

目的:探讨动脉外膜炎症诱发载脂蛋白E基因剔除(apoE-/-)小鼠冠状动脉粥样硬化病灶发生的机制。方法:取apoE-/-小鼠心脏做连续切片,选择冠状动脉外膜有炎性细胞浸润的3类部位代表粥样硬化病灶形成过程中的3个阶段:①未发现粥样硬化病灶;②有直接从主动脉延伸的病灶顶端和③成熟粥样硬化病灶的冠状动脉。分别采用HE染色、Movat染色、免疫组化和透射电镜方法鉴定3个病变阶段的冠状动脉外膜中炎细胞类型。结果:①未发现粥样硬化病灶;②有直接从主动脉延伸的病灶顶端和③成熟粥样硬化病灶的冠状动脉外膜分别以巨噬细胞、中性粒细胞和淋巴细胞浸润为主,其构成比分别为60.00%、57.65%和66.67%,各组构成比分别与其它两组比较均有显著差异(P<0.01)。结论:动脉外膜炎症可能是诱发动脉粥样硬化发生的早期事件之一,ApoE-/-小鼠冠状动脉粥样硬化病灶形成过程中,动脉外膜经历了一个从急性炎症到慢性炎症的过程。

急性肺水肿不同湿化剂吸氧疗效的实验研究

目的 :通过对急性肺水肿不同湿化剂吸氧疗效的动物实验 ,筛选一种合适的湿化剂。方法 :复制急性肺水肿的动物模型 ,给予蒸馏水及不同浓度的乙醇、丁醇湿化吸氧 ,观察吸氧前后PaO2 变化及支气管肺泡灌注液 (BALF)中SOD及血浆NO变化情况。结果 :各组PaO2 在吸氧后明显增高 ,尤以 15 %、2 5 %乙醇组增高显著 (P均 <0 0 1) ,肺系数显著低于未吸氧组 (P <0 0 1) ;15 %乙醇组BALF中SOD显著高于其它各组 (P <0 0 5 ) ,血浆NO在吸氧后亦明显升高 ,但与其它各组无显著性差异。结论 :①低浓度乙醇 (15 %～ 2 5 % )为最佳湿化剂浓度 ,丁醇不适合作湿化剂 ;②不同湿化剂对肺水肿吸氧疗效的影响除与其消泡作用有关外 ,尚与水肿液成份及其它因素有关。

延髓腹外侧 Botzinger 复合体在呼吸节律发起及调节中作用研究

系统研究了Ｂｏｔｚｉｎｇｅｒ复合体（Ｂｏｔ．Ｃ）在呼吸节律调控中的作用。发现：（１）微电刺激Ｂｏｔ．Ｃ导致双相吸气抑制，潜伏期分析表明分别由单突触和多突触联系中介。（２）脊髓膈神经核局部微量注射ＧＡＢＡ受体阻断剂印防己毒素可以部分阻断Ｂｏｔ．Ｃ吸气抑制作用，提示ＧＡＢＡ参与中介Ｂｏｔ．Ｃ的吸气抑制作用。（３）双侧Ｂｏｔ．Ｃ微量注射ＧＡＢＡ导致呼吸节律消失，膈神经呈低幅度紧张放电，表明Ｂｏｔ．Ｃ在呼气相形成中起关键性作用。（４）ＨＲＰ逆行标记及逆行兴奋研究证明，Ｂｏｔ．Ｃ广泛接受脑干呼吸相关结构传入投射。结果表明Ｂｏｔ．Ｃ参与吸气时程和幅度的控制并在呼气相形成中起关键作用。

小学语文教学中读与写有效结合策略

读写结合的教学模式是在阅读中将学生对于阅读内容的学习和学习后的书写相结合,不但能够让学生在阅读的过程中积累更多的语文知识,也可以发展学生的写作能力。读和写本身是相通的,通过写可以巩固读的内容,以读可以促进学生进行写作,阅读是为了更好地进行语言资源的积累,便于深入写作。小学生在语文知识的积累上本来就很缺乏,写作方面的能力也需要提升,通过在小学语文阅读教学中将读和写进行结合,可以更好地发展小学生的语文学习,能够有效促进小学生写作能力的提高,使得小学生的语文知识更加地丰富和完善。

脑缺血再灌注后大鼠海马Wnt7b的表达

目的研究成年大鼠脑缺血再灌注后海马齿状回颗粒细胞下层(SGZ)Wnt7b的表达。方法将44只雄性Wistar大鼠随机分为正常对照组和脑缺血再灌注组,线栓法制备大鼠脑缺血再灌注损伤模型,缺血90 min,术后检测神经功能缺失和脑梗死,在脑缺血再灌注后1、3、7、14 d取大鼠海马组织。RT-PCR技术检测Wnt7b mRNA表达水平;免疫荧光技术检测海马Wnt7b蛋白及β-catenin蛋白表达水平。结果脑缺血后,大鼠出现严重的脑梗死和神经功能障碍,随再灌注时间延长,大鼠神经功能得到修复。再灌注7d后,健侧脑组织海马Wnt7b mRNA表达上调(P<0.05),缺血侧脑组织海马Wnt7b mRNA的表达明显上调(P<0.01)。Wnt7b主要分布于SGZ附近,阳性细胞增多(P<0.01),且该脑区的细胞内β-catenin阳性细胞数目增多(P<0.01)。结论缺血性脑损伤可刺激Wnt7b在成年海马SGZ的表达上调,Wnt7b可能通过经典Wnt通路参与调节脑缺血后成年海马SGZ的神经发生。

经典Wnt信号通路在大鼠脑缺血后血管新生中的作用

目的研究缺血性脑卒中大鼠缺血周边脑组织的经典Wnt信号通路活性及干预该通路活性对缺血周边血管新生的影响。方法随机将50只雄性Wistar大鼠分为4组:假手术组(Sham组,n=10),脑缺血对照组(MCAO组,n=20),氯化锂干预组(Li Cl组,n=10),DKK1干预组(DKK1组,n=10)。免疫印迹法检测经典Wnt信号通路成分,FITC-dextran检测血管密度,多普勒血流仪检测血流量。结果脑缺血1 d后,与Sham组相比,MCAO组缺血周边脑组织细胞核蛋白及细胞浆蛋白中β-catenin表达水平显著下降(P<0.05),7 d时明显恢复,14 d时接近正常水平。与MCAO组相比,Li Cl组β-catenin表达水平及p-GSK-3β/GSK-3β比值提高(P<0.05),并且缺血周边血管密度及血流量增加(P<0.05);DKK1组变化相反,β-catenin表达水平及p-GSK-3β/GSK-3β比值降低(P<0.05),血管密度及血流量下降(P<0.05)。结论经典Wnt信号通路参与调节缺血性脑卒中后缺血周边的血管新生。

常压氧疗对大鼠脑缺血再灌注后血脑屏障损伤的作用及机制

目的研究常压氧疗对大鼠脑缺血再灌注后血脑屏障损伤的作用及机制。方法采用大鼠大脑中动脉线栓法制备脑缺血再灌注模型。随机将30只SD雄性大鼠,分为模型对照组和常压氧疗治疗组各15只,缺血90min后再灌注24h。采用TTC染色、伊文思蓝法和明胶酶谱技术,分别检测脑梗死体积、血脑屏障通透性及缺血脑组织基质金属蛋白酶-9(MMP-9)的活性,并进行神经功能评分。结果与对照组比较,常压氧疗治疗组大鼠的脑梗死体积、缺血脑组织伊文思蓝外渗率及MMP-9的活性显著降低(P(0.01),神经功能缺陷也得到显著改善。结论缺血期内的常压氧疗对大鼠脑缺血再灌注后血脑屏障的损伤具有保护作用,其作用机制可能是通过抑制MMP-9的活性来实现的。

Caveolin-1对脑缺血大鼠血管新生的影响

目的探讨缺血性脑卒中大鼠缺血周边脑组织Caveolin-1(Cav-1)的表达及抑制其表达对缺血周边血管新生的影响。方法随机将雄性Wistar大鼠分为4组:假手术组(Sham组,n=15),脑缺血组(MCAO组,n=55),Cav-1 siRNA慢病毒转染组(siRNA组,n=20)以及非编码siRNA慢病毒转染组(misRNA组,n=20)。用Q-PCR以及免疫印迹检测Cav-1的动态表达,FITC-dextran检测血管密度,多普勒血流仪检测血流量。结果与Sham组比较,MCAO组再灌注4 h^3 d,Cav-1表达逐渐下降(P均<0.05),3 d表达水平最低(P<0.01),7 d后明显恢复(P<0.05),14 d接近正常(P>0.05)。与MCAO组比较,siRNA组Cav-1的表达水平显著降低,并且缺血周边血管密度及血流量显著下降(P均<0.05);misRNA组的上述指标无明显变化。结论 Cav-1参与调节缺血性脑卒中后缺血周边脑组织的血管新生。

HMGB1介导急性高血糖对脑缺血大鼠血-脑脊液屏障的损伤

目的探讨急性高血糖对脑缺血大鼠血-脑脊液屏障(BBB)损伤的作用及机制。方法实验大鼠随机分为假手术组、正常血糖(NG)组、加甘草酸(GL)(NG+GL)组、高血糖(HG)组和加GL(HG+GL)组。于脑缺血再灌注不同时间段检测脑脊液高迁移率族蛋白B1(HMGB1)含量、BBB通透性、脑水肿和脑梗死体积,评估神经缺失。结果与NG组比较,HG组大鼠的脑脊液HMGB1含量显著提高(P<0.01);同时,伊文思蓝(EB)外渗率,脑梗死体积及脑水肿显著加重(P<0.01),神经功能缺陷加重(P<0.05);进行GL干预后,上述指标显著改善(P<0.01)。结论高血糖可促进缺血脑组织HMGB1的释放,加重BBB损伤。抑制HMGB1的活性,对高血糖大鼠脑缺血后BBB的损伤具有保护作用。

Wnt信号通路与神经发生的关系研究

近年来，促进受损脑细胞再生成为神经系统退行性病变治疗研究的重要方向。研究人员越来越重视脑细胞损伤后的自我修复，对脑细胞损伤后自我修复机制和促进细胞再生的治疗手段的研究越来越多嘲。现发现Wnt信号通路对脑细胞损伤后的再生过程有重要作用。Wnt信号通路参与生物细胞增殖分化、细胞转运、肿瘤形成等过程，尤其对胚胎期哺乳动物神经系统发生有重要的调控作用。神经干细胞在特定条件下可分化为不同的神经细胞，而Wnt信号通路在成年哺乳动物受到损伤性刺激后会被启动。进而促进神经干细胞再生，但Wnt信号通路在神经系统发生过程中的具体作用机制目前仍然不清楚。本文旨在探讨如何改变Wnt通路，使神经干细胞向着理想的方向增殖分化，以期为临床应用提供理论基础，进而达到治疗疾病的作用。