异绿原酸A通过PERK信号通路缓解小反刍兽疫病毒诱导的内质网应激

病毒感染可诱导宿主细胞产生内质网应激(ERS)与未折叠蛋白反应(UPR),导致内质网稳态失衡。为了探讨异绿原酸A(IAA)在调节小反刍兽疫病毒(PPRV)诱导的ERS和UPR中的作用机制,采用MTT试验、间接免疫荧光试验和Western blot评估IAA的抗PPRV活性;采用Western blot和实时荧光定量PCR观察IAA对PPRV诱导的ERS及PERK信号通路的影响。结果表明,IAA能显著抑制PPRV在LDG-2细胞中的复制及病毒诱导的细胞病变,显著提高病毒感染细胞的存活率;与病毒对照组相比,IAA处理的PPRV感染细胞中GRP78和PPRV表达水平、p-PERK/PERK和p-eIF2α/eIF2α比值均显著降低;GADD153表达水平则在病毒感染24、36h显著降低,在48、60h显著升高。用4-PBA阻断PPRV诱导的ERS,IAA和4-PBA+IAA处理PPRV感染细胞中GRP78、PPRV-N蛋白、GADD153的表达水平及p-eIF2α/eIF2α、p-PERK/PERK比值均显著降低。由此可见,IAA可通过抑制PERKeIF2α-GADD153信号通路的激活缓解PPRV感染诱导的ERS,从而抑制病毒在宿主细胞的复制。

小反刍兽疫病毒诱导的内质网应激对山羊肾细胞PERK信号通路和细胞凋亡的影响

病毒感染可引起宿主细胞产生内质网应激(endoplasmic reticulum stress,ERS)和未折叠蛋白反应(unfolded protein response,UPR),导致内质网稳态失衡。为了深入探讨小反刍兽疫病毒(peste des petits ruminants virus,PPRV)感染诱导的ERS对宿主细胞UPR信号通路、病毒复制和细胞凋亡的影响,采用MTT试验测定、间接免疫荧光试验(IFA)和Western blot观察PPRV在山羊肾细胞(LDG-2)的增殖,采用Western blot和实时荧光定量PCR(qRT-PCR)观察PPRV感染对GRP78、PERK及其下游信号分子、细胞凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax表达水平的影响。结果显示,PPRV感染36 h后,细胞存活率显著降低并产生明显细胞病变,PPRV-N蛋白表达水平呈上升趋势,且在病毒感染30 h后显著高于细胞对照;与此同时,GRP78、p-eIF2α和GADD153表达水平、p-PERK/PERK和p-eIF2α/eIF2α比值均显著升高。用4-PBA阻断PPRV诱导的ERS,PPRV感染细胞中PPRV-N蛋白、GRP78、p-eIF2α和GADD153表达水平及p-eIF2α/eIF2α、p-PERK/PERK比值均显著降低。在PPRV感染30和36 h,与细胞凋亡相关的Bcl-2表达下调,Bax表达上调,Bcl-2/Bax比值则显著降低。由此可见,PPRV感染可激活PERK/eIF2α/GADD153信号通路,缓解病毒诱导的ERS,促进病毒复制;阻断PPRV诱导的ERS,可抑制PERK信号通路和病毒复制;PPRV感染和持续的ERS可诱导宿主细胞凋亡。

小反刍兽疫病毒通过TLR2/MyD88/NF-κB信号通路介导LGD-2细胞炎症反应

采用MTT试验、间接免疫荧光试验(IFA)和实时荧光定量PCR(qRT-PCR)观察小反刍兽疫病毒(peste des petits ruminants virus,PPRV)在山羊肾细胞(LDG-2)的增殖,采用Western blot和qRT-PCR观察PPRV感染对TLR2、MyD88、NF-κB信号通路相关因子及其下游炎症因子表达水平的影响。结果显示,PPRV感染后36 h,细胞存活率显著降低并产生明显细胞病变,PPRV-N基因mRNA表达水平显著上调;PPRV感染细胞中TLR2、MyD88、p-p65、p-IκBα表达水平、p-p65/p65和p-IκBα/IκBα比值以及下游炎症因子TNFα、IL-1β、IL-4和IL-10的mRNA表达水平均显著升高。用C29阻断PPRV诱导的TLR2激活,PPRV感染细胞中PPRV-N的mRNA、TLR2、MyD88、p-p65、p-IκBα表达水平及p-p65/p65和p-IκBα/IκBα比值、下游炎症因子IL-1β和IL-4的mRNA表达水平均显著降低。结果表明,PPRV感染可激活TLR2/MyD88/NF-κBα信号通路,促进病毒的复制和扩散;阻断PPRV诱导的TLR2激活,可抑制MyD88/NF-κB信号通路和病毒复制。