血清剥夺诱导大鼠骨髓间充质干细胞凋亡及其对Smac基因转录的影响

目的观察体外血清剥夺诱导大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)凋亡及BMSCs凋亡过程中Smac基因表达变化,进一步探索BMSCs凋亡机制。方法用密度梯度离心和差异贴壁相结合法分离BMSCs,体外培养、扩增。流式细胞术对培养的BMSCs进行免疫表型鉴定。BMSCs体外血清剥夺培养0h(正常对照组)、24h、48h,用AnnexinⅤ-FITC和碘化丙啶(PI)双标记行流式细胞术凋亡检测。通过逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)生成cDNA,以荧光定量PCR检测分析Smac mRNA的丰度。结果体外培养第5代BMSCs流式细胞术免疫表型鉴定结果符合BMSCs特点。与0h比较,血清剥夺24、48h后,BMSCs发生显著凋亡,各组比较有统计学差异(F=170.96P<0.01),且24h点早期凋亡百分率达到(32.99±2.52)%。同时荧光定量PCR检测显示24h点Smac mRNA表达与正常对照组相比显著升高(t=2.814P<0.05)。结论血清剥夺能诱导BMSCs凋亡,被诱导凋亡的BMSCs中Smac基因转录增加。

高胆红素血症新生儿血清神经元特异性烯醇化酶水平变化及意义

目的探讨血清神经元特异性烯醇化酶(s-NSE)水平与新生儿行为神经测定(NBNA)的相关性,探讨s-NSE在急性胆红素脑病(ABE)发生、发展中的价值。方法对63例高胆红素血症新生儿在高胆期及黄疸消退后分别采用电化学发光免疫法测定s-NSE及行NBNA,生后1、3、6个月追踪随访,并与24例正常新生儿对照。结果高胆期:s-NSE水平随血清总胆红素(TSB)升高而升高,各组s-NSE水平比较差异有统计学意义(F=56.287,P<0.01);高胆组NBNA评分明显下降,NBNA评分随TSB升高而降低,各组NBNA评分比较差异有统计学意义(F=50.247,P<0.01);s-NSE水平与NBNA评分间呈显著负相关(r=-0.609,P<0.01)。高胆消退后,s-NSE水平均有明显下降,NBNA评分同步上升。结论高胆红素血症患儿s-NSE浓度显著升高,与NBNA评分呈负相关,可以作为临床早期监测新生儿是否进入ABE的危险期的一个生物学指标。

s-NSE对早期判断新生儿急性胆红素脑病的意义

目的探讨血清神经元特异性烯醇化酶(s-NSE)能否作为早期判断急性胆红素脑病(ABE)的生物学指标。方法选择高胆红素血症病儿63例,以24例同期出生的生理性黄疸不明显的足月新生儿作为对照组,测定两组血清总胆红素(TSB)水平,采用电化学发光免疫法测定s-NSE水平。结果不同高胆红素水平的各组s-NSE水平比较差异有统计学意义(F=59.813,P<0.01),足月儿s-NSE水平与TSB水平间呈显著正相关(r=0.762,P<0.01);早产儿组s-NSE水平显著高于同等高胆红素水平的足月儿组(F=56.287,q=2.84,P<0.05)。结论高胆红素血症病儿s-NSE水平显著升高,升高程度与TSB水平和早产因素相关。s-NSE较TSB更有可能成为敏感的判断ABE的生物学指标。

高胆红素新生儿肾功能损伤的实验室指标分析

目的评价高胆红素血症对新生儿肾功能损害的指标。方法选择高胆红素血症患儿45例,同时选择20例生理性黄疸足月儿作为对照组,分别测定血胆红素(TBil)、尿素氮(BUN)、肌酐(Cr)、血β2微球蛋白(β2-MG)、尿β2-MG、尿微量白蛋白(mALB)含量。结果 2组新生儿血BUN、Cr均在正常范围内。与对照组比较,高胆红素组血β2-MG、尿β2-MG水平显著升高(P均<0.01)。重度及早产重度高胆红素组的mALB亦显著升高(P均<0.01)。结论血、尿β2-MG及mALB是反映高胆红素对新生儿肾功能损害的比较灵敏的指标。

高胆红素血症新生儿检测心肌酶谱及肌钙蛋白I的临床意义

目的探讨高胆红素血症对新生儿心肌酶谱及肌钙蛋白(cTnI)的影响。方法选择高胆红素血症患儿63例,同时选择24例同期出生的足月生理性黄疸新生儿为对照组,测定血清总胆红素(TBIL)、心肌酶谱(CK、CK-MB),电化学发光免疫法测定肌钙蛋白(cTnI)。结果病例组与对照组比较,心肌酶谱(CK、CK-MB)、电化学发光免疫法测定肌钙蛋白(cTnI)均升高,差别有统计学意义。结论高胆红素血症可以引起新生儿心肌的损害性改变,血清总胆红素(TBIL)水平越高损害越明显,而且与早产因素相关。检测心肌酶谱(CK、CK-MB)及肌钙蛋白(cTnI)能作为高胆红素血症新生儿心肌损害的早期灵敏、特异的重要诊断指标,临床上有重要实用价值。

谷氨酸对人骨髓间充质干细胞中Par-4蛋白表达的影响

目的探讨谷氨酸对人骨髓间充质干细胞(BMSCs)中Par-4蛋白表达的影响及意义。方法用BMSCs分离液和密度梯度离心分离和培养人BMSCs,取第3～5代培养的细胞,分别加入小鼠抗人CD29-FITC、CD44-FITC、CD105-FITC、CD45-FITC、CD14-FITC、CD34-FITC单克隆抗体,流式细胞术鉴定其免疫表型。采用0.1nmol/L、1.0nmol/L、10.0nmol/L等不同剂量谷氨酸处理人BMSCs24h,并设正常对照组。Westernblot测定各组Par-4与突触素1(Synapsin-1)的蛋白表达量,并进行2种蛋白表达的相关性分析。结果在显微镜下,BMSCs呈星形或梭形。流式细胞术鉴定发现培养的细胞中CD29、CD44、CD105表达阳性,而CD45、CD14、CD34表达阴性,符合BMSCs特点。正常对照组Par-4蛋白相对表达量为17.43±5.9,0.1nmol/L、1.0nmol/L、10.0nmol/L谷氨酸诱导人BMSCs中Par-4蛋白表达依次升高,分别为39.33±8.2、49.45±11.5、86.41±14.9(Pa<0.01)。谷氨酸处理导致BMSCs中Synapsin-1表达下调,并呈剂量依赖性(F=49.1P<0.01)。10.0nmol/L谷氨酸处理24h后,Par-4蛋白的表达与Synapsin-1的表达量呈显著负相关(r=-0.643P<0.01)。结论谷氨酸诱导人BMSCs中Par-4表达升高,并可能使植入到缺血微环境中的BMSCs发挥神经细胞替代的作用受到负面影响。

甲强龙对毛细支气管炎婴幼儿外周血IL-12、IL-13水平的影响

目的探讨甲强龙对婴幼儿毛细支气管炎的疗效及对IL-12、IL-13水平的影响。方法将41例毛细支气管炎患儿随机分为观察组和实验对照组,均采用综合治疗,观察组加用甲强龙,对治疗前后症状、体征持续时间进行比较,并采用双抗体夹心酶联免疫吸附法检测治疗前后IL-12和IL-13的水平。另随机抽取同期健康体检婴幼儿15例作为健康对照组。结果观察组在总有效率、痊愈率方面均显著优于实验对照组(χ2=5.333、5.058,P<0.05)。两组毛细支气管炎患儿治疗后的IL-12、IL-13水平差异有统计学意义(t=3.472、-4.984,P<0.01);IL-12水平均明显升高(t=-10.974、-6.453,P<0.01)、IL-13水平均明显下降(t=25.114、17.554,P<0.01),但两组婴幼儿IL-12、IL-13水平与健康对照组间差异有统计学意义(t=6.330、14.490,P<0.01)。结论静脉注射甲强龙治疗毛细支气管炎显示了较好的临床效果。毛细支气管炎婴幼儿存在IL-13的高水平状态,甲强龙可以显著下调IL-13水平、上调IL-12水平。毛细支气管炎的IL-12、IL-13的不平衡状态可能在向哮喘方向发展的过程中具有重要意义。

122例高胆红素血症新生儿心肌功能的评价

目的探讨新生儿高胆红素血症对心肌细胞的影响。方法将研究对象分为正常对照组30例和高胆组122例。正常对照组选择入院时进行心肌酶测定,高胆组分别于高胆治疗前后进行心肌酶测定。所有病例入院初均进行心电图检查。结果高胆组治疗前后心肌酶值比较差异有统计学意义(P<0.01),随着血清胆红素的降低,血清心肌酶活性明显降低,与正常对照组之间差异无统计学意义(P>0.05)。结论高胆红素血症能引起新生儿心肌损伤,但这种损伤在一定程度上可能是可逆性的。

妈咪爱预防人工喂养儿肺炎继发腹泻的临床研究

小儿肺炎继发腹泻是临床常见的问题，25％～52．9％的肺炎患儿在肺炎发生的同时或治疗过程中或好转后发生腹泻，既加重了患儿病情、延长了治愈时间，又增加了医疗费用。人工喂养儿这方面的问题可能较母乳营养儿更为严重，为减轻患儿痛苦、改善预后，我们2006年9月至2008年2月对75例住院治疗的人工喂养肺炎患儿应用微生态制剂（妈咪爱）预防／治疗继发腹泻，通过观察临床消化道症状并检测相关免疫学指标，以探讨口服微生态制剂对人工喂养的肺炎患儿临床疗效及其免疫状态的影响，为临床对肺炎患儿，尤其是人工喂养儿应用微生态制剂提供更多的依据。

大鼠骨髓间充质干细胞去血清培养后钙激活中性蛋白酶10基因转录变化

目的检测血清剥夺是否诱导骨髓间充质干细胞(BMSCs)凋亡,探讨钙激活中性蛋白酶-10(Calpain-10)是否参与血清剥夺诱导的大鼠BMSCs凋亡。方法原代培养的大鼠BMSCs,流式细胞术鉴定细胞表型,去血清培养,应用PI/Annexin-V双染法流式细胞仪计数0、24、48h凋亡细胞的比例,应用荧光定量PCR测定血清剥夺24h诱导凋亡的Calpain-10基因mRNA水平。结果流式细胞术鉴定细胞发现CD29、CD44、CD105表达阳性,CD45、CD14、CD34表达阴性,符合BMSCs特点;血清剥夺后24h早期凋亡细胞比例最高。荧光定量PCR结果示与正常对照组比较血清剥夺诱导凋亡24h Calpain-10基因mRNA水平显著上调(2-ΔΔCT=22.433)。结论血清剥夺可诱导大鼠BMSCs凋亡,并上调Calpain-10基因mRNA水平,Calpain-10可能参与血清剥夺诱导的大鼠BMSCs凋亡。

骨髓间充质干细胞向神经细胞分化的可塑性研究

骨髓中至少存在两种骨髓干细胞(BMSCs),即造血干细胞(HSCs)和间充质干细胞(MSCs)。其中MSCs除具有自我更新和多向分化的潜能外,更具有很强的可塑性。无论是在体外实验、还是在体内实验,MSCs都可以向中枢神经系统(CNS)神经细胞分化,包括神经元、星形胶质细胞和少突胶质细胞等。在此对以下三个方面的问题进行综述:MSCs可塑性在CNS组织维护和修复中发挥作用的研究现状、MSCs可塑性发生的可能机制以及目前MSCs可塑性研究中面临的挑战。

缺氧缺血性脑病新生儿头颅CT与血清NSE及外周血细胞Smac mRNA的关系

目的探讨缺氧缺血性脑损伤新生儿血清神经元特异性烯醇化酶(NSE)和外周血单核细胞第二线粒体源的半胱天冬酶激活物(Smac)的mRNA的变化。方法65例新生儿在出生后24h采集血标本,2h内分离血清,用电发光化学法检测NSE浓度。沉淀的血细胞用Trizol一步法提取RNA,通过逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测分析其中Smac mRNA的水平。1周左右行头颅CT检查。结果影像学检查阳性组(26例)和阴性组(39例)血清NSE浓度分别为(32.73±10.20)μg/L和(14.23±7.14)μg/L,(P<0.01),以β-肌动蛋白为内参照的Smac mRNA相对水平分别为(0.43±0.12)和(0.19±0.08),(P<0.01)。血清NSE浓度与5-minApgar评分呈负相关(r=-0.849,P<0.01),与Smac mRNA相对量呈高度正相关(r=0.975,P<0.01)。结论外周血血清NSE和Smac mRNA水平可作为临床早期评价新生儿脑损伤严重程度的客观指标。

个体化执行方案在哮喘防治中的作用分析

近年来，随着对哮喘的免疫学发病机制认识不断加深有关探讨氨茶碱、氯雷他定在哮喘防治中的抗炎作用及其与丙酸倍氯米松(BDP)的抗炎协同性的临床研究也在深入。现将我们从1998年底开始、有完整登记的175例哮喘病例作一回顾性分析。

口服益生菌对新生儿高胆红素血症疗效及其免疫功能的影响

目的探讨口服益生菌佐治新生儿高胆红素血症的临床疗效及其对患儿免疫功能的影响。方法 68例高胆红素血症新生儿随机分为益生菌组(36例)和对照组(32例)。益生菌组在对照组光疗基础上连续加予益生菌口服14d。观察治疗前后新生儿血清总胆红素(TBil)水平变化、胃肠道不良反应及相关免疫学指标。结果治疗后益生菌组TBil水平明显低于对照组[(131.75±28.41)μmol/Lvs.(160.56±26.97)μmol/L](P<0.01)。外周血中CD4+细胞比例、CD4+/CD8+数值以及IgM水平[(0.55±0.16)g/Lvs.(0.29±0.14)g/L]较对照组均明显增加(P<0.01)。益生菌组胃肠道副作用发生率明显低于对照组(19.44%vs.46.88%)(P<0.05)。结论加服益生菌治疗新生儿高胆红素血症可以明显增加退黄疗效,促进机体免疫功能,降低治疗期间副作用。

不同模式光疗对高胆红素血症新生儿的影响

目的探讨不同光疗方式对新生儿高胆红素血症的疗效与副作用。方法将112例高胆红素血症新生儿随机分为间断光疗Ⅰ组、Ⅱ组及持续光疗组。观察治疗前后各组患儿退黄效果、出现的副反应及对外周血单核细胞中第二线粒体源半胱天冬氨酸蛋白酶激活物(Smac)-mRNA的影响。结果光疗后持续光疗组与间断光疗Ⅰ、Ⅱ组间血清总胆红素(TSB)水平比较差异均有统计学意义(P<0.01);持续光疗组副作用要明显高于间断光疗Ⅰ组、Ⅱ组(P<0.01),但各组患儿治疗前、后Smac-mRNA相对值的比较差异均无统计学意义。结论3种光疗模式治疗高胆红素血症均有效,且无严重的细胞毒性损伤。两种间断模式的光疗副作用明显少于持续光疗模式,更易为患儿家属所接受。持续光疗因其疗效显著可用于重症患儿。

支原体肺炎患儿血清可溶性细胞间粘附分子-1及心肌酶谱联合检测的意义

目的:探讨检测支原体肺炎(MPP)患儿血清可溶性细胞间粘附分子-1(sICAM-1)及心肌酶谱在急性期与恢复期的变化和临床意义。方法:检测60例MPP患儿在急性期与恢复期血清sICAM-1及心肌酶谱的水平,同时与60例健康体检儿的相应检测结果进行比较。结果:①MPP患儿急性期血清sICAM-1、心肌酶谱水平明显高于恢复期和正常对照组(P<0.01);②MPP患儿恢复期血清sICAM-1、心肌酶谱水平与对照组相比无统计学差异(P>0.05);③60例MPP患儿急性期出现心肌酶异常(生化指标1项以上升高)48例,占80.00%。其中乳酸脱氢酶增高29例,占48.33%;磷酸肌酸激酶增高21例,占35.00%;门冬氨酸转氨酶增高17例,占28.33%;肌酸激酶同工酶增高12例,占20.00%;④急性期心肌酶异常的48例MPP患儿血清sICAM-1水平均高于心肌酶正常的12例MPP患儿(P<0.01)。结论:MPP患儿急性期大多有不同程度的心肌细胞损害,急性期存在心肌损害的MPP患儿血清sICAM-1水平明显增高,故急性期联合检测血清sICAM-1及心肌酶谱的水平有利于早期发现、早期诊断MPP患儿的心肌损害,及时加用营养心肌的药物,以免引起心肌的永久性损害。

Par-4基因沉默对人骨髓间充质干细胞中Smac基因表达和半胱氨酸蛋白水解酶3酶活性的影响及其抗凋亡作用

目的研究Par-4基因沉默对人骨髓间充质干细胞（hBMSC）中Smac基因表达和半胱氨酸蛋白水解酶（Caspase）3酶活性的影响及其抗凋亡作用。方法原代培养hBMSC。谷氨酸诱导hBMSC凋亡。设计和合成两对针对Par-4基因mRNA的小RNA干扰（siRNA）序列（Par-4-SiRNA-1、2），构建真核细胞表达载体，用脂质体介导转染hBMSC，利用G418筛选稳定表达细胞株。实时荧光定量PCR法检测Par-4 mRNA表达水平。流式细胞术测定细胞凋亡百分率。Western印迹测定Smac蛋白表达量。比色法测定Caspase-3酶的活性。结果设计的Par-4-SiRNA-1、2可显著诱导hBMSC中Par-4基因沉默，Par-4 mRNA水平分别被降低88％、67％，谷氨酸诱导hBMSC凋亡，凋亡百分率为（58．9±8．9）％。Par-4-SiRNA-1可显著拈抗谷氨酸的诱导凋亡作用，凋亡百分率降为（37．2±6．3）％（F=58．26，P〈0．01）。Par-4-SiRNA-1对谷氨酸诱导的hBMSC中Smac蛋白表达上凋（P〈0．01）和Caspase-3酶活性上调（P〈0．01）有显著的抑制作用（P〈0．01）。结论Par-4基因沉默能拈抗谷氨酸对hBMSC凋亡的诱导作用。其机制可能与Smac基因表达和Caspase-3酶活性被抑制有关。