正常人胆囊组织基因表达谱的研究

目的:建立正常人胆囊组织基因表达目录。方法:采用含17000cDNA克隆的基因微矩阵与2例正常胆囊之cDNA杂交,取基因表达平均值,分析胆囊的基因表达谱。结果:正常胆囊有11047条基因表达,其前10位高表达基因与平滑肌收缩及物质转运有关。在前200位高表达的基因中,离子通道和转运蛋白、蛋白翻译和合成类以及发育相关类基因占多数。在胆囊所有表达的基因中,12、2、21号染色体表达的数目最多。另外,21条胆石病候选基因在胆囊中有表达,其中主要为脂类代谢相关基因。两条胆囊特异性表达基因:NPC1L1、SLC17A2。结论:胆囊高表达的基因可能与胆囊收缩和胆汁浓缩有关,胆囊不仅参与机体的消化功能,还参与调节脂类代谢平衡。

升清胶囊对豚鼠胆石病相关基因的影响

目的:探讨中药升清胶囊在分子层面防治胆石病的机制。方法:雌性豚鼠60 只,随机分成正常组(喂正常饮食作为对照)、模型组(喂低蛋白饮食致石)和中药组(喂低蛋白饮食致石加中药升清胶囊治疗)。6周后处死并取材,观察动物成石情况,检测肝组织胆红素尿苷二磷酸葡萄糖醛酸基转移酶(bilirubin UDP glucuronosyltransferase, B UGT) mRNA 及胆固醇7α羟化酶( cholesterol 7α- hydroxylase, CYP7A1 )mRNA表达。结果:各组豚鼠成石比例分别为正常组2/14、模型组为9/11、中药组为4/14,组间有显著差异(P<0.05),正常组和中药组豚鼠的肝组织B UGT- mRNA及CYP7A1 mRNA表达明显高于模型组(P<0.05)。结论:中药升清胶囊可能是通过上调肝组织中B -UGT mRNA和CYP7A1 mRNA的表达,干预胆红素和胆固醇代谢,抑制致石性胆汁形成,起到预防胆结石的作用。

养肝柔肝法逆转豚鼠成石胆汁致石性的实验研究

目的 探讨养肝柔肝中药养肝利胆颗粒剂逆转成石胆汁致石性的机制。方法 将 6 0只豚鼠随机分为正常组、模型组、治疗组 ,每组 2 0只。分别喂食正常饲料、致石饲料、致石饲料加养肝利胆颗粒 ,4周后处死取材 ,检测胆囊成石率、胆汁总胆汁酸 (TBA)、胆汁总胆红素 (TBIL)、胆汁结合胆红素 (CB)、胆汁非结合胆红素 (UCB)、胆汁钙离子 ,并进行胆汁胆红素组分HPLC分析。结果 (1)正常组成石率为 5 % ,模型组为 81.2 5 % ,治疗组为 31.2 5 % (P <0 .0 5 )。 (2 )模型组胆囊胆汁中TBIL、CB、UCB及Ca2 + 均高于治疗组及正常组 ,TBA低于正常组 ,治疗组TBA低于正常组 ,Ca2 + 高于正常组 (P <0 .0 5 )。(3)模型组单结合胆红素 (MCB)值高于治疗组及正常组 ,双结合胆红素 (DCB)低于治疗组及正常组 (P <0 .0 1) ,治疗组DCB值低于正常组 ,各组UCB的完整峰面积 (IPA)值无明显区别。 (4)模型组的MCB百分比和UCB百分比高于治疗组及正常组 ,DCB百分比低于治疗组及正常组 (P <0 .0 5 ) ,治疗组的MCB百分比也高于正常组 ,同时DCB低于正常组。结论 养肝柔肝中药能显著降低豚鼠胆囊色素性结石的成石率 。

养肝柔肝法防治胆色素结石中干预胆道动力学异常的机理研究

目的 :利用生物学技术从胆道动力学角度探讨养肝柔肝法防治胆色素结石的机理。 方法 :清洁级豚鼠共 6 0只 ,随机分为正常对照组 ,致石饲料造模组、养肝利胆颗颗粒剂治疗组 ,饲养 4周观察胆囊成石情况 ,检测血浆CCK含量、胆囊CCK AR、十二脂肠粘膜CCK 8分泌细胞免疫组化、Oddi括约肌调宁蛋白 (Calponin ,Cap)表达。 结果 :(1)模型组成石率明显增高 (P <0 0 5 )。 (2 )模型组血浆CCK水平显著降低 (P <0 0 1)。 (3)模型组胆囊平滑肌CCK R数目明显减少 (P <0 0 5 ) ,治疗组与正常组之间无明显差异 (P >0 0 5 )。 (4 )模型组十二指肠CCK 8内分泌阳性数明显减少 (P <0 0 1) ,治疗组与正常组之间无显著性差异 (P >0 0 5 )。 (5 )模型组Oddi括约肌调宁蛋白 (Cap)表达 ,条带灰度密度值明显小于正常组和治疗组 (P <0 0 5 )。结论 :(1)养肝柔肝法具有稳定的防石作用。 (2 )养肝柔肝法可提高血和肠腔内CCK的浓度 ,改善胆道动力学。 (3)养肝柔肝法可提高CCK AR数目 ,使CCK缩胆囊的效应增加。 (4 )养肝柔肝法可以使Cap表达增加 ,增强了对Oddi括约肌收缩抑制作用 ,使胆道动力系统协调性增强。

胆固醇结石病人肝脏胆小管侧膜ATP基因表达差异的研究

目的:本研究旨在测定比较胆石病人与对照组肝脏胆小管侧膜转运蛋白表达差异,以探讨胆石病发生的分子生物学机制。方法:研究包括20例胆囊胆固醇结石病人和11例无胆石症的对照。测定血清胆固醇和甘油三酯、胆汁胆固醇、胆汁酸和磷脂含量,采用Carey表计算胆汁胆固醇饱和指数。实时定量PCR法测定肝脏胆小管侧膜转运蛋白(ABCG5、ABCG8、ABCBll和ABCB4)mRNA的表达量。结果:胆石组血清胆固醇低于对照组(P<0.05)。胆石组胆汁胆固醇摩尔百分比和胆固醇饱和指数较对照组显著升高(P<0.01)。胆石组肝脏胆小管侧膜胆固醇转运蛋白ABCG5和ABCG8表达高于对照组,且后者差异具有统计学显著性(ABCG5:31.44±3.17Vs25.72±3.27,ABCG8:27.53±3.06vs17.81±2.23)。ABCBll和ABCB4表达在两组间差异无显著性。结论:本研究显示,胆石病主要病理生理异常为胆汁胆固醇过饱和,与肝脏胆小管侧膜胆固醇转运蛋白ABCG5和ABCG8的mRNA表达增加有关。

胆固醇结石病人肝脏SRBI及其转录调节因子LRH-1基因表达的研究

目的:研究胆固醇结石病人BI型清除剂受体(scavengerreceptorBtypeI,SRBI)及其转录调节因子肝脏受体类似物1(liverreceptorhomologue1,LRH-1)的表达,以探讨胆固醇结石发病的机制。方法:对20例胆囊胆固醇结石病人和10例无胆石症对照者测定血清脂质、胆汁成分和计算胆汁胆固醇饱和指数。以实时定量PCR法测定肝脏SRBI和LRH-1mRNA的表达量。结果:胆石组胆石平均胆固醇含量(86.68±5.26)%,均为胆固醇结石。胆石组病人血清高密度脂蛋白(HDL)显著低于对照组[(0.86±0.62)mmol/L比(1.42±0.56)mmol/L,P<0.01]。胆石组胆汁胆固醇在总脂中的摩尔百分比和胆固醇饱和指数显著高于对照组[(7.80±2.06)mol%比(5.26±2.80)mol%,P<0.05]。胆石组SRBI基因mRNA表达量与对照组比较显著增高(2.48±0.44比1.00±0.23,P<0.05),胆石组LRH-1表达也高于对照组(2.05±0.29比1.00±0.28,P<0.05)。结论:胆固醇结石病的主要病理生理异常为胆汁胆固醇过饱和。肝脏LRH-1、SRBI表达增高,参与了胆固醇过饱和胆汁形成,并促进了胆固醇结石形成。

养肝柔肝法对胆色素结石患者术后T管胆汁成分的影响

目的 观察具有养肝柔肝作用的中药养肝利胆颗粒剂对胆色素结石患者术后T管胆汁成分的影响 ,为胆石病的三级预防提供佐证。 方法 选取 11例行胆总管控查 +T管引流术治疗的原发性胆管结石患者 ,于术后服用养肝利胆颗粒剂 ,取服药前及服药后 1、2、3、7d胆汁 ,检测胆汁总胆汁酸 (TBA)、总胆红素 (TBIL)、结合胆红素 (CB)、非结合胆红素 (UCB)。并以HPLC方法作胆汁胆红素组分分析。 结果 (1)胆汁TBIL、TBA治疗后稳定的上升 (P <0 0 5 )。 (2 )单结合胆红素 (MCB)与UCB呈现逐步降低 (P <0 0 5 )。 (3)MCB与UCB的比例服药后有较大幅度的升高 (P <0 0 5 ) ;同时 ,双结合胆红素 (DCB)与MCB及UCB的比例也逐步上升 (P <0 0 5 )。 (4)在胆红素各组分中 ,治疗后MCB及UCB的百分比在逐渐下降 ,DCB的百分比稳步上升 (P <0 0 1)。 结论 养肝柔肝法能降低胆色素结石患者T管胆汁中的MCB和UCB ,增加总胆汁酸的含量 ,降低其胆汁成石性 ,可用于临床胆色素类结石的预防 。

清热通下法对急性胆道感染时IL-2和TNF的调节作用

目的:探讨中医药对急性胆道感染时IL-2、TNF的调节作用。方法:SD大鼠制成急性胆道感染模型,分成A组(模型组)、B组(中药治疗组)、C组(抗生素治疗组)、D组(胆总管结扎组):E组(假手术组)。分别于手术第3、5天取血,做IL-2、TNF的检测。结果:第3天时A组的TNF明显高于其它各组,E组最低,而IL-2在A组最低,E组最高,B、C两组处于A、E两组之间。第5天时TNF、IL-2的总体趋势与第3天相同。结论:中医药在急性胆道感染时对IL-2、TNF有调节作用。

基因芯片法检测胆囊胆固醇结石病人肝脏羧肽酶E的表达

目的:利用基因芯片和实时定量聚合酶链反应(real-time PCR)分析胆囊胆固醇结石病人肝脏中羧肽酶E(carboxypeptidase E,CPE)的mRNA表达,探讨CPE与胆囊胆固醇结石形成可能相关的分子机制。方法:检测病人的血清总胆固醇、三酰甘油以及胆石、胆汁成分测定。正常肝细胞株(HL-7702)为共同参照,用含10 000个cDNA克隆的芯片对8份肝脏标本样品(包括6例胆囊结石和2例无胆囊结石对照)进行基因表达谱对比分析;通过实时PCR验证阳性结果。结果:有效表达基因6 068个,与正常对照组比较,胆固醇结石病人的肝脏有67条差异表达基因,其中CPE基因呈下调表达,经实时PCR验证与芯片筛选结果一致。进一步比较另12例胆固醇结石病人和8例对照组的肝脏组织CPE表达,CPE在胆囊胆固醇结石病人肝脏中的表达也显著低于对照组(39.52±6.21比124.50±36.36,P<0.05)。结论:肝脏CPE表达下降可能与胆囊胆固醇结石的形成有关。

105例普外患者手术前后舌象变化的观察

为探讨普外手术前后舌象变化的规律 ,将 10 5例普外患者分成非腹部手术、腹部择期手术及腹部急诊手术 3组 ,分别观察术前、术后 6～ 8小时、术后禁食第 1、2、≥ 3天及术后进食第 1、2、≥ 3天 8个时间段的舌象。结果 :腹部择期手术组术前腻苔占 4 5 7% ,腹部急诊手术组在术后进食第 2、≥ 3天黄苔比术前低 ,各组手术后 6～ 8小时少津比例增多 ,腹部手术两组于术后进食第 2、≥ 3天及术后进食第 1天总腻苔率均比术前高 ,且比同时段非腹部手术组高。由结果可见 ,普外手术后 6～ 8小时少津舌象增多 ,腹部手术患者术后舌象呈少津→苔腻→正常的变化。

清热通下法对急性胆道感染大鼠肝细胞凋亡影响的研究

目的 :探讨清热通下法对急性胆道感染大鼠肝细胞凋亡的影响。方法 :SD大鼠制成急性胆道感染模型 ,分成A组(模型组 )、B组 (中药治疗组 )、C组 (抗生素治疗组 )、D组 (胆总管结扎组 )、E组 (假手术组 )。于手术第 3天取材 ,做肝细胞凋亡的检测。结果 :A组的凋亡细胞数值明显增高 ,B组凋亡细胞数明显小于其它各组。结论

肝脏基因表达谱在急慢性胆囊炎中的差异

目的探讨肝脏基因表达谱在急、慢性胆囊炎之间的差异。方法取1例急性胆囊炎、4例慢性胆囊炎患者的肝脏组织,提取其总RNA,纯化成mRNA后,逆转录成cDNA,分别基因芯片杂交,分析其数据,并以2例正常肝脏组织作为对照。同时,患者的胆囊组织也经过相应处理并分析最终的芯片杂交结果。以正常对照的基因表达强度的均数与病变组织进行对照,分别分析胆囊和肝脏的相关系数。结果急性胆囊炎表现为明显的充血,水肿以及中性粒细胞浸润;慢性胆囊炎表现为少量腺体增生和淋巴细胞浸润;而正常胆囊表现为黏膜完整,极少数炎症细胞浸润。而在急、慢性胆囊炎患者以及正常对照的肝脏形态学表现均十分相似。慢性胆囊炎患者的胆囊与正常胆囊的相关系数为0.89～0.93(均值0.90),而急性胆囊炎的相关系数为0.46;在肝脏组织中,相应的数据分别为0.92～0.95(均值0.94)和0.80。结论基因芯片能够区分出肝脏在急、慢性胆囊炎中基因表达谱的差异,其结果将可以应用于炎症反应综合征的早期诊断。

法尼醇类受体基因在胆囊中的表达

目的:探讨法尼醇类受体基因(FXR)的表达与胆囊的关系。方法:采用含17000cDNA克隆的基因微矩阵,与2例正常胆囊之cDNA杂交,发现FXR基因信号后,进一步进行RT-PCR和测序验证。结果:基因芯片能够检测出FXR在正常胆囊中的表达,其平均灰度值为16.80。在进一步的RT-PCR实验中,扩增出FXR的特异性片段,为352碱基。该PCR片段经测序后,其结果在GENEBANK数据库经BLAST比对,证实其同源性与FXR一致。结论:FXR在胆囊中表达,提示该基因可能还有新的未知功能。

锦红片对实验性急性胆道感染大鼠血清细胞因子IL-6和IL-2含量的影响

为探讨锦红片 (红藤、蒲公英、生大黄等组成 )对急性胆道感染的作用机理 ,将SD大鼠结扎胆总管 ,并向管内注入致病性大肠杆菌制成急性胆道感染模型 ,于造模前一天开始灌胃 1%锦红片悬液 ,连续 6天 ,在造模第三天和第五天各抽取腹腔静脉血 ,分别采用放射免疫法和ELISA法检测血清细胞因子IL -6及IL -2含量。结果 :造模第三天时与模型组比较 ,锦红片组IL -6含量显著降低 (P <0 .0 5 ) ,IL -2含量显著升高 (P <0 .0 1) ,与庆大霉素组比较则均无差异 ;造模第五天时的总体趋势与第三天时相同。

胆囊结石病家系9号染色体基因定位研究

目的研究胆囊结石病基因在9号染色体的位置。方法用微卫星位点为遗传标记对12个胆囊结石病家系进行基因组扫描,用非参数分析软件GENEHUNTER和参数分析软件BATCHLINK进行连锁分析,寻找9号染色体上与胆囊结石病连锁的位点及区域。结果D9S1682的LOD值207,NPL值192,P=004。进行分层分析发现,血液甘油三酯升高组D9S1682的LOD值由207上升到240。结论9号染色体上存在胆囊结石病基因位点,该位点可能和伴高甘油三酯血症胆囊结石病有关。

胆囊胆固醇结石患者肝脏受体类似物1基因表达差异的研究

目的研究胆囊胆固醇结石患者肝脏受体类似物1(LRH-1)表达,探讨其与胆固醇结石病发病的关系。方法27例胆囊胆固醇结石患者,男6例,女21例,平均年龄52．44岁。14例无胆石症者为对照(肝脏肿瘤2例,胆囊息肉患者12例),男9例,女5例,平均年龄47．50岁。测定胆汁脂类成分和计算胆汁胆固醇饱和指数。实时定量PCR法测定肝脏LRH-1 mRNA的表达量。结果胆石组LRH-1表达14．18±9．37,高于对照组7．86±6．19,(P＜0．05),胆石组胆汁呈胆固醇过饱和(1．17±0．27)。结论本研究提示肝脏LRH-1表达增高与胆囊胆固醇结石病有关。