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人破骨细胞形成抑制因子成熟肽基因在大肠杆菌中的融合表达
1
作者
张兴群
王梁华
+2 位作者
袁勤生2
缪辉南
焦炳华
《第二军医大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2004年第10期1086-1089,共4页
目的 :在大肠杆菌中高效融合表达人破骨细胞形成抑制因子 (osteoclastogenesis inhibitory factor,OCIF)成熟肽基因。方法 :利用 PCR从人肝细胞文库中扩增得到 OCIF成熟肽编码基因序列 ,将其与 p MD18- T连接 ,转化大肠杆菌 K80 2 ,筛...
目的 :在大肠杆菌中高效融合表达人破骨细胞形成抑制因子 (osteoclastogenesis inhibitory factor,OCIF)成熟肽基因。方法 :利用 PCR从人肝细胞文库中扩增得到 OCIF成熟肽编码基因序列 ,将其与 p MD18- T连接 ,转化大肠杆菌 K80 2 ,筛选得到阳性重组克隆载体 p MD18- OCIFm,双酶切重组克隆质粒 p MD18- OCIFm得到 OCIF成熟肽基因 ,将其定向插入p MAL- c2载体中 ,转化大肠杆菌 TB1。筛选得到阳性重组表达子后进行诱导表达。 结果 :所获得的 OCIF成熟肽基因编码序列经测序与 Gen Bank报道的完全一致。所表达的产物经 SDS- PAGE分析可见在相对分子质量 80 0 0 0处出现一条特殊条带 ,与预期的相对分子质量一致。Western印迹证实了表达产物的正确。表达产物在高剂量 (>12 0 ng/L)时可诱导体外培养小鼠成熟破骨细胞的凋亡。 结论 :成功获得了人 OCIF成熟肽基因的克隆并实现了其在大肠杆菌中的融合表达。
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关键词
破骨细胞形成抑制因子
基因克隆
融合蛋白
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职称材料
题名
人破骨细胞形成抑制因子成熟肽基因在大肠杆菌中的融合表达
1
作者
张兴群
王梁华
袁勤生2
缪辉南
焦炳华
机构
第二军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室
华东理工大学国家生物反应器中心
出处
《第二军医大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2004年第10期1086-1089,共4页
基金
国家自然科学基金 ( 3 0 0 0 0 0 78)
国家高新技术发展规划 ("863"计划 )课题 ( 2 0 0 1AA2 15 44 1)
文摘
目的 :在大肠杆菌中高效融合表达人破骨细胞形成抑制因子 (osteoclastogenesis inhibitory factor,OCIF)成熟肽基因。方法 :利用 PCR从人肝细胞文库中扩增得到 OCIF成熟肽编码基因序列 ,将其与 p MD18- T连接 ,转化大肠杆菌 K80 2 ,筛选得到阳性重组克隆载体 p MD18- OCIFm,双酶切重组克隆质粒 p MD18- OCIFm得到 OCIF成熟肽基因 ,将其定向插入p MAL- c2载体中 ,转化大肠杆菌 TB1。筛选得到阳性重组表达子后进行诱导表达。 结果 :所获得的 OCIF成熟肽基因编码序列经测序与 Gen Bank报道的完全一致。所表达的产物经 SDS- PAGE分析可见在相对分子质量 80 0 0 0处出现一条特殊条带 ,与预期的相对分子质量一致。Western印迹证实了表达产物的正确。表达产物在高剂量 (>12 0 ng/L)时可诱导体外培养小鼠成熟破骨细胞的凋亡。 结论 :成功获得了人 OCIF成熟肽基因的克隆并实现了其在大肠杆菌中的融合表达。
关键词
破骨细胞形成抑制因子
基因克隆
融合蛋白
Keywords
osteoclastogenesis inhibitory factor
gene clone
fusion protein
分类号
Q78 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
人破骨细胞形成抑制因子成熟肽基因在大肠杆菌中的融合表达
张兴群
王梁华
袁勤生2
缪辉南
焦炳华
《第二军医大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2004
0
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