金黄色葡萄球菌agr基因敲除及其对膜泡毒力影响

目的利用同源重组技术构建金黄色葡萄球菌RN4220附属基因调节系统(agr)的敲除株,探讨agr基因缺失对金黄色葡萄球菌分泌膜泡毒力的影响。方法分别扩增agr基因的上下游同源臂,利用重叠PCR获得agr基因上下游同源臂的融合片段,经酶切后连接敲除载体PYT3,构建同源重组质粒pYT3::Δagr,电转化至金黄色葡萄球菌RN4220,利用pYT3质粒对温度敏感的特点筛选agr缺失的突变株。分别制备野生菌RN4220和突变株RN4220::Δagr的膜泡,小鼠毒力实验观察agr基因缺失后对金黄色葡萄球菌膜泡毒力的影响。结果同源重组质粒pYT3::Δagr通过酶切鉴定证明构建成功;经PCR及DNA测序证实获得金黄色葡萄球菌RN4220 agr缺失突变株,重组效率为5.6%;agr突变株与野生株相比,其分泌膜泡的毒力大大降低,72 h内小鼠存活率为100%。结论 agr基因缺失后能够显著降低膜泡的毒力。

广州地区耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的分子分型及耐药性分析

目的了解广州地区耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(methicillin-resistant Staphylococcus aureus,MRSA)分子型别及其对临床常用抗生素的耐药情况,为防控MRSA感染提供依据。方法收集2010年10月至2011年4月广州地区两家教学医院临床分离的MRSA 142株,应用SCCmec、spa、多位点序列分型(multilocus sequence typing,MLST)、脉冲场凝胶电泳(pulsed-field gel electrophoresis,PFGE)等方法进行分子分型,检测这些菌株对苯唑西林、克林霉素等17种临床常用抗生素的药物敏感性,分析临床MRSA的耐药情况。结果 142株MRSA中121株为医院获得型金葡菌(HA-MRSA),20株为社区获得型金葡菌(CA-MRSA),1株未定型MRSA。这些MRSA可分为16种spa型,8种ST型及13种PFGE型。HA-MR-SA中的ST239-MRSA-Ⅲ-t030、ST239-MRSA-Ⅲ-t037和ST5-MRSA-Ⅱ-t002为主要流行克隆,也发现CA-MRSA中ST59-MR-SA-Ⅳ-t437克隆的流行,且这些流行克隆有特定的耐药谱。结论广州地区流行的金葡菌仍以HA-MRSA为主,同时也有一定量的CA-MRSA检出和传播,且CA-MRSA的多重药物敏感性已在下降。

乌鲁木齐地区金黄色葡萄球菌分离株的分子分型与耐药性分析

目的了解乌鲁木齐地区金黄色葡萄球菌临床分离株的分子特征及其对临床常用抗生素的耐药情况。方法收集2010年6月至2012年12月期间乌鲁木齐地区一所大型综合医院临床分离的86株金黄色葡萄球菌,在鉴定区分耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(methicillin-resistant Staphylococcus aureus,MRSA)和甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌(methicillin-susceptible Staphylococcus aureus,MSSA)的基础上,应用SCCmec分型、spa分型、多位点序列分型(multilocus sequence typing,MLST)、脉冲场凝胶电泳分型(pulsed-field gel electrophoresis,PFGE)、agr分型等葡萄球菌分子分型方法进行分析,检测pvl毒力基因的携带率,检测菌株对苯唑西林、红霉素、四环素等13种临床常用抗生素的耐药性,分析菌株的耐药情况及耐药基因。结果 86株金葡菌中31株为MRSA,55株为MSSA。31株MRSA分为8种spa型和7种ST型,优势流行克隆为ST239-MRSA-Ⅲ-t030(71%,22/31)。55株MSSA分为23种spa型、16种ST型和8个PFGE聚类组,agrⅠ型占56.4%(31/55)。MSSA菌株的pvl毒力基因检出率为49.1%(27/55),MRSA为38.7%(12/31)。药敏结果显示31株MRSA均为多重耐药(multidrugresistant,MDR)菌株,55株MSSA中有31株为MDR菌株。结论乌鲁木齐地区流行的MRSA以ST239-MRSA-Ⅲ-t030为主,而MSSA表现出较高遗传多样性,发现有t11413,ST121等新的型别流行。

重庆地区耐甲氧西林金黄色葡萄球菌主要流行克隆更替的机制研究

目的探讨重庆地区耐甲氧西林金黄色葡萄球菌菌株ST239-MRSA-Ⅲ-t030替代ST239-MRSA-Ⅲ-t037克隆的机制。方法选择重庆地区分离的ST239-MRSA-Ⅲ-t030和ST239-MRSA-Ⅲ-t037临床株,检测各菌株的生长曲线,观察菌落形态,分析菌株的药物敏感谱;再通过体外、体内竞争实验和交叉抑制实验深入探讨ST239-MRSA-Ⅲ-t030替代ST239-MRSA-Ⅲ-t037的机制。结果 ST239-MRSA-Ⅲ-t030菌株较ST239-MRSA-Ⅲ-t037有更短的生长迟缓期,后者在固体培养基上生长的菌落相对较小,且都对复方新诺明耐药,对利福平敏感,这与ST239-MRSA-Ⅲ-t030菌株不同(大多数对复方新诺明敏感,对利福平都耐药)。ST239-MRSA-Ⅲ-t030菌株在体外和体内都表现出比ST239-MRSA-Ⅲ-t037菌株更强的生存竞争优势,但两克隆的菌株间并不存在明显的交叉抑制现象。结论 ST239-MRSA-Ⅲ-t030克隆的生存竞争优势和独特的耐药表型可能是其成功替代ST239-MRSA-Ⅲ-t037而成为第一流行克隆的原因。

登革病毒感染人原代树突状细胞(CD209,-139A/-336A)模型的建立

目的建立以人原代树突状细胞(dendritic cells,DCs)为宿主的登革病毒(dengue virus,DENV)感染模型。方法采集基因型为CD209,-139A/-336A的人抗凝血标本,分离获得DCs前体细胞,利用rh GM-CSF及rh IL-4诱导,获得未成熟DCs。瑞氏染色鉴定DCs的形态,流式细胞术鉴定DCs的分化效率,淋巴细胞增殖实验鉴定DCs的生物学功能。以I型登革病毒GZ2002株为模式病毒进行病毒感染实验,建立并评估以人原代DCs为宿主的登革病毒感染模型。结果分离获得的DCs前体细胞经细胞因子刺激后成功分化为未成熟DCs,分化效率高达90%。获得的DCs具有典型的细胞形态及生物学功能,可有效刺激淋巴细胞增殖。登革病毒GZ2002株能成功感染诱导获得的原代DCs,促进DCs成熟,并复制产生感染性子代病毒,证明细胞感染模型成功建立。结论成功建立以DCs为宿主的登革病毒感染模型。

终末期肾病血液透析患者血清miR-155和miR-182的表达及意义

目的探究微小RNA miR-155和miR-182在终末期肾病血液透析患者血清中的表达及意义。方法收集2019年5月—2022年5月海军第九七一医院、青岛市市立医院、青岛市海慈医院接受诊治并进行血液透析的终末期肾病患者112例为终末期肾病组,根据生存情况分为生存亚组79例和死亡亚组33例,并以同期体检健康者112例为健康对照组。采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测血清miR-155和miR-182表达;Pearson法分析终末期肾病组患者血清miR-155和miR-182水平的相关关系;Logistic回归分析终末期肾病透析患者预后的影响因素;受试者工作特征(ROC)曲线分析血清miR-155和miR-182表达水平对终末期肾病血液透析患者预后的预测价值。结果终末期肾病组患者血清miR-155和miR-182表达水平均显著高于健康对照组(t/P=12.719/<0.001,27.901/<0.001);2亚组患者男女比例、年龄、BMI、原发疾病比例、透析时间、血磷(P)、总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)比较差异无统计学意义(P>0.05),与生存亚组比较,死亡亚组患者血红蛋白(Hb)和白蛋白(Alb)显著降低(t/P=15.069/<0.001,9.629/<0.001),血钙(Ca)、高敏C反应蛋白(hs-CRP)及血清miR-155、miR-182表达升高(t/P=21.174/<0.001,40.68/<0.001,6.629/<0.001,8.497/<0.001);终末期肾病血液透析患者血清miR-155和miR-182表达呈正相关(r=0.516,P<0.001);Hb低、血Ca高、hs-CRP高、Alb低、miR-155高和miR-182高均是终末期肾病透析患者预后的独立危险因素[OR(95%CI)=3.189(1.052~9.670),4.387(1.175~16.375),5.527(1.220~25.048),2.058(1.251~3.386),5.561(2.413~12.817),3.189(1.052~9.670)];血清miR-155、miR-182及二者联合的曲线下面积(AUC)分别为0.827、0.793、0.956,二者联合优于血清miR-155、miR-182各自单独预测(Z/P=2.251/0.024,2.797/0.005)。结论终末期肾病血液透析患者血清miR-155和miR-182表达水平升高,miR-155和miR-182联合可能更好地预测终末期肾病血液透析患者预后。

海军医院卫勤装备模块化建设与思考

目的探索构建与海上多样化任务需求相适应的卫勤装备模块化建设路径。方法分析卫勤装备及任务需求,应用模块化概念,对海上卫勤装备编组进行模块优化。结果构建5个单元21个模块的体系框架,实现标准化编组、模块化应用以及信息化存储。结论海军医院卫勤装备模块化具备标准化编组、灵活化运用、高效率展开的特点,有力促进海上卫勤分队与舰艇卫生力量的紧密协同,满足海上多样化平战任务卫勤保障需求。