重组甲硫氨酸酶调控PI3K/Akt/Glut-1通路抑制有氧糖酵解促进胃癌细胞凋亡

目的探讨重组甲硫氨酸酶(rMETase)对胃癌细胞增殖抑制作用及潜在的分子机制。方法 r METase(终浓度为0.00、1.25、2.50 mmol/L)处理胃癌SGC-7901细胞72 h,采用CCK-8法检测SGC-7901细胞活力,倒置显微镜下观察SGC-7901细胞形态变化,平板细胞克隆形成实验检测SGC-7901细胞克隆形成率,流式细胞术分析胃癌细胞凋亡情况及细胞周期变化,比色法和荧光酶标仪检测r METase对胃癌细胞葡萄糖吸收和乳酸、ATP释放的影响,Western blot分析r METase对SGC-7901细胞PI3K/Akt通路、GLUT-1、糖酵解相关蛋白及凋亡蛋白的影响。结果 rMETase能够抑制SGC-7901细胞的增殖和克隆形成、诱导胃癌细胞S期周期阻滞、促进细胞凋亡(P<0.05);随着rMETase的浓度的增加,细胞吸收的葡萄糖降低,并伴随糖酵解产物乳酸和ATP的下降(P<0.001);Western blot结果显示,rMETase作用SGC-7901细胞后,PI3K、p-Akt/t-Akt、GLUT-1,糖酵解关键酶HK2、PFKM、LDHA、抑凋亡Bcl-2的蛋白表达下调,促凋亡蛋白Bax、Caspase-3表达上调(P<0.01)。结论 r METase可以通过抑制PI3K/Akt/GLUT-1通路的活性,抑制胃癌细胞有氧糖酵解,诱导胃癌细胞凋亡,抑制SGC-7901细胞增殖,r METase可能是一种潜在的胃癌治疗药物。

根皮素调控有氧糖酵解激活AMPK-P53信号通路抑制结肠癌细胞生长

目的探讨根皮素抑制结肠癌细胞生长的分子机制。方法不同浓度根皮素(phlortin)处理结肠癌SW-480细胞24 h,CCK-8法检测细胞的存活率并计算IC50,倒置显微镜下观察细胞形态变化,流式细胞术检测细胞周期变化及凋亡率,比色法检测细胞培养液中葡萄糖和乳酸浓度,荧光酶标仪检测细胞内ATP水平;Western Blot法检测各浓度根皮素对GLUT-1、糖酵解关键蛋白(HK2、PFKM)、腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)、Thr172p-AMPK、P53、凋亡相关蛋白(Bcl-2、Bax、Caspase-3)表达的影响。结果CCK-8检测结果显示,根皮素能明显抑制SW-480细胞的增殖(P<0.05),IC50为(22.44±1.3)μmol·L^-1。流式细胞术表明,根皮素能诱导G1期阻滞并促进凋亡(P<0.01,P<0.001)。比色法和荧光酶标仪检测结果显示,根皮素能限制SW-480细胞葡萄糖吸收和乳酸、ATP释放(P<0.01,P<0.0001),抑制有氧糖酵解。Western Blot检测结果表明,根皮素能下调GLUT-1、HK2、PFKM、Bcl-2蛋白(P<0.05,P<0.01,P<0.001,P<0.0001),上调P53、Bax、Caspase-3蛋白表达和Thr 172 p-AMPK、AMPK蛋白的比值(P<0.01,P<0.001,P<0.0001)。结论根皮素能够通过抑制GLUT-1蛋白表达限制SW-480细胞对葡萄糖的摄取,抑制细胞有氧糖酵解,最终激活AMPK-P53信号通路来诱导SW-480细胞凋亡,抑制其生长。

甲硫氨酸饥饿通过抑制程序性死亡配体1诱导胃癌细胞凋亡

目的研究甲硫氨酸饥饿诱导胃癌细胞凋亡的分子机制。方法利用癌症基因组图谱(TCGA)数据库分析胃癌组织中程序性死亡配体1(PD-L1)的表达及其与临床病理特征的关系。用普通培养液和甲硫氨酸饥饿培养液分别培养胃癌AGS细胞及抑制PD-L1表达的siRNA(siPD-L1)胃癌细胞,根据处理方法分为对照组、甲硫氨酸饥饿处理组、siPD-L1处理组、甲硫氨酸饥饿联合siPD-L1处理组,采用CCK-8检测胃癌细胞活力,吖啶橙/溴化乙锭双染检测胃癌细胞凋亡数目,流式细胞术检测胃癌细胞凋亡率,蛋白质印迹法检测胃癌细胞PD-L1、Bcl-2、B淋巴细胞瘤2相关X蛋白(Bax)、Caspase 3蛋白表达。starBase数据库分析PD-L1与Bcl-2抗凋亡蛋白家族(BCL2A1、MCL1、BCL2、BCL2L1)之间的联系。结果PD-L1在胃癌组织中高表达(P<0.01),且PD-L1的表达与胃癌G分级有关(P<0.01)。甲硫氨酸饥饿和siPD-L1处理均能够降低胃癌细胞存活率(P<0.01),促进凋亡(P<0.01),抑制PD-L1和Bcl-2表达(P<0.05),上调促凋亡蛋白Bax、Caspase 3表达(P<0.01);甲硫氨酸饥饿联合siPD-L1处理上述作用更强(P<0.05)。PD-L1与Bcl-2抗凋亡蛋白家族表达水平之间呈正相关(P<0.01),说明PD-L1是一个关键抗凋亡基因。结论甲硫氨酸饥饿通过抑制PD-L1的表达下调抗凋亡蛋白Bcl-2并上调促凋亡蛋白Bax和Caspase 3表达,从而诱导胃癌细胞凋亡。

胃癌中PD-L1表达调控机制的研究进展

免疫治疗在抗肿瘤中的效果令人瞩目,其中程序性死亡配体(PD-L1)受到广泛关注。近期,PD-L1抑制剂在胃癌治疗中取得了突破性进展。然而,胃癌中PD-L1表达调控机制复杂,存在相互交叉影响的现象。该文总结了胃癌中PD-L1蛋白功能、表达和预后的关系,着重梳理总结胃癌中PD-L1表达调控的机制,为胃癌的免疫治疗提供理论依据。