SETD2基因敲除前后鼻咽癌细胞中定量蛋白组学研究及差异信号富集

目的分析甲基转移酶SETD2表达改变对人鼻咽癌(NPC)细胞中蛋白表达谱的影响并富集差异信号通路。方法提取SETD2基因敲除细胞株CNE1SETD2-KO和野生型细胞CNE1WT的总蛋白,利用Tandem Mass Tag(TMT)标记蛋白质定量技术和串联质谱分析技术筛选出差异表达蛋白质,应用GO数据库对差异表达蛋白质进行注释和富集,应用KEGG数据库进行差异蛋白质涉及信号通路富集。结果以表达倍数(FC)≥1.2倍且P<0.05为筛选标准,SETD2基因敲除的CNE1细胞鉴别出2049个差异表达蛋白质,其中904个表达上调,1145个表达下调。GO功能注释结果表明,SETD2敲除后在生物过程(细胞过程及调节,细胞运动、代谢过程及细胞组分的生物合成)、分子功能(催化活性及分子结合、转录因子活性)和细胞组分(胞膜、细胞器、大分子复合物)等具有特征性。KEGG信号富集结果表明SETD2敲除主要影响与肿瘤关系密切的信号有MAPK、PI3K-Akt、Ras、Rap1、mTOR、Hippo、HIF-1、Wnt、AMPK、FoxO、ErbB、p53、JAK-STAT等。结论SETD2敲除后显著改变了NPC细胞中蛋白质表达特征并影响多条与肿瘤关系密切的信号通路,研究结果为NPC的发病机制和治疗标靶筛选提供了参考。

血清反应因子N端片段对鼻咽癌细胞增殖及迁移能力的影响

目的:探讨血清反应因子N端剪切片段(SRF-N)对鼻咽癌(NPC)细胞增殖和迁移能力的影响与机制。方法:应用SRF全长(SRF-Full,1~508 aa)、SRF-N(1~254 aa)及阴性对照(NC)慢病毒颗粒感染人NPC细胞系6-10B,经嘌呤霉素抗性筛选结合Western blot检测Flag标签化融合蛋白的表达获得单克隆细胞株,CCK-8实验分析细胞活力的改变,划痕损伤修复实验和Transwell实验分析细胞迁移能力,细胞-基质黏附实验分析细胞黏附能力,Western blot检测细胞增殖相关蛋白增殖细胞核抗原(PCNA)和上皮-间充质转化(EMT)相关指标的表达,双萤光素酶报告基因实验检测SRF-Full和SRF-N对Snail1启动子的调节效应。结果:成功用SRF-Full、SRF-N及NC慢病毒感染6-10B细胞,经嘌呤霉素抗性筛选结合Flag标签蛋白的表达获得相应的单克隆细胞株,分别标记为6-10B^(SRF-Full)、6-10B^(SRF-N)和6-10B^(NC)。与6-10B^(NC)细胞相比,6-10B^(SRF-Full)细胞活力、迁移能力和与基质的黏附能力均显著增强(P<0.01),而6-10B^(SRF-N)细胞较6-10B^(SRF-Full)细胞活力、迁移能力及黏附能力均显著下降(P<0.01)。6-10B^(SRF-Full)细胞中波形蛋白(vimentin)、神经钙黏素(N-cadherin)和Snail1的表达水平较6-10B^(NC)细胞显著升高(P<0.01),上皮钙黏素(Ecadherin)表达水平显著下降(P<0.01);而6-10B^(SRF-N)细胞中vimentin、N-cadherin和Snail1的表达水平较6-10B^(SRF-Full)细胞显著下降(P<0.05),E-cadherin表达水平显著上升(P<0.05)。双萤光素酶活性实验结果表明,与NC相比,SRFFull显著激活Snail1启动子(P<0.001);与SRF-Full相比,SRF-N显著抑制Snail1启动子活性(P<0.01)。结论:SRF-Full促进而SRF-N抑制NPC细胞的增殖和迁移;SRF-N抑制Snail1启动子活性而介导NPC的EMT;SRF-N具有潜在的抗NPC作用。

空气压缩机节能途径初探

围绕空气压缩机节能这一主题进行有关理论探讨，同时在实验室试验及煤矿现场试验的基础上，提出了从空气压缩机性能改进、输用气系统优化，以及采用新的节能技术等途径来实现空气压缩机组节能这一目标。

二阶导数光谱法测定酮基布洛芬栓的含量

本文采用二阶导数光谱法测定酮基布洛芬栓的含量,以255±1nm处为测定波长,排除了基质的干扰,具简便快速。平均回收率为99.80%,CV=1.51%

企业弹性福利计划实施路径分析

弹性福利计划通常称为"弹性福利",也称自助餐式福利、菜单式福利,是指企业在核定的人均年度福利预算范围内,提供可选的多种福利项目,给员工自主选择权,由员工根据本人及其家庭成员的需要自主选择福利产品或产品组合的一种福利管理模式。

一步一管PCR法检测淋病奈瑟菌在公安工作中的应用

一步一管ＰＣＲ法检测淋病奈瑟菌在公安工作中的应用孙亚洲，何建文，华永庆，袁建玲，倪海亭，胡斌玮（上海市公安局性病艾滋病鉴定室，２０００２０）１９８５年Ｍｕｌｌｉ等人发明的聚合酶链反应（ＰｏｌｙｍｅｒａｅＣｈａｉｎＲｅａｃｔｉｏｎＰＣＲ）是一种在体外扩...

SATB1高表达通过促进上皮-间充质转化而介导鼻咽癌细胞侵袭和转移

目的:探讨鼻咽癌(NPC)中特殊富含AT序列结合蛋白1(SATB1)的表达及其与肿瘤侵袭和转移的关系。方法:免疫组化检测76例临床NPC及61例对照鼻咽黏膜慢性炎症(NPI)组织样本中SATB1、上皮型钙黏蛋白(E-cadherin)和波形蛋白(vimentin)的表达,并分析NPC中SATB1与患者临床参数、E-cadherin和vimentin表达的相关性。体外培养不同分化状态的NPC细胞系CNE1、CNE2Z及C666-1,筛选出SATB1高表达细胞系,采用小干扰RNA(siRNA)沉默SATB1表达后,分析上皮-间充质转化(EMT)相关分子的表达及细胞侵袭能力的改变。结果:临床鼻咽组织中SATB1表达定位于胞质和胞核,NPC组中SATB1阳性表达率显著高于对照NPI组(P<0.01);E-cadherin在NPI黏膜上皮中呈膜阳性表达,NPC中膜表达水平下降,但出现胞质阳性。NPI中E-cadherin膜阳性率为100%,显著高于NPC的32.89%(P<0.01)。Vimentin呈胞质阳性,NPI上皮细胞中均阴性,但NPC中阳性率为51.32%(P<0.01)。NPC中SATB1高表达与患者性别、年龄及N分期无关,但与T分期和M分期均呈正相关(P<0.05);SATB1高表达与vimentin呈正相关(r=0.358,P=0.009)。NPC细胞系中SATB1表达与细胞分化水平呈负相关。采用siRNA敲减C666-1细胞中SATB1表达后,E-cadherin表达上升,vimentin表达下降,且细胞侵袭能力下降。结论:SATB1高表达通过促进EMT而介导NPC临床进展。

术前外周血循环肿瘤DNA在肝细胞癌微循环血管侵犯预测中的应用价值分析

目的探讨术前外周血中采集的ctDNA针对肝细胞肝癌(HCC)病人的微循环血管浸润(MVI)是否存在预测价值。方法收集59例来自北京大学深圳医院的确诊原发性肝癌的患者,术前一周内收集所有患者肿瘤相关术前的临床资料以及外周血ctDNA;术中采集患者的肿瘤标本进行病理分析判断有无MVI发生。采用logistic回归模型进行单因素和多因素分析确定影响MVI的独立危险因素。结果在59例纳入研究队列的患者中,MVI阳性的患者有37例,MVI阴性患者有22例。采用受试者工作特性曲线(ROC)分析显示:ctDNA预测肝癌MVI发生的最佳截断值为0.80,曲线下面积为0.813,影响肝癌发生的危险因素分析:单因素分析显示:ALT>40 U/L,较晚的TNM、BCLC分期,肿瘤最大径>3.5 cm和ctDNA>0.80与肝癌MVI的发生有关。多因素分析显示:ctDNA>0.80、肿瘤最大径>3.5 cm、较晚的TNM分期,是影响肝癌MVI发生的独立危险因素。根据筛选出的危险因素建立列线图可更加直观的反应肝癌患者MVI的风险因素。比较不同水平ctDNA评分下的肝癌患者的临床特征的不同:根据ctDNA评分的最佳截断值将59例患者分为32例低ctDNA评分组及27例高ctDNA患者组,其中AFP>400 ng/mL、TBIL>12μmol/L、APTT>39.5 s、PIVKA⁃II>40 mAU/mL、肿瘤最大径>3.5 cm及微血管侵犯阳性的患者在两组中的差异具有统计学意义。结论术前外周血ctDNA可用于肝癌MVI的预测,并且对于肝癌患者的患者术前患者精准治疗提供参考。

基于CRISPR/Cas9技术构建SETD2基因敲除鼻咽癌细胞株并分析其增殖特性

目的:基于CRISPR/Cas9技术构建SETD2基因敲除鼻咽癌(NPC)细胞株,并对该细胞株的增殖特性进行分析。方法:采用RT-PCR及Western blot检测永生化鼻咽黏膜细胞系NP-69及不同分化NPC细胞系CNE1、CNE2Z和C666-1中SETD2的表达情况,筛选出SETD2高表达细胞系CNE1。应用CRISPR/Cas9技术敲除CNE1细胞中的SETD2基因,筛选SETD2稳定敲除细胞株。采用CCK-8和平板集落形成实验分析SETD2基因敲除前后CNE1细胞的增殖能力,流式细胞术检测细胞周期的分布,Western blot检测细胞周期相关蛋白的表达。结果:与NP-69细胞相比,随着细胞分化程度的降低,SETD2在CNE1、CNE2Z和C666-1细胞中的表达逐渐下降(P <0. 01)。基于CRISPR/Cas9方法成功地从15个转染了小向导RNA(small guide RNA,sgRNA)的CNE1细胞单克隆中筛选出2个SETD2稳定敲除的细胞株CNE1-SETD2-KO-#5和#9。CCK-8及平板集落形成实验结果证实,相对于CNE1-WT细胞,CNE1-SETD2-KO-#5和#9细胞的增殖能力增强(P <0. 05);流式细胞术分析表明,CNE1-SETD2-KO-#5和#9细胞G1期减少而G2/M和S期均增加(P <0. 05); Western blot证实,SETD2敲除后增殖细胞核抗原(PCNA)、细胞周期素D1(cyclin D1)、cyclin B1、cyclin A2、cyclin E1、细胞周期素依赖性激酶2(CDK2)和CDK4表达增加,p21表达减少(P <0. 05)。结论:基于CRISPR/Ca9技术成功构建SETD2基因敲除NPC细胞株。NPC细胞中SETD2表达与细胞分化程度有关; SETD2表达缺失通过上调cyclin D1、cyclin B1、cyclin A2、cyclin E1、CDK2和CDK4并下调p21表达而促进细胞增殖。

浅谈中专数学课的不足和对策

中专数学是一门对人们生产、生活起到重要作用的学科，在应用型科学研究方面更是起到了无可替代的作用。其作为人类思维的表达方式、缜密周详的推理及对完美境界的追求，对训练和提高中等技术人才的思维方法和思维水平，有至关重要的作用。

肠道菌群对帕金森病影响的研究进展

肠道菌群在肠道与大脑间的相互作用中扮演重要角色,不仅影响肠上皮屏障和肠道神经免疫系统,还通过肠道菌群-肠-脑轴参与维持脑内稳态。帕金森病(PD)是常见的神经退行性疾病,主要影响运动系统,也可导致胃肠道功能紊乱等前驱性非运动症状。其病理标志物——α突触核蛋白可能以朊蛋白样的方式从肠道扩散到大脑,表明肠道参与PD的病理过程。PD患者的肠道菌群表现出显著的变化特征,说明肠道菌群失调可能影响PD的进展,但其中的作用机制还有待探索。目前,以肠道菌群为基础的粪便微生物移植疗法成为研究热点,其可能为PD的治疗提供一种新思路。

小学语文课前预习有效策略探究

课前预习是学科课堂教学的有效准备,课前预习的有效设置与开展,直接影响学生对学科自主学习的效果。教师有目的有计划的指导学生课前预习,可以提高学生自主学习语文的积极性,培养学生学习语文的兴趣,促进学生语文学习能力快速发展,语文预习方法的指导尤为重要。

基于TMT标记定量蛋白组学分析SATB1过表达前后鼻咽癌细胞中差异蛋白质及信号富集

目的:分析富含AT序列的特异性核基质区结合蛋白1(SATB1)表达改变对人鼻咽癌(NPC)细胞中蛋白表达谱特征的影响,并采用生物信息学富集分析差异信号通路。方法:利用SATB1过表达慢病毒和阴性对照慢病毒感染CNE1细胞,获得稳定表达细胞系。提取2组细胞的总蛋白,利用TMT标记蛋白定量技术和串联质谱分析技术筛选出差异表达蛋白,采用RT-qPCR对差异蛋白编码基因在mRNA水平进行定量验证;应用GO数据库对差异表达蛋白进行注释和富集分析,应用KEGG数据库对差异蛋白涉及信号通路进行富集分析。结果:SATB1过表达慢病毒感染CNE1细胞后获得稳定表达细胞系。与对照组相比,过表达SATB1的CNE1细胞鉴别出278个差异表达蛋白,其中115个表达上调,163个表达下调;采用RT-qPCR对10个代表性差异蛋白的编码基因进行mRNA水平的验证,其结果与蛋白组学结果具有一致性。GO数据库分析差异表达蛋白主要参与了细胞过程、单有机体过程、生物调控和代谢过程,发挥生物分子结合和催化等分子功能;细胞组件主要存在于细胞部分、细胞以及细胞器上。KEGG数据库分析显示差异表达蛋白参与和肿瘤关系密切的信号通路,主要有MAPK、PI3K-Akt、AMPK、JAK-STAT、p53、PPAR、Hippo和HIF-1通路等。结论:SATB1过表达后明显改变了NPC细胞中蛋白表达谱并影响多条与肿瘤关系密切的信号通路。蛋白组学筛查也为NPC的发病分子机制、治疗和预后标靶筛查提供了可能的宏观手段。

血清反应因子与肿瘤关系的研究进展

血清反应因子(serum response factor,SRF)的异常表达与癌症密切相关,SRF的高表达增强了癌细胞的存活、增殖、迁移和侵袭能力。此外,SRF与肿瘤干细胞的生存、自我更新和肿瘤耐药有关。SRF具有致癌基因特性,一些针对SRF的特异性抑制剂备受关注。本文综述了SRF在肿瘤发生发展中的研究进展及其在癌症中的作用机制,并展望了SRF作为靶点在肿瘤防治中的意义。

上海市在押犯性病调查报告

针对性病在我国逐渐蔓延态势,于1996年8月～1997年2月,对上海市在押犯人实施流行病学调查,了解性病发病状况,探讨防制对策.二调查对象和方法随机抽查上海市监狱、妇教所、拘留所和收审所在押犯258人.询问病史,检查全身皮肤、粘膜及妇科检查,重点检查外阴部及肛门.采集阴道后穹隆及宫颈口(男性取尿道口)分泌物直接涂片,镜检革兰氏阴性双球菌阳性者,再进一步作非淋球菌培养,同时,采血作梅毒血清学RPR检查.性病诊断按卫生部防疫司主编的《性病防治手册》制订的标准.

世界是平的还是小的?

纽约时报专栏作家汤马斯·佛里曼最近出了一本新书, 中文版翻译成《世界是平的》他强调全球化降临,世界上任一个角落都没有阻碍,都是平的,都过得去。在这种变迁下,所有企业都要接受全球竞争的考验,迎接来自全球各地的平行竞争。