“自体血清+鸡尾酒法”诱导外周血DC成熟的研究

目的比较三种不同的分离诱导外周血树突状细胞(DC)成熟的方法。方法取正常成人外周血约180ml,分成三组。分离单核细胞后,经典脂多糖(LPS)诱导组(A组):接种于含RPMI1640+胎牛血清完全培养基的25cm2培养瓶中,2h后弃悬浮细胞,将贴壁单核细胞,用粒-巨噬细胞集落刺激因子和白介素4培养,培养到第6天时加入LPS诱导24h;鸡尾酒诱导组(B组):单核细胞的培养同A组,培养到第6天时用细胞因子组合(1000U/ml肿瘤坏死因子、10ng/ml白介素6、10ng/ml白介素1β、1μg/ml前列腺素E2)诱导24h;自体血清+鸡尾酒诱导组(C组):单核细胞用RPMI1640+10%自体血清完全培养基培养,诱导方法同B组。用流式细胞仪检测各组收集的DC细胞成熟表型CD80、CD86、CD83以及白细胞表面抗原HLA-DR的表达;动态观察各组细胞成熟过程中形态的改变以及其激活淋巴细胞增殖的能力。结果C组DC成熟过程中形态好、突起多;其成熟表型CD86、CD83、CD80以及HLA-DR的平均表达率分别是(88.60±6.34)%、(50.55±4.03)%、(73.89±6.15)%、(93.24±7.78)%,明显高于A、B组(P<0.05);激活淋巴细胞增殖指数为2.03,亦明显高于A、B组(P<0.05)。结论自体血清+鸡尾酒诱导法是一种简单、方便、经济的外周血DC分离诱导成熟的新方法。

大鼠GLUT1基因的扩增及其重组腺病毒载体的构建

目的:构建携带大鼠葡萄糖转运体1基因(GLUT1)的复制缺陷型重组腺病毒载体,为进一步研究脑缺血缺氧引起的神经元死亡机制奠定基础。方法:采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)的方法获取大鼠GLUT1基因全长cDNA,将其克隆至穿梭质粒pShuttle中构建穿梭质粒pShuttle-G lut1,经酶切后与线性化的腺病毒骨架质粒pAdeno-X体外连接并转化大肠杆菌DH5α,构建重组腺病毒质粒pAd-G lut1,酶切线性化重组腺病毒质粒后转染HEK293细胞包装成重组病毒颗粒,重组腺病毒在HEK293细胞中反复扩增数代后,分别用聚合酶链反应(PCR)及免疫印迹法(W estern b lotting)从基因和蛋白表达水平鉴定重组的腺病毒。结果:经PCR分析及DNA测序显示GLUT1 cDNA序列正确;筛选出重组腺病毒质粒pAd-G lut1后在HEK293细胞中成功包装出重组病毒,包装后冻融细胞行PCR及W estern b lotting检测表明重组腺病毒包装成功。结论:成功扩增了大鼠GLUT1基因并构建了携带大鼠GLUT1基因的复制缺陷型重组腺病毒载体,这有助于研究脑缺血缺氧引起的神经元死亡的机制。

胶质瘤光动力疫苗的体外细胞毒性实验研究

目的制备胶质瘤光动力疫苗并检测体外抗肿瘤效应。方法采用4种不同方法制备胶质瘤疫苗。冻融疫苗:冻融法制备人胶质瘤细胞U251抗原,呈递给树突状细胞(DC)制备疫苗。热休克疫苗:热休克法处理人胶质瘤细胞U251并提取抗原,呈递给DC制备疫苗。光动力全细胞抗原疫苗:光动力法提取人胶质瘤细胞U251全细胞抗原并呈递给DC制备疫苗。光动力洗脱抗原疫苗:光动力法处理人胶质瘤细胞U251后,再用弱酸洗脱法提取活细胞表面抗原,呈递给DC制备疫苗。将上述4种不同方法制备的疫苗在体外与自体淋巴细胞以及靶细胞U251反应,然后用MTT法检测靶细胞凋亡率及坏死率,比较4种疫苗的体外抗肿瘤细胞效应。结果冻融疫苗、热休克疫苗、光动力全细胞抗原疫苗和光动力洗脱抗原疫苗的靶细胞死亡率分别是:(10.02±0.32)%、(18.34±0.46)%、(35.56±1.75)%和(54.45±2.14)%,4组疫苗抗肿瘤细胞效应是光动力洗脱抗原疫苗>光动力全细胞抗原疫苗>热休克疫苗>冻融疫苗。结论胶质瘤光动力洗脱抗原疫苗是一种具有良好体外抗肿瘤效应的新型疫苗。

青中年重型颅脑损伤患者手术的预后与术前相关因素的分析

目的青中年是社会劳动力主要供给者,他们的死亡和残疾对社会劳动力有显著的影响,本研究分析中青年重型颅脑损伤患者的临床资料,归纳影响中青年重型颅脑损伤预后的要素,为提升中青年重型颅脑损伤患者的诊疗水平提供科学依据。方法回顾性分析2013年5月至2018年5月在合肥市滨湖医院收治的58例青中年重型颅脑损伤患者的临床资料。统计预后不良患者和较好患者的临床资料,选用卡方检验分析可能影响患者预后的要素,得出影响预后的临床因素。结果患者年龄(40岁以上)、出血部位(幕下)、术前瞳孔散大、血肿(大于等于30ml)、中线移位(大于1cm)、入院时GCS评分(小于等于5分)、术后并发症(大于等于2种)是影响重症患者预后的因素。结论患者年龄(40岁以上)、出血部位(幕下)、术前瞳孔散大、血肿(大于等于30ml)、中线移位(大于1cm)、入院时GCS评分(小于等于5分)、术后并发症(大于等于2种)是评价的重要指标,通过针对这些重要指标的分析,对患者采取干预措施是降低致死、致残率、改善预后的关键。

高血压性脑出血重症患者急诊手术的预后与术前相关因素分析(附60例临床分析)

目的探讨高血压脑出血重症患者急诊手术的预后与术前相关因素的关系。方法我院自2014年12月份至2017年3月份60例高血压脑出血重症患者进行急诊手术的术前相关资料,并追踪随访3个月,根据预后情况,分成两组:预后良好组(ADL评分I-III级)和预后不良组(ADL评分IV、V级以及死亡病人),对于年龄、性别、发病时间、有无合并其他基础疾病、术前收缩压、术前GCS评分、脑疝情况、出血部位、术前血肿量以及血肿破入脑室这些术前因素与预后的相关性进行统计学分析。结果单因素分析提示两组术前GCS评分、脑疝情况、血肿破入脑室、出血部位这些因素和预后有显著差异(P<0.05);两组性别、年龄以及术前血肿量、术前收缩压这些因素和预后无显著差异(P>0.05)。多因素Logistic回归分析结果显示脑疝情况、血肿破入脑室进入回归方程,为影响预后的独立危险因素,术前GCS评分因素达到了边缘显著意义(P=0.069)。结论脑疝、破入脑室、术前GCS评分低这些术前因素提示高血压脑出血重症患者急诊手术预后不佳。