百合鳞茎淀粉磷酸化酶提取条件的优化

为深入研究百合鳞茎淀粉磷酸化酶(SP)的性质及其在鳞茎淀粉代谢中的生理作用,本试验确定了兰州百合鳞茎内SP的最佳提取和测定条件,并对部分酶学性质进行了初步探索。结果表明:SP的最适提取缓冲液为pH5.8的琥珀酸缓冲液;最佳反应体系为以25mmol·L-1的Glc-1-P为底物,在30℃条件下反应10min。在pH5～6范围内,SP活性最高;百合鳞茎的SP不易保存且不耐热,4℃条件下保存12h,酶活力最高残留50%;40℃条件下保存30min后,SP活力几乎完全丧失。

百合鳞茎淀粉磷酸化酶分离纯化及酶学性质研究

从兰州百合(Lilium davidii var.unicolor)鳞茎中分离纯化淀粉磷酸化酶(Starch Phosphorylase,SP)并研究其酶学性质。结果表明:选用30%～60%硫酸铵分级沉淀,SP纯化倍数为14.78,回收率为23%,纯化的SP亚基分子量约62.5kD;SP的最适反应体系缓冲液为pH5.0的柠檬酸—柠檬酸钠缓冲液,最适反应温度为30℃,且体系中不适合加入酚类抑制剂聚乙烯吡咯烷酮(PVP);SP不耐强酸,在中性和弱碱性条件下活性稳定,pH<5时活性较弱;在合成方向上,SP对葡萄糖–1–磷酸(G-1-P)的Km值为2.84mmol·L-1;1mmol·L-1Mg2+、Ca2+对SP活性有极显著的促进作用,K+、Zn2+也有一定的促进作用;大部分离子在高浓度(>10mmol·L-1)下抑制SP活性,但Na+随着浓度的升高,对SP活性的促进作用增强;10mmol·L-1的抗坏血酸可将SP活性提高30%。