月经血源性间充质干细胞来源外泌体对SD大鼠皮肤创面愈合的促进作用及其机制

目的观察月经血源性间充质干细胞(MenSCs)中分离的外泌体(MenSC-Exos)对SD大鼠皮肤创面愈合的促进作用,并探讨其机制。方法分离培养健康成年女性志愿者的MenSCs,提取MenSC-Exos;将SD大鼠随机分为实验组和对照组,制作背部皮肤机械创面,分别给予MenSC-Exos或PBS治疗;观察创面愈合情况并计算创面愈合率,采用HE染色观察创面炎症细胞浸润情况,免疫荧光法检测M1、M2型巨噬细胞,采用免疫组化法检测创面组织中的白细胞介素(IL)-6、IL-10、新生血管、Ⅰ型胶原蛋白、Ⅲ型胶原蛋白,采用Masson染色检测创面胶原蛋白含量及成熟度。培养成纤维细胞并分成外泌体组和PBS组,分别加入MenSC-Exos或PBS,采用CCK-8法检测细胞增殖能力,划痕实验检测细胞迁移能力。结果实验组术后第7、14天创面愈合率、Ⅲ型胶原蛋白沉积率和胶原蛋白含量高于对照组,Ⅰ型胶原蛋白沉积率低于对照组(P均<0.05)。实验组术后第7天创面炎症细胞数量和M1/M2低于对照组,M2型巨噬细胞数量高于对照组(P均<0.05);与对照组相比,实验组术后第3、7天创面IL-6表达降低,IL-10表达及血管内皮细胞表达升高(P均<0.05)。外泌体组培养1~5 d细胞增殖能力均高于PBS组,外泌体组培养24 h细胞迁移率高于PBS组(P均<0.05)。结论MenSC-Exos能够促进大鼠皮肤创面愈合,机制可能与调节炎症反应、促进血管生成和成纤维细胞增殖、调节胶原重塑有关。

经血间充质干细胞外泌体对人卵巢癌细胞A2780生物学行为的影响

目的 探讨经血源性间充质干细胞(menstrual blood-derived mesenchymal stem cells,MenSCs)来源的外泌体(MenSCs-derived exosomes,MenSCs-Exos)对人卵巢癌细胞A2780增殖、迁移、侵袭能力和细胞周期分布的影响和机制。方法 分离纯化MenSCs,流式细胞术鉴定其细胞表型,油红O染色观察其成脂分化能力;超速离心法分离MenSCs-Exos,电子显微镜观察外泌体形态,纳米颗粒追踪分析其大小及分布,蛋白免疫印迹法检测外泌体标志性蛋白分子CD9、TSG101、calnexin的表达。采用CCK-8实验、划痕实验、Transwell细胞体外侵袭实验、流式细胞仪检测MenSCs-Exos对A2780细胞增殖、迁移、侵袭能力和细胞周期分布的影响;蛋白免疫印迹法检测Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白和迁移相关蛋白的表达。结果 成功分离具有干细胞表型和成脂分化潜能的MenSCs,同时检测发现MenSCs-Exos为边缘清晰、大小分布均匀的膜性囊泡,粒径为30~150 nm,平均为72.89 nm,膜表面标志性蛋白CD9、TSG101表达呈阳性,calnexin表达呈阴性。与对照组相比,MenSCs-Exos能增强A2780细胞增殖、迁移和侵袭能力,影响其细胞周期分布,并且可上调β-catenin、c-Myc、TCF4、Cyclin D1、Vimentin、N-cadherin的表达,下调E-cadherin的表达。结论 MenSCs-Exos可能是通过激活Wnt/β-catenin信号通路促进A2780细胞增殖,并通过下调E-cadherin的表达促进A2780细胞的迁移和侵袭。

改良型富血小板纤维蛋白促进脂肪移植存活的最适混合比例实验研究

目的探索改良型富血小板纤维蛋白(A-PRF)促进脂肪移植存活的最适混合比例。方法酶消化法分离脂肪干细胞并培养,传代至第三代,抽取健康患者静脉血一次性制备A-PRF,以1:6、1:8、1:10、1:12、1:14五种混合比例分别与脂肪干细胞混合。取6周龄SPF级雌性裸鼠60只,随机分为5组,每组12只,分别将A-PRF以体积比1:6、1:8、1:10、1:12、1:14五种混合比例分别与人脂肪颗粒混合后注射至5组裸鼠背部,分别记为1:6、1:8、1:10、1:12、1:14组。于移植后4、8、12周以断颈法处死裸鼠,比较脂肪标本体积及质量变化;HE染色观察脂肪标本的血管密度及分布;分析囊腔/空泡占比、炎症反应程度、间质化纤维程度;免疫组化测定CD31蛋白含量。结果第24小时,5组迁移变化均不明显,在第48小时及72小时1:12组的细胞迁移程度明显高于其他组,差异具有统计学意义(P<0.05)。在第4、8及12周,1:12组的脂肪质量组织体积及质量的保留率最高,差异具有统计学意义(P<0.05)。HE染色结果显示,1:12组的囊腔/空泡占比、间质化纤维程度均为最低并伴有大量新生毛细血管,5组在第4周时炎性反应程度均较严重,在第8及第12周的炎性反应程度均较轻且差异不明显。CD31染色结果显示,1:12组的CD31蛋白含量较其他组明显升高,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论改良型富血小板纤维蛋白促进脂肪移植存活的最适混合比例是1:12。

油棕P450基因在果皮发育过程中的动态表达

对油棕果实5个不同发育时期果皮中脂肪酸含量和类细胞色素P450(cytochrome P450,P450)基因的表达情况进行了分析。结果表明:在所选择的5个不同发育时期中第4个时期P450的表达量最高,为第1个时期表达量的201.07倍。脂肪酸总含量分析表明第3、4个时期之间增加速率最高(15.79%)。在第3个时期脂肪酸的合成较少,脂肪酸含量变化趋势与同样组织中的P450基因表达趋势类似。由于细胞色素P450在植物脂肪酸代谢中起重要作用,油棕果实发育中细胞色素P450的表达极有可能对其脂肪酸的氧化、环氧化、烃基化等代谢产生影响,进而对脂肪酸的组成、产量及一些保护性化合物等的合成产生影响。

青蒿琥酯通过调节卵巢癌细胞中Wnt/β-catenin信号通路诱导铁死亡

目的:探讨青蒿琥酯(ART)对人卵巢癌细胞增殖、迁移、侵袭、凋亡的影响及其可能机制。方法:体外培养人卵巢癌细胞系SKOV3和ES-2,分为对照组和ART处理组(使用10、20、40μmol/L ART处理)。采用CCK-8法、平板克隆法检测细胞增殖情况;划痕法检测细胞迁移能力;Transwell法检测细胞迁移和侵袭能力;流式细胞术检测细胞凋亡及细胞内活性氧(ROS)水平变化;谷胱甘肽测定试剂盒检测细胞内还原型谷胱甘肽(GSH)含量变化;透射电镜观察ART作用后细胞超微结构变化;CCK-8法检测铁死亡小分子抑制剂对ART的逆转作用;Western blot检测Bcl-2、Bax、Wnt/β-catenin通路表达蛋白及GPX4蛋白的表达。结果:不同浓度ART均能显著抑制卵巢癌的增殖、迁移和侵袭,促进细胞凋亡,且该作用呈剂量依赖性(P<0.05)。与对照组相比,ART处理组出现明显铁死亡特征,包括ROS水平增加(P<0.05),GSH水平下降(P<0.05)和电镜下细胞超微结构的变化,且铁死亡小分子抑制剂能逆转ART对卵巢癌细胞的铁死亡作用(P<0.05)。Western blot结果显示,ART处理后卵巢癌细胞中抑凋亡蛋白Bcl-2显著下调,促进凋亡蛋白Bax表达显著上调,Wnt/β-catenin通路相关蛋白β-catenin、TCF4、c-myc、Cyclin D1表达下调,铁死亡相关蛋白GPX4表达下调,且呈浓度剂量依赖性(P<0.05)。结论:ART可能通过抑制Wnt/β-catenin信号通路抑制卵巢癌细胞增殖、迁移及侵袭,促进细胞凋亡,诱导卵巢癌细胞铁死亡。

海南油棕果肉中脂肪酸的成分分析

用乙醚萃取海南油棕果肉中的油脂,油脂中的脂肪酸采用氢氧化钾-甲醇溶液进行甲酯化后,利用气相色谱-质谱联用技术(GC-MS)对其中的脂肪酸成分进行分析。结果分离鉴定出4种脂肪酸成分,它们分别是棕榈酸(45.62%)、油酸(37.70%)、亚油酸(8.39%)、硬脂酸(8.29%)。其中不饱和脂肪酸高达46%以上,有进一步开发利用的潜力。

油棕DGAT2基因启动子克隆及表达的组织特异性研究

以油棕(Elaeis guineensis Jacq.)叶片基因组DNA为模板,克隆获得长度为1035 bp的二酰甘油酰基转移酶基因(DGAT2)的启动子区序列。序列分析结果表明,DGAT2基因启动子含有大量光反应元件、激素响应元件及部分转录因子结合位点。本研究同时构建了DGAT2基因启动子和GUS基因植物融合表达载体,通过蘸花法侵染拟南芥(Arabidopsis thaliana L.),并对转基因拟南芥中GUS基因表达的特异性进行了分析。结果显示,GUS基因在拟南芥各组织中均有表达,但没有明显的组织特异性;荧光定量PCR分析结果表明DGAT2在油棕不同器官中的转录水平存在明显差异。

沉默MALAT1通过Wnt/β-catenin通路抑制卵巢癌细胞侵袭迁移

目的:探讨沉默长链非编码RNA转移相关肺腺癌转录本1(metastasis-associated lung adenocarcinoma transcript 1,MALAT1)对人卵巢癌细胞侵袭迁移及Wnt/βcatenin信号通路的影响,并研究其作用机制。方法:将携带沉默MALAT1片段的重组慢病毒分别感染人卵巢癌细胞SKOV3、OVCAR3作为实验组(LV-MALAT1组),同时用携带无意义序列感染上述两种细胞作为阴性对照组(LV-NC组)。利用CCK-8法和划痕实验分别评估细胞的增殖和迁移能力,平板克隆实验检测细胞克隆形成能力,Transwell实验观察细胞的迁移和侵袭能力。Western blot检测上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)相关蛋白、Wnt/β-catenin信号转导通路相关蛋白表达。结果:与LV-NC组相比,LV-MALAT1组SKOV3、OVCAR3细胞的增殖、迁移与侵袭能力明显减弱(P<0.05),克隆形成能力受到抑制(P<0.05),Western blot结果显示:EMT相关蛋白E-cadherin表达升高,N-cadherin、Vimentin表达降低,Wnt/β-catenin信号转导通路相关蛋白β-catenin、TCF-4、c-myc及CyclinD1表达均降低(P<0.05)。结论:沉默MALAT1可抑制卵巢癌SKOV3,OVCAR3细胞的迁移、侵袭及EMT,其机制可能与Wnt/β-catenin信号通路受到抑制有关。