用cDNA-AFLP技术研究茶树种子在低温贮藏过程中差异基因的表达

以茶树无性系龙井43种子为材料,利用cDNA-AFLP差异显示方法,分析它在低温贮藏后的基因表达,为顽拗性植物种子的中长期保存提供理论依据。从64对引物筛选出的差异片段中克隆出10个低温差异表达片段,有7个在GenBank数据库中与小分子量热激蛋白、MYB类转录因子、衰老相关蛋白、F-box家族蛋白、蛋白激酶、磷酸二酯酶等基因有较高同源性。

从茶树种胚中提取总RNA方法的研究

茶树种胚中富含多糖和多酚类化合物,这增加了总RNA的提取难度。试验以茶树种胚为研究对象,通过对几种提取总RNA方法的比较与分析,认为用改进的CTAB-LiCl法提取茶树种胚总RNA的产率较高,质量好,可直接用于cDNA的合成、cDNA-AFLP分析等分子生物学实验操作。

茶树种子脱水过程差异基因的研究

利用cDNA-AFLP方法在转录水平上对茶树无性系龙井43种子脱水前后基因表达的变化进行分析,探讨脱水差异和生物学中的衰老与死亡的联系,并为茶树等顽拗型种子植物的种质资源保存提供理论依据。结果显示:64对引物组合产生87条差异条带,对其中的6条克隆测序,发现4条与已知功能基因相关,包括植物衰老蛋白、PPR、硫氧还蛋白,翻译控制肿瘤蛋白,其中硫氧还蛋白在茶树种子中首次被发现。