头花蓼对幽门螺旋杆菌相关性胃炎的细胞间隙连接通讯功能的影响

目的探讨头花蓼对幽门螺旋杆菌相关性胃炎的胃黏膜上皮细胞株-GES-1细胞间隙连接通讯功能的影响。方法采用划痕标记荧光染料示踪技术检测不同比例(幽门螺旋杆菌与细胞之比为25∶1,50∶1,100∶1)的幽门螺旋杆菌数对胃黏膜上皮细胞株-GES-1细胞作用24h后间隙连接通讯功能的影响。构建幽门螺旋杆菌相关性胃炎(Helicobacter pylori-associated gastritis,HPAG)细胞模型基础上,采用划痕标记荧光染料示踪技术检测不同浓度的头花蓼(8μg/mL、16μg/mL、32μg/mL、64μg/mL)作用24h后对幽门螺旋杆菌相关性胃炎的细胞间隙连接通讯功能的影响。结果 (1)通过划痕标记荧光染料示踪技术检测结果表明细菌与细胞之比为50∶1作用24h时,减弱了胃黏膜上皮细胞株-GES-1细胞间隙连接通讯功能(P<0.05);(2)通过划痕标记荧光染料示踪技术检测结果表明头花蓼(64μg/mL)作用24h改善了幽门螺旋杆菌相关性胃炎细胞模型的细胞连接通讯功能(P<0.05)。结论头花蓼(64μg/mL)作用24h改善了幽门螺旋杆菌相关性胃炎细胞模型的细胞连接通讯功能,为头花蓼对H.pylori相关性胃炎的抗菌、抗炎机制奠定了实验基础。

头花蓼对幽门螺杆菌尿素酶活性及基因表达的影响

目的:观察苗药头花蓼对幽门螺杆菌(H.pylori)尿素酶活性及尿素酶编码基因ure A、ure B表达水平的影响,探讨头花蓼抑制H.pylori的可能机制。方法:H.pylori分为对照组、1/2最低抑菌浓度(MIC)、1/4MIC、1/8MIC头花蓼处理组,分别于不含药的10%脱纤维羊血哥伦比亚血琼脂平板及含2、1、0.5 g/L头花蓼的10%脱纤维羊血哥伦比亚血琼脂平板培养3代,尿素酶活性比色法定量检测各组H.pylori尿素酶活性,Real-time PCR检测对照组、1/2MIC头花蓼处理组尿素酶基因ure A、ure B的mRNA水平。结果:头花蓼作用后,处理组H.pylori尿素酶活性均显著低于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05),且头花蓼的浓度越大,H.pylori尿素酶活性受抑制的程度也越大;1/2MIC头花蓼处理后,H.pylori尿素酶编码基因ure A、ure B mRNA水平与对照组比较均显著下调,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:苗药头花蓼可通过抑制H.Pylori尿素酶活性及下调尿素酶基因ure A、ure B的表达水平抑制H.Pylori尿素酶的合成,从而降低H.Pylori在胃酸环境中的生存能力。

头花蓼对幽门螺杆菌抗菌作用分析

目的:探讨头花蓼对幽门螺杆菌(Hp)的抗菌机制。方法:采用琼脂稀释法检测头花蓼对幽门螺杆菌国际标准测序株ATCC700392的最低抑菌浓度(MIC);选用三氯醋酸/丙酮沉淀法收集药物作用前后的幽门螺杆菌全菌蛋白,应用双向凝胶电泳技术(2-DE)和Real-time PCR技术检测头花蓼对幽门螺杆菌蛋白及基因表达水平的影响。结果:头花蓼对幽门螺杆菌国际标准测序株ATCC700392的MIC为4 mg·ml-1;通过质谱技术鉴定出10个差异蛋白点,其中延胡索酸还原酶黄素蛋白亚基、烷基过氧化氢还原酶、粘附-巯基还原酶、非血红素铁蛋白仅在药物作用前的全菌蛋白中表达,乙酰脲利用蛋白A、亮氨酰胺肽酶、过氧化氢酶在头花蓼作用后明显下调,而丙酰胺左旋门冬氨酸酶、延长因子P和NADPH黄素还原酶的蛋白表达则在药物作用后上调;Real-time PCR结果显示头花蓼作用后幽门螺杆菌的过氧化氢酶基因、烷基过氧化氢还原酶基因、粘附-巯基还原酶基因基因mRNA表达量呈减弱趋势,实验组与对照组相比,katA的基因表达水平下调1.52倍,TsaA的基因表达水平下调2.94倍,TagD的基因表达水平下调3.65倍(P<0.05)。结论:头花蓼对Hp具有明显的抑制作用,是通过干扰和抑制Hp蛋白表达水平和mRNA水平的发挥作用。

幽门螺杆菌对甲硝唑耐药与rdxA基因分型及cagA基因的关系

目的:研究幽门螺杆菌(Helicobacter pylori H.pylori)甲硝唑耐药菌株相关基因的突变与甲硝唑耐药性的关系。方法:将贵阳医学院附属医院胃镜室分离H.pylori采用E-Test法对甲硝唑进行药敏试验后,PCR扩增rdxA、frxA、fdxB和cagA并对该基因进行测序。采用限制性内切酶片段长度多态性分型方法(RFLP)对rdxA基因进行分型。结果:313株H.pylori对甲硝唑耐药率为87.2%。其与NCBI已登录的国际标准菌株H.pylori 26695相应基因序列比对,cagA基因阳性率为100%,cagA基因在某些位点存在共同突变,还存在大量其他位点的随机散在突变,rdxA基因除了存在4个位点共同突变外,还有其他位点的散在突变。rdxA基因可分为两型,Ⅰ型与Ⅱ型的比例为293∶20,Ⅰ型耐药率为86.3%,Ⅱ型耐药率为100%。同时发现fdxB、frxA基因突变呈现出一定的规律性,具有碱基替换、插入和缺失3种类型的突变。结论:我院幽门螺杆菌甲硝唑耐药率较高,rdxA基因以Ⅰ型为主,而rdxA基因Ⅱ型的H.pylori均产生甲硝唑耐药,与H.pylori甲硝唑耐药性密切相关。rdxA基因突变及cagA基因阳性是耐甲硝唑的主要原因。