β-谷甾醇对帕金森病模型大鼠脑氧化应激损伤及Nrf2/HO-1蛋白通路的影响

目的 探讨β-谷甾醇对帕金森病模型按照随机数字表法大鼠脑氧化应激损伤的保护作用及对Nrf2通路蛋白表达的影响。方法 将40只2月龄SPF级SD雄性大鼠采用随机数字表法分为正常组、造模组、治疗组和美多芭组,每组10只。模型组、美多芭组及治疗组采用鱼藤酮葵花油乳液颈背部注射建立帕金森病大鼠模型。造模成功后,治疗组以60 mg/(kg·d)β-谷甾醇、美多芭组以5 mg/(kg·d)美多芭混悬液、正常组和模型组采用生理盐水分别灌胃,均为每天1次,连续14 d。采用超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)检测试剂盒检测4组大鼠血清SOD、MDA含量,免疫组化检测4组大鼠脑黑质中黑质酪氨酸羟化酶(TH)、核转录因子E2相关因子2(Nrf2)阳性细胞数;Western blot检测4组大鼠脑组织中Nrf2、血红素加氧酶-1(HO-1)、蛋白醌氧化还原酶-1(NQO-1)蛋白表达情况。结果 与正常组比较,模型组SOD含量降低、MDA含量升高,脑黑质TH、Nrf2阳性细胞数减少,脑组织中Nrf2、HO-1、NQO-1蛋白表达降低(P<0.05)。与模型组比较,治疗组和美多芭组SOD含量升高、MDA含量降低,脑黑质中TH、Nrf2阳性细胞数增加,脑组织中Nrf2、HO-1、NQO-1蛋白表达升高(P<0.05)。结论 β-谷甾醇可对帕金森病大鼠模型氧化应激损伤产生保护作用,其机制可能是通过调高Nrf2表达并激活下游信号通路蛋白。

白介素-12抑瘤机制及其在黑色素瘤治疗中的应用

IL-12是一种多功能的细胞因子,主要介导细胞免疫,在诱导Th1型细胞的分化中发挥重要调节作用;促进IFNγ-的分泌使NK细胞、T细胞大量增殖并增强其细胞毒性。其免疫调节及抗血管生成作用而被认为是一种强有力的抗癌剂。因其显著的抗肿瘤及抑制转移活性在黑色素瘤治疗中发挥了强大的作用。

苁蓉舒痉颗粒对帕金森病模型大鼠延髓的保护作用

目的观察苁蓉舒痉颗粒对帕金森病(PD)模型大鼠延髓的保护作用及机制。方法将50只健康SD大鼠随机分为对照组10只和造模组40只。造模组大鼠于颈背部皮下注射鱼藤酮葵花油乳化液来建立PD模型,对照组大鼠颈背部皮下注射等体积葵花油。将30只造模成功的大鼠再次随机分为模型组、苁蓉舒痉组、美多芭组各10只,分别予相应药液进行灌胃,连续干预14 d。分别于造模后和干预第7、14天进行网格实验和斜板实验;免疫组化法检测中脑黑质区TH阳性细胞数;TUNEL染色法观察延髓细胞凋亡情况;应用透射电镜观察延髓细胞线粒体形态;Western blot法检测大鼠中脑黑质区α-突触核蛋白(α-synuclein)和延髓B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、激活型半胱氨酸蛋白酶3(cleaved caspase-3)、过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)、过氧化物酶体增殖物激活受体-γ共激活因子-1α(PGC-1α)的蛋白表达。结果与对照组比较,模型组大鼠造模后和干预7、14 d后移动潜伏期明显缩短和斜板倾斜角度明显减小(P<0.05);中脑黑质区TH阳性细胞数明显减少(P<0.05);延髓细胞凋亡率明显增加(P<0.05),线粒体肿胀;中脑黑质区α-synuclein和延髓cleaved caspase-3、Bax蛋白表达明显提高(P<0.05),大鼠延髓Bcl-2、PPARγ和PGC-1α蛋白明显降低(P<0.05)。与模型组比较,苁蓉舒痉组和美多芭组大鼠干预7、14 d后移动潜伏期明显延长和斜板倾斜角度明显增大(P<0.05);黑质区TH阳性细胞数明显增加(P<0.05);延髓细胞凋亡率降低(P<0.05),线粒体结构接近正常;中脑黑质区α-synuclein和延髓cleaved caspase-3、Bax蛋白表达明显降低(P<0.05),延髓Bcl-2、PPARγ和PGC-1α蛋白明显提高(P<0.05)。结论苁蓉舒痉颗粒能减轻PD模型大鼠延髓神经细胞凋亡,这可能与改善PD模型大鼠延髓神经细胞线粒体形态,增加线粒体合成蛋白PPARγ及PGC-1α表达有关。

基于PERK-eIF2α通路探讨苁蓉舒痉颗粒对帕金森病模型大鼠黑质纹状体内质网应激的调节作用

目的 研究苁蓉舒痉颗粒对鱼藤酮诱导的帕金森病(PD)模型大鼠黑质纹状体内质网应激蛋白激酶样内质网激酶(PERK)-真核翻译起始因子2α(eIF2α)通路的调节作用。方法 将100只健康SD大鼠随机分为正常组33只和造模组67只,造模组采用颈背部皮下注射鱼藤酮葵花油乳液建立PD模型,参照行为学评分标准鉴定造模成功后,随机分为模型组34只和治疗组33只。治疗组予苁蓉舒痉颗粒药液6.8 mL/(kg·d)灌胃,正常组、模型组予等量生理盐水灌胃,连续干预14 d。于灌胃第1、3、5、7、9、11、13、14天,采用平行反应监测(PRM)蛋白相对定量分析检测大鼠黑质纹状体eIF2α特异性肽段定量的变化;灌胃14 d后应用透射电镜观察3组大鼠黑质神经细胞超微结构;采用免疫组化法检测大鼠黑质PERK、p-PERK、eIF2α、p-eIF2α表达的平均光密度值。结果与正常组比较,在灌胃第13、14天模型组黑质纹状体eIF2α特异性肽段定量明显增高(P均<0.05),灌胃14 d后黑质神经细胞肿胀,内质网扩张,黑质PERK、p-PERK、eIF2α、p-eIF2α的平均光密度值增高(P<0.05,P<0.01);与模型组比较,治疗组在灌胃第5天黑质纹状体eIF2α特异性肽段定量明显增高(P<0.01),灌胃第13、14天时明显减低(P均<0.05),灌胃14 d后黑质神经细胞肿胀、内质网扩张等形态异常有所改善,黑质PERK、pPERK、eIF2α、p-eIF2α的平均光密度值明显降低(P<0.05,P<0.01)。结论 苁蓉舒痉颗粒可能通过动态调节内质网应激PERK-eIF2α通路,起到恢复内质网稳态的作用。

溶血性链球菌制剂OK432联合肿瘤冻融抗原诱导小鼠骨髓树突状细胞的成熟

目的探讨溶血性链球菌制剂(OK432)联合肿瘤冻融抗原诱导小鼠骨髓树突状细胞(DCs)成熟的作用,改进体外诱导DCs成熟的方案,为后期制备临床使用的抗肿瘤DCs疫苗提供新的技术路线。方法分离小鼠骨髓单核细胞(BMMCs),并在含10%胎牛血清(FCS)、重组小鼠粒-巨噬细胞集落刺激因子(rmGM-CSF)、重组小鼠白细胞介素-4(rmIL-4)的培养体系中诱导培养,部分加入OK432和/或肿瘤冻融抗原冲击,光镜和透射电镜下观察细胞形态,流式细胞仪检测细胞表面分子CD83和CD86的表达情况。结果经OK432联合肿瘤细胞冻融抗原冲击的DCs形态学特征典型。肿瘤冻融抗原冲击后,DCs表面CD83和CD86的表达上调,OK432进一步刺激后,CD83和CD86的表达率显著升高。结论采用OK432联合肿瘤冻融抗原诱导DCs成熟的方案相对简便;OK432能有效促进肿瘤冻融抗原冲击后的骨髓DCs进一步成熟。

MyD88在OK-432诱导树突状细胞成熟中的作用

目的探讨小鼠骨髓树突状细胞(DCs)髓性分化蛋白88(MyD88)在OK-432诱导DCs成熟中的作用机制。方法分离小鼠骨髓单核细胞(BMMCs),在含10%胎牛血清、重组小鼠粒-巨噬细胞集落刺激因子(rmGM-CSF)、重组小鼠白细胞介素-4(rmIL-4)的培养体系中诱导培养,所得的细胞即为DCs。于培养的第5天,将细胞分为3组:对照组不加OK-432和MyD88 si RNA;OK-432组加入终浓度为5μg/mL的OK-432;RNA干扰组加入MyD88 si RNA12 h后,再加入5μg/mL OK-432刺激。半定量RT-PCR法检测DCs中MyD88的表达;ELISA法检测各组DCs分泌肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和IL-12的能力;MTT法检测DCs体外刺激同种混合淋巴细胞增殖的免疫活性。结果OK-432组DCs的MyD88高表达、TNF-α和IL-12释放明显增加并能诱导较强混合淋巴细胞反应,而用MyD88 si RNA干扰后以上效应均降低(P<0.05)。结论靶向MyD88 si RNA可明显抑制小鼠DCs中MyD88的表达和OK-432诱导的DCs成熟,表明MyD88介导OK-432诱导的DCs成熟。

沙培林联合肿瘤冻融抗原刺激的小鼠骨髓源性树突状细胞瘤苗的抗胃癌效应

目的：观察沙培林（OK-432）对小鼠骨髓源性树突状细胞（DCs）功能的影响,及由此产生的DCs对荷胃癌小鼠的抗癌效应.方法：OK-432联合肿瘤冻融抗原诱导小鼠骨髓源性DCs,ELISA法检测DCs分泌白介素12（IL-12）水平.建立荷胃癌小鼠模型,尾静脉注射DCs,观察其对肿瘤生长的抑制作用,RT-PCR法检测移植瘤IL-12mRNA表达情况,ELISA法检测移植瘤IL-12蛋白表达情况,免疫组织化学法检测移植瘤血管内皮生长因子（VEGF）蛋白表达情况.结果：OK-432联合肿瘤冻融抗原促进DCs分泌IL-12.OK-432联合肿瘤冻融抗原刺激的DCs抑制移植瘤生长,促进移植瘤IL-12mRNA和IL-12蛋白表达,抑制移植瘤VEGF蛋白表达.结论：OK-432联合肿瘤冻融抗原刺激能有效增强DCs瘤苗的抑瘤效应,其机制可能与纠正肿瘤组织免疫缺陷,促进肿瘤组织表达IL-12和抑制肿瘤组织表达VEGF有关.

溶血性链球菌制剂OK-432联合肿瘤冻融抗原诱导的树突状细胞瘤苗对小鼠前胃癌的抑瘤作用

目的观察溶血性链球菌制剂(OK-432)联合肿瘤冻融抗原诱导的树突状细胞(DCs)瘤苗对小鼠前胃癌的体内抑瘤作用。方法分离小鼠骨髓单个核细胞(BMMCs),并在含10%胎牛血清、重组小鼠粒-巨噬细胞集落刺激因子(rmGM-CSF)、重组小鼠白细胞介素-4(rmIL-4)的培养体系中诱导培养,部分加入肿瘤冻融抗原和/或OK-432冲击,透射电镜下观察细胞形态,流式细胞仪检测细胞表面抗原CD83和CD86的表达情况。建立小鼠前胃癌移植瘤模型,随机分4组,分别从小鼠尾静脉注射磷酸盐缓冲液(PBS对照组)、未经肿瘤冻融抗原刺激的DCs(BM-DCs组)、经肿瘤冻融抗原刺激的DCs(TL-DCs组)和经OK-432联合肿瘤冻融抗原诱导的DCs(OK-DCs组),观察各组小鼠肿瘤体积及质量,并计算抑瘤率。结果于培养的第7天收集各组的DCs,OK-DCs呈典型成熟形态,其表面CD83和CD86的表达率高于BMMCs、BM-DCs、TL-DCs。体内实验显示,OK-DCs组移植瘤生长缓慢,瘤体积和质量均显著小于PBS对照组、BM-DCs组、TL-DCs组,体内抑瘤率为55.32%。结论 OK-432联合肿瘤冻融抗原诱导DCs成熟的方案制备的DCs瘤苗可明显抑制荷瘤小鼠前胃癌的生长。

松果菊苷调控抗增殖蛋白表达抑制MPP~+诱导的SH-SY5Y细胞凋亡

目的探讨松果菊苷(echinacoside,ECH)调控抗增殖蛋白(prohibitin,PHB)表达,及对MPP^(+)诱导的SH-SY5Y细胞凋亡的效应及机制。方法选取SH-SY5Y细胞分为control组、MPP^(+)组、MPP^(+)+ECH组、NC+MPP^(+)组、NC+MPP^(+)+ECH组、PHB-RNAi+MPP^(+)+ECH组。CCK-8检测细胞存活率,倒置相差显微镜观察细胞形态,Hoechst33342荧光染色法观察凋亡细胞,流式细胞仪检测细胞凋亡率、活性氧含量及线粒体膜电位,Western blot检测PHB、Akt、p-Akt、Bcl-2、Bax、cleaved caspase-3相对蛋白表达。结果与control组比较,MPP^(+)组细胞存活率显著下降;细胞生长状态明显变差;细胞内活性氧含量增高、线粒体膜电位降低、凋亡相关蛋白表达增加、凋亡率升高。与MPP^(+)组比较,MPP^(+)+ECH组细胞存活率显著上升;细胞生长状态明显好转;细胞内活性氧含量降低、线粒体膜电位升高、凋亡相关蛋白表达降低、凋亡率明显下降;PHB和p-Akt表达量明显上升。与NC+MPP^(+)+ECH组比较,PHB-RNAi+MPP^(+)+ECH组p-Akt水平降低,细胞凋亡率上升。结论松果菊苷能减轻MPP^(+)诱导的SH-SY5Y细胞凋亡,此效应可能是通过上调PHB表达,使Akt磷酸化,从而保护细胞线粒体功能来实现的。

松果菊苷对帕金森病模型大鼠中脑超微结构的影响

目的:观察松果菊苷对帕金森病(Parkinson’s disease, PD)模型大鼠中脑超微结构的影响。方法:将健康SD大鼠随机分为对照组、模型组和松果菊苷组,每组10只。对照组用生理盐水灌胃,模型组和松果菊苷组大鼠造模后,分别用生理盐水和2 mg/mL的松果菊苷水溶液灌胃,每天1次,连续14 d。灌胃结束后,采集各组大鼠中脑,制作超薄切片,在7 000倍和50 000倍电镜下观察并比较各组大鼠中脑神经细胞超微结构的差异。结果:对照组中脑神经细胞结构清晰,核膜光滑、完整,核内染色质分布均匀;线粒体数量较多,形态规则,双层膜结构、线粒体嵴结构清晰。与对照组比较,模型组的神经细胞胞体缩小,核染色质边聚;线粒体数量减少,双层膜结构不清,线粒体嵴排列紊乱。松果菊苷组与模型组比较,神经细胞胞体大小有所恢复,核染色质边集现象有所缓解;线粒体数量增加,双层膜结构清晰,线粒体嵴排列相对规律,形态基本正常。结论:松果菊苷能改善PD模型大鼠中脑神经细胞凋亡的超微结构,这一结果可能与缓解神经细胞线粒体功能障碍有关。

MTT法检测松果菊苷对MPP+损伤的SH-SY5Y细胞存活率的影响

目的 探讨不同浓度松果菊苷(ECH)对1-甲基-4-苯基-吡啶离子(MPP+)损伤的人神经母细胞瘤(SH-SY5Y)细胞存活率的影响.方法 体外培养SH-SY5Y细胞,以不同浓度(浓度分别为10 μg/mL、20 μg/mL、40 μg/mL、80 μg/mL)的松果菊苷与1 mmol/L MPP+共同孵育,四甲基偶氮唑盐法测定(MTT)法检测各组细胞存活率.结果 MPP+可明显降低SH-SY5Y细胞存活率,不同浓度的松果菊苷对Mpp+损伤后的SH-SY5Y细胞存活率均有一定程度的提升,以40 μg/mL和80 μg/mL组增加明显(P<0.05).结论 松果菊苷对Mpp+损伤的SH-SY5Y细胞有保护作用,可考虑将40 μg/mL和80 μg/mL浓度松果菊苷作为后续实验浓度.

苁蓉舒痉颗粒对帕金森病模型大鼠中脑线粒体氧化应激及自噬相关SIRT1/FoxO通路的影响

目的 探讨苁蓉舒痉颗粒对帕金森病(PD)线粒体氧化应激及自噬相关SIRT1/FoxO通路的影响。方法 采用软件随机数字法将27只健康SD大鼠分为正常组9只、造模组18只,造模组采用颈背部皮下注射鱼藤酮葵花油乳化液建立PD模型,将造模成功的大鼠随机分为模型组和治疗组各9只,治疗组予苁蓉舒痉颗粒溶液灌胃,正常组、模型组予等量生理盐水灌胃,连续干预14 d。分别于灌胃第1、7、14天进行爬杆实验检测爬杆实验得分;灌胃第14天大鼠麻醉后取材,免疫组化法检测中脑酪氨酸羟化酶(TH)阳性细胞数,ELISA法检测中脑沉默信息调节因子1(SIRT1)、叉头蛋白O1(FoxO1)、FoxO3a蛋白水平,Western blot法检测中脑SIRT1、FoxO1、FoxO3a、微管相关蛋白轻链3-Ⅰ(LC3-Ⅰ)、LC3-Ⅱ蛋白表达,流式细胞术检测中脑活性氧(ROS)水平。结果 与正常组比较,模型组爬杆实验评分、ROS水平明显升高(P<0.01),TH阳性细胞数及SIRT1、FoxO1、FoxO3a、LC3-Ⅰ、LC3-Ⅱ蛋白表达明显降低(P<0.05,P<0.01)。与模型组比较,治疗组TH阳性细胞数及SIRT1、FoxO1、FoxO3a、LC3-Ⅰ、LC3-Ⅱ蛋白表达明显升高(P<0.05,P<0.01),爬杆实验评分、ROS水平明显降低(P<0.01)。结论 苁蓉舒痉颗粒能改善帕金森病大鼠行为障碍,降低中脑组织ROS水平,增加自噬相关LC3-Ⅱ蛋白表达,保护中脑多巴胺能神经细胞,其保护作用可能是通过调节线粒体氧化应激及自噬相关SIRT1/FoxO通路实现的。

基于网络微教学的病理生理学教学探讨

网络微教学是利用社交媒体或网络教学平台开展的一种在线微型化教学形式,是课堂教学的有益补充和延伸。文章提出了基于网络微教学的病理生理学教学新目标(知识目标、能力目标、情感与道德价值目标)、新理念(以学生为中心,强化教学互动),并以此为指导,在微博、QQ、雨课堂等平台开展网络微教学实践,以提高教学质量,培养全面发展的新时代合格医学生。

基于探究式学习与过程管理的《病理生理学》CPBL教学实践研究

本研究基于建构主义教学理念,以促进学生自主探究式学习与临床思维培养为目标,确立“全员参与、过程把控、深入讨论、拓展思维”的指导思想,采取“线下小组探究式学习、课内答辩点评为主,线上师生互动、督学促学为辅”的混合式教学模式。在本校2017级临床医学专业开展《病理生理学》以病例-问题为基础的教学(case-problem based learning,CPBL)教学,并强化过程管理,对资料查阅和小组讨论这两个关键环节进行有效的过程管理。通过对学期结束时收回的176份教学评价的分析,结果表明,在CPBL教学总体评价方面,92.05%(162人)以上学生对教学目标、组织、案例及个人收获评价较高,持非常赞同、比较赞同的态度;对“时间分配恰当”负面反馈较多,有11.93%(21人)的学生持比较不赞同、非常不赞同的态度;另外84.66%(149人)以上学生“觉得很累”。在教学效果评价方面,超过85.23%(150人)的学生非常赞同或比较赞同CPBL教学能够帮助专业知识理解、激发学习积极性和主动性、提高处理问题能力、联系临床培养临床思维、督学促学、增强团队合作与师生交流等。对教师的评价方面,超过94.89%(167人)学生认为教师教学严谨负责又有热忱,重视过程管理,有效引导与思维启发都做得比较好(非常赞同、比较赞同)。上述结果提示,本次《病理生理学》CPBL教学改革立足于过程管理,能有效促进学生深度自主探究式学习,促进临床思维培养,提高教学有效性,但在教学安排、时间分配方面有待改进。

补肾复方对帕金森病模型大鼠不同脑区神经营养因子的影响

目的探讨补肾复方治疗帕金森病(PD)的可能作用机制。方法 40只雄性SD大鼠采用颈背部皮下注射鱼藤酮葵花油乳化液建立PD大鼠模型,随机分为补肾复方低、中、高剂量组(40、80、160 mg/kg补肾复方水煎剂灌胃)及模型组(等体积生理盐水灌胃),每组10只。另设正常组和溶剂组(等体积生理盐水灌胃)各10只。于灌胃第14天进行悬挂实验;免疫组化检测黑质酪氨酸羟化酶(TH)阳性细胞数,Western Blot法检测纹状体、额叶多巴胺能神经营养因子(CDNF)、中脑胶质细胞源性神经营养因子(MANF)蛋白表达,RT-PCR检测纹状体、额叶CDNF、MANF mRNA表达。结果与模型组比较,补肾复方中、高剂量组悬挂实验评分增加,黑质TH阳性细胞数增加,纹状体和额叶CDNF蛋白表达及补肾复方高剂量组纹状体MANF蛋白及mRNA水平、纹状体CDNF mRNA水平、额叶MANF mRNA亦明显增加,补肾复方各剂量组额叶CDNF mRNA表达均增多(P <0. 05或P <0. 01)。结论补肾复方能改善帕金森病的行为障碍,保护纹状体、额叶的多巴胺能神经细胞,其保护作用可能是通过纠正不同脑区的CDNF、MANF表达实现的,且以高剂量效果更好。

跑台运动训练对脑缺血大鼠TGF-β1/Smad3通路蛋白表达及细胞凋亡的影响

目的 观察跑台运动训练对脑缺血大鼠脑缺血周边区组织中转化生长因子-β1（TGF-β1）及其受体Smad3蛋白表达水平及细胞凋亡的影响，探讨跑台运动训练促进大鼠脑缺血后神经功能恢复的相关机制。 方法 取成年雄性Sprague-Dawley（SD）大鼠30只，按随机数字表法分为假手术组（n=6）、模型组（n=12）和运动组（n=12）。模型组和运动组大鼠采用改良的Longa线栓法制备大脑中动脉闭塞（MCAO）脑缺血动物模型，假手术组大鼠手术方法同模型组和运动组，但是不插入线栓。运动组于造模成功后24 h采用跑台训练仪进行跑台运动训练，其余2组则不进行运动训练。采用修正的神经功能缺损评分方法（mNSS）评价模型组和运动组大鼠造模后第3天、7天及14天的神经功能，并于造模后14 d断头取脑。采用Western blot法检测脑缺血周边区组织中TGF-β1及Smad3蛋白的表达情况，采用TUNEL法检测脑缺血周边区组织中细胞凋亡情况。 结果 造模后第7、14天，运动组的mNSS评分分别为（7.06±0.79）分和（6.33±1.15）分，分别于模型组同时间点比较，差异均有统计学意义（P〈0.05或P〈0.01）；运动组大鼠的TGF-β1及Smad3蛋白表达均较模型组明显增加，差异具有统计学意义（P〈0.01）；运动组大鼠脑缺血周边区TUNEL染色阳性细胞较模型组明显减少，差异具有统计学意义（P〈0.01）。 结论 跑台运动训练能够促进脑缺血后大鼠神经功能恢复，其机制可能与上调脑缺血周边区组织中TGF-β1/Smad3蛋白表达，进而抑制细胞凋亡有关。

基于中西医结合理念的RISE教学模式在病理学教学中的应用与探讨

西医课程在中医药院校的教学中注重中西医理论的比较,有助于学生认识中、西医之间的联系与差异性。对中医专业病理学课程应用基于中西医结合理念的RISE教学模式,通过拟定问题、查阅文献、课堂讲解、归纳总结、形成性评价等措施,探讨该教学模式的效果及应用价值,认为RISE教学模式有利于提升学生学习的主动性和创新思维能力。