化学合成siRNA对宫颈癌细胞SiHa中E6基因表达的抑制作用

背景与目的:宫颈癌的发生发展与人乳头瘤病毒(human papilloma virus)HPV16E6、E7癌基因密切相关,人们曾采用核酶或E6、E7反义寡核苷酸抑制其表达,然而,上述两种方法存在费时、费力、抑制效率不高和维持时间短的问题。本研究拟探讨化学合成siRNA对HPV16阳性SiHa细胞E6基因表达的抑制作用以及对靶细胞的影响。方法:化学合成3条靶向HPV16E6基因的siRNA,用脂质体法转染SiHa细胞,同时设立脂质体对照。采用半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测siRNA作用后E6mRNA水平的变化;应用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法、流式细胞技术(FCM)、免疫组化以及透射电镜技术(TEM)分别对细胞增殖活性、细胞周期、p53蛋白水平以及细胞超微结构的改变进行检测分析。结果:3条siRNA均能有效抑制E6mRNA的转录表达,以siRNA1作用效果最为明显。MTT检测结果显示20、50和80nmol/L终浓度转染后细胞增殖活性均有所下降,其中以50nmol/L转染时增殖活性下降最明显。流式细胞术检测结果显示转染后G0/G1期细胞数占生长周期细胞数的比例增多,即表现为G1期阻滞,S期细胞的比例降低;免疫组化法检测对照组细胞P53蛋白灰度平均值为0.43±0.03,转染72h后细胞p53蛋白灰度平均值为0.75±0.06,差异有显著性(P<0.05);转染72h后透射电镜下可见细胞细胞质浓缩,胞质中出现空泡。结论:化学合成siRNA可有效沉默SiHa细胞E6基因的转录表达,进而导致细胞生物学行为的改变。

化学合成siRNA沉默宫颈癌SiHa细胞E6基因表达的进一步研究

目的探讨靶向HPV16E6基因特异性siRNA对SiHa细胞E6和E7基因表达的沉默效果,以及沉默作用对pRb、P53、Survivin和VEGF-C蛋白表达的影响。方法化学合成靶向HPV16E6基因的siRNA,脂质体法转染SiHa细胞。半定量RT-PCR检测siRNA对SiHa细胞E6和E7基因转录表达的影响;Western Blotting法检测pRb、P53、Survivin和VEGF-C蛋白的表达。结果RT-PCR检测结果显示,转染siRNA后24、48和72h组SiHa细胞E6和E7mRNA表达水平均明显低于对照组(F=80.71、182.18,P<0.05)。Western Blotting结果显示,与对照组相比,转染组pRb和P53蛋白表达明显升高(F=59.78、29.00,P<0.05),VEGF-C蛋白表达明显降低(F=7.58,P<0.05),Survivin蛋白的表达则没有发生明显变化(F=2.28,P>0.05)。结论HPV16E6特异性siRNA能同时抑制SiHa细胞内E6和E7基因的表达,进而引起P53、pRb以及VEGF-C蛋白表达水平的改变。

ZG28SiMnVCu铁轨道岔低碳马氏体淬火强化新工艺

矿山小铁路道岔在强烈的冲击和摩擦力作用下服役,道岔应能承受较高的交变载荷和冲击载荷与强烈的摩擦力,以及在偏载负荷作用下受到强烈的弯曲应力作用。为此道岔应有适宜的硬度、刚性和强韧性和较高的接触疲劳强度。众所周知,对低碳合金钢进行高温加热急冷淬火可获得硬度适中、刚性好、强韧性高的低碳板条马氏体组织;

吉妮致美环与欣悦环避孕效果及不良反应对比观察

目的:支架型IUD和无支架型IUD的避孕效果及不良反应发生情况。方法:采用随机对比试验,试验对象为750名25～40岁健康已婚育龄妇女需求或自愿使用IUD,并有条件接受随访2年者。随机给450名妇女放置吉妮致美环且给另外300名放置欣悦环;并于放置后1个月、3个月、6个月、1年、2年对其避孕效果,副反应进行观察。结果:致美组在去除子宫过软或子宫过度前后屈所致的脱落因素外?,脱落率显著低于欣悦环(P<0.01),带器妊娠率显著低于欣悦环(P<0.05),带器后出血率显著低于欣悦环(P<0.01)。结论:无支架型IUD与有支架型IUD相比,放置后脱落率低、副反应少,放置时间长,可被广大育龄妇女接受。

无支架吉妮致美IUD与有支架活性γ型IUD 3年临床使用效果对比

目的比较无支架宫内节育器(intrauterine contraceptive device,IUD)吉妮致美IUD和有支架活性γ型IUD的使用效果。方法对870例健康育龄妇女自愿使用IUD并有条件随访3年者,分别放置吉妮致美IUD(510例)与活性γ型IUD(360例);于放置后3个月及1、3年进行随访。结果吉妮致美IUD组脱落率显著低于活性γ型IUD组,续用率高于活性γ型IUD组,差异均有统计学意义(P<0.05);两组带器妊娠率、不良反应比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论无支架IUD与有支架IUD相比,脱落率低、续用率高、不良反应小,具有长期使用价值。