IL-17A通过PI3K/Akt通路促进肺癌A549细胞的增殖、迁移和侵袭

目的:研究IL-17A对肺癌A549细胞增殖、迁移和侵袭的影响及其分子机制。方法:使用不同浓度的IL-17A(0、1、10、100 ng/mL)分别作用于A549细胞。CCK-8检测IL-17A对A549细胞增殖的影响;划痕修复实验和Transwell细胞侵袭实验检测IL-17A对A549细胞迁移和侵袭的影响;Western blot检测IL-17A对PI3K/Akt信号通路和凋亡通路蛋白表达的影响;流式细胞术检测IL-17A对A549细胞凋亡的影响;IL-17A和PI3K抑制剂LY294002共同作用于A549细胞,划痕修复实验观察对A549细胞迁移的影响。结果:IL-17A可以促进A549细胞的增殖,其对A549细胞增殖的促进作用随着IL-17A浓度的增加而增加。IL-17A能够促进PI3K和Akt磷酸化蛋白表达、抑制凋亡蛋白caspase3的表达,并抑制A549细胞的凋亡。LY294002可以明显减弱IL-17A对A549细胞迁移的促进作用。结论:IL-17A通过PI3K/Akt通路抑制A549细胞的凋亡,从而促进A549细胞的增殖、迁移和侵袭。

肿瘤细胞来源的趋化因子对肿瘤骨转移的影响

骨转移是乳腺癌、前列腺癌、肺癌等恶性肿瘤常见的晚期并发症,肿瘤细胞转移至骨组织后可引起慢性疼痛、病理性骨折、高钙血症等并发症,对患者的生活质量和生存带来不利影响。肿瘤细胞向骨组织转移的过程极为复杂,与肿瘤细胞本身的特性和骨组织形成的特殊微环境等因素相关。肿瘤细胞可以分泌多种细胞因子,影响骨转移的发生,而趋化因子作为一大类细胞因子能够影响细胞的迁移,越来越多的研究证实肿瘤细胞分泌的趋化因子与肿瘤细胞骨转移的发生密切相关。未来深入研究肿瘤细胞来源的趋化因子影响骨转移的相关机制,有望为肿瘤骨转移的防治提供新策略。

股骨干骨折术后钢板断裂的原因分析及治疗策略

股骨干骨折在临床中较为常见,主要行手术内固定治疗。锁定钢板内固定是治疗股骨干骨折的常用方法,钢板选择和应用不当、术中操作不当及术后过早功能锻炼等因素均可导致术后钢板的断裂,不利于患者骨折愈合及康复,并为社会和家庭带来沉重负担。股骨干骨折术后钢板断裂治疗方法的选择尤为重要,目前主要包括保守治疗和再次手术治疗。本文主要对近年来股骨干骨折术后钢板断裂的原因及治疗方法的研究进展进行综述,旨在为临床治疗股骨干骨折术后钢板断裂提供理论支持。

高浓度IL-17A通过PI3K/Akt通路抑制破骨细胞前体细胞自噬抑制破骨细胞分化的机制研究

目的探讨高浓度IL-17A通过PI3K/Akt通路抑制破骨细胞前体细胞自噬抑制破骨细胞分化的影响及分子机制。方法采用50 ng/ml核因子κB受体活化因子配体(receptor activator of nuclear factor-κB ligand,RANKL)诱导破骨细胞前体细胞(osteoclast precursor cells,OCPs),建立破骨细胞分化模型。将高浓度IL-17A(100 ng/ml)作用于破骨细胞分化模型,将RAW264.7细胞分为阴性对照组及加入RANKL的阳性对照组、IL-17A组、IL-17A+LY294002组;破骨细胞原代细胞(bone marrow derived macrophages,BMMs)分为加入巨噬细胞集落刺激因子(macrophagecolony stimulating factor,M-CSF)的阴性对照组及加入M-CSF与RANKL的阳性对照组、IL-17A组、IL-17A+LY294002组。通过IL-17A作用OCPs,抗酒石酸酸性磷酸酶(tartrate-resistant acid phosphatase,TRAP)染色观察破骨细胞分化的数量;透射电镜观察自噬小体的数量;通过IL-17A作用RAW264.7,Western blot检测p-Akt/Akt、p-mTOR/mTOR、p-PI3K/PI3K、p-ULK1/ULK1、Cleaved-caspase3/caspase3、Beclin1/β-Actin的相对表达量;通过IL-17A作用RAW264.7,流式细胞术检测RAW264.7细胞凋亡率;通过IL-17A与PI3K抑制剂LY294002作用OCPs,TRAP染色观察破骨细胞分化的数量。结果TRAP染色示RAW264.7细胞阴性对照组、阳性对照组、IL-17A组阳性细胞比例分别为1.33%±0.58%、100%±3.01%、51.11%±4.02%,IL-17A组低于阳性对照组,差异有统计学意(t=16.970,P<0.05);BMMs细胞阴性对照组、阳性对照组、IL-17A组阳性细胞比例分别为1.67%±0.58%、100%±1.01%、50.33%±2.52%,IL-17A组低于阳性对照组,差异有统计学意义(t=31.770,P<0.05)。透射电镜示RAW264.7细胞阳性对照组自噬小体数量为3.67±1.53,高于IL-17A组的0.67±0.58,差异有统计学意义(t=3.182,P<0.001);BMMs细胞阳性对照组自噬小体数量为3.00±1.00,高于IL-17A组的0.33±0.58,差异有统计学意义(t=4.000,P<0.001)。Western blot结果示RAW264.7细胞阳性对照组p-Akt/Akt、p-mTOR/mTOR、p-PI3K/PI3K、p-ULK1/ULK1、Cleaved-caspase3/caspase3、Beclin1/β-Actin分别为0.69±0.03、0.69±0.13、1.47±0.13、0.78±0.04、0.66±0.10、0.82±0.03,IL-17A组分别为0.89±0.04、1.14±0.18、1.87±0.04、0.53±0.09、0.93±0.02、0.54±0.03,差异均有统计学意义(P<0.05)。流式细胞术检测示RAW264.7细胞阳性对照组细胞凋亡率为6.92%±0.62%,低于IL-17A组的12.12%±0.69%,差异有统计学意义(t=9.747,P<0.001)。使用LY294002后的TRAP染色示RAW264.7细胞阴性对照组、阳性对照组、IL-17A组、IL-17A+LY294002组阳性细胞比例分别为9.00%±2.00%、158.33%±3.51%、100%±2.65%、128.99%±4.01%,IL-17A+LY294002组高于IL-17A组,差异有统计学意义(t=10.470,P<0.001);BMMs细胞阴性对照组、阳性对照组、IL-17A组、IL-17A+LY294002组阳性比例分别为8.01%±0.99%、151.67%±4.51%、100%±3.61%,IL-17A+LY294002组高于IL-17A组,差异有统计学意义(t=6.535,P<0.001)。结论高浓度IL-17A通过PI3K/Akt通路抑制破骨细胞前体细胞自噬抑制破骨细胞分化。