炎症因子风暴对老年小鼠感染免疫应答的影响

目的高致病性禽流感感染小鼠后,肺内检测出过量表达的炎症因子,即炎症因子风暴。老年感染者体内更加常见高水平的炎症应答。本文探讨了炎症风暴对老年宿主肺内抗感染免疫应答的影响。方法采用老年小鼠(18～24月龄)以流感病毒H9N2攻毒,建立了老年小鼠感染模型。对照组为H9N2感染的成年小鼠(6～8周)。分别定量分析了H9N2感染的老年小鼠肺原位和外周血中炎症因子的表达,并在感染的急性期内,收集的小鼠肺组织,分别制备成切片和消化为单细胞悬液。其中,肺组织切片用于免疫组化原位定量分析免疫细胞分布;从细胞悬液中分选出T细胞,进行染色计数。结果与成年小鼠相比,老年小鼠感染H9N2病毒后,体重下降显著,生存率仅为50%。但是,与成年小鼠感染后肺组织很少检出炎症因子相比,老年小鼠肺内出现炎症因子风暴,炎症因子IL-6和趋化因子MCP-1异常高表达,且在感染后第2天达到峰值(超过4000 pg/m L),是成年对照小鼠的100～1000倍。老年小鼠感染H9N2病毒后,与成年对照相比,其肺巨噬细胞应答更低,肺中性粒细胞的迁徙能力更弱,感染后第3～7天内更多地滞留在肺内。此外,老年小鼠感染H9N2后第7天,肺内CD8+T细胞数量显著下降,CD4+T细胞数量与比例则维持正常。结论老年小鼠感染H9N2病毒后肺组织出现炎症因子风暴。参与抗感染免疫应答的细胞种类虽然与成年小鼠无显著差异,但是免疫细胞的迁徙能力降低,参与应答的获得性细胞免疫强度也显著降低。

生理性衰老小鼠的感染免疫模型建立

目的生理性衰老导致机体免疫功能下调,进而使老年人群感染免疫应答能力降低,针对新发突发传染病的病原体如重症流感病毒的易感性上升,罹患感染后,临床症状也更严重,预后不佳。因此,本课题组建立一个拟合临床重症流感病毒感染的老年小鼠模型,用于评价老年宿主感染免疫应答特征。方法采用不同毒力的流感病毒H7N9(高致病性)、H9N2(低致病性)分别滴鼻感染老年C57小鼠(18～24月龄),分析其感染后体重变化和生存情况,并动态检测肺内病毒的复制,炎症因子的表达以及肺的病理损伤。结果与成年对照组小鼠(6～8周龄)相比,老年小鼠感染H9N2后7天体重下降了30%(成年对照仅下降10%),生存率降低至50%(成年对照为100%)。老年小鼠肺内H9N2病毒复制更高(P<0.01),感染后第2天达到峰值(每克肺内RNA病毒拷贝为3.2×10~4);以炎症因子IL-6、趋化因子MCP-1为代表的肺内炎症过量表达,是成年对照的100～1000倍;肺病理染色提示老年小鼠肺损伤更严重,感染后修复时间更长。结论成功建立老年小鼠感染模型,在感染生存、肺病毒复制和炎症损伤等方面可以重现临床感染免疫应答的现象。可应用于深入理解老年宿主感染相关的机制研究与抗感染药物评价。

复方鳖甲软肝片治疗免疫性肝纤维化大鼠肝细胞质膜蛋白质组分的变化

目的研究复方鳖甲软肝片治疗肝纤维化大鼠肝细胞质膜蛋白质组分的变化,以寻找与肝纤维化逆转相关的质膜蛋白质。方法以猪血清腹腔注射大鼠8周制备肝纤维化模型,再以复方鳖甲软肝片灌胃治疗8周。采用蔗糖密度梯度离心获得肝组织匀浆和质膜组分,采用免疫印迹法检测质膜的纯度,分析差异蛋白质组学变化。结果病理学检查发现实验8周后,大鼠肝脏发生中度肝纤维化;经鳖甲软肝片治疗8周后肝纤维化程度减轻,基本恢复到正常水平;免疫印迹检测显示质膜组分得到了较好的富集,其中线粒体等其他细胞器蛋白减少;通过差异蛋白质组学分析发现,治疗组中有22个3倍以上差异蛋白质点,准确鉴定了9个蛋白质,通过免疫印迹验证发现了II型细胞支架蛋白8和膜联蛋白A2的差异表达。结论鳖甲软肝片治疗后,大鼠肝纤维化发生了逆转,并伴随一些质膜蛋白质的表达变化。

冬鲽鱼抗冻蛋白基因的人工合成

合成适合在棉花中表达的冬鲽鱼抗冻蛋白(Winter flounder antifreeze protein,Wf-AFP)基因.参照冬鲽鱼抗冻蛋白的氨基酸序列及棉花偏爱的密码子,重新设计适合在棉花中表达的Wf-AFP基因序列;根据此序列设计6条寡核苷酸引物,通过PCR方法将其拼接成完整的基因;克隆到pUCm-T载体上,转化大肠杆菌DH5α,抽提重组子进行酶切鉴定及序列分析.结果表明合成的Wf-AFP基因序列与设计方案完全相符,通过PCR介导的基因合成方法成功获得了适合在棉花中表达的冬鲽鱼抗冻蛋白基因.

广谱流感疫苗的研究进展

流行性感冒(简称流感)的频频暴发严重危害人类健康和公共卫生,已引起全球范围内的高度关注。预防流感最有效和经济的措施是接种疫苗,但流感病毒的持续变异可逃逸人群已有的免疫应答,目前使用的季节性流感疫苗仅对亚型内抗原匹配较好的毒株产生免疫保护作用,难以有效应对因抗原漂移或抗原转换而产生的无法预料的流感大流行。因此,研发对流感病毒不同亚型均具有交叉免疫保护作用的广谱流感疫苗具有重要意义。近年来,流感病毒广谱中和抗体的发现、对流感病毒抗原保守区域及细胞免疫机制的深入研究、疫苗免疫策略的优化等都为广谱流感疫苗的研发提供了新思路。本文简述了近几年基于血凝素、基质蛋白、核蛋白等多种流感靶抗原的广谱流感疫苗的研究进展。

剖宫产术后镇痛硬膜外对母儿的影响

目的 :探讨剖宫产术后硬膜外微量镇痛对产妇和新生儿的影响。方法 :比较硬膜外微量镇痛组与肌肉注射镇痛组的镇痛效果 ,观察两组产妇的阴道流血量、生命体征情况和恶心呕吐、呼吸抑制等副反应发生情况以及新生儿出生后的体重变化。结果 :术后两组的哌替啶 (度冷丁 )用量相当 ( P>0 .0 5 ) ;两组的镇痛效果优于对照组 ,镇痛组产妇在术后 4 h、 8h、 2 4 h的伤口疼痛视觉模拟评分 ( VAS)低于对照组 ( P<0 .0 5 ) ;镇痛组的恶心呕吐发生率低于对照组 ( P<0 .0 5 ) ;两组阴道流血量无统计学差异 ( P>0 .0 5 ) ;两组新生儿体重在出生后第 3天差异有显著性 ( P<0 .0 5 )。结论 :剖宫产术后硬膜外持续输注微量低浓度布比卡因和哌替啶混合液镇痛 ,可达到充分镇痛、促进泌乳的目的 。

乙型肝炎病毒阳性父-婴垂直传播的临床研究

目的探讨乙型肝炎病毒阳性父婴垂直传播的关系。方法采用血清酶联免疫吸附试验(ELISA)筛选出母亲HBsAg阴性、父亲HBsAg阳性85例(A组)作为研究对象,以及母亲HBsAg阳性、父亲HBsAg阴性132例(B组)作为对照组;并用ELISA和荧光定量聚合酶链反应(FQPCR)技术检测两组新生儿的血清HBsAg和HBVDNA。结果两组的新生儿血清HBsAg检出率比较,差异无显著性(χ2=1.23,P>0.05);两组的新生儿血清HBVDNA检出率比较,差异无显著性,(χ2=0.56,P>0.05)。A组中父亲是大三阳的新生儿血清HBsAg和HBVDNA的检出率高,差异有显著性(χ2=6.41,P<0.05);A组新生儿血清HBVDNA的总检出率比血清HBsAg的总检出率高,差异有显著性(χ2=5.83,P<0.05)。结论乙型肝炎病毒阳性父亲可以垂直传播给新生儿引起宫内感染,大三阳父亲更容易发生父婴垂直传播。

妇幼保健医院门诊实施艾滋病PITC策略效果

目的了解在妇幼保健医院实施医务人员提供艾滋病检测咨询（PITC）策略的可行性，探讨艾滋病检测率的影响因素，为在艾滋病防治工作中推广实施PITC策略提供参考。方法2010年6月-2011年8月，选择广州市番禺区妇幼保健医院作为临床医疗机构试点，共选择3个门诊量较大的门诊科室作为试点，收集试点工作报表和访谈结果等资料进行分析。结果项日周期内，共计为57309人提供PITC服务，其中19809人（34．57％）接受艾滋病检测，婚检科、产科和妇科的艾滋病检测人数分别为9817人（100．00％）、6157人（35．63％）和3569人（12.37％）。产科艾滋病检测率高于妇科，差异有统计学意义（X^23514．72，P〈0．01）。在接受检测的19809人中，确认HIV阳性者3人（0．15％。1。产科和妇科调查对象拒绝艾滋病检测的主要原因均为认为自身没有感染艾滋病的可能性，分别占41．00％和59．00％。产科和妇科检测率与前15个月相比，差异均有统计学意义（P〈0．01）。结论在妇幼保健医院实施PITC策略具有可行性，政策支持、检测费用等对PITC的开展有重要影响。

大子宫肌瘤经阴道子宫全切的术式探讨

目的 寻求经阴道行大子宫肌瘤切除的可行性研究。方法 选择我院 2 0 0 1年 1月～ 2 0 0 3年 9月对 70例子宫增大如 10～ 16孕周 (重 185～ 72 0g)的患者施行子宫全切术。观察组 3 0例采用经阴道子宫对半切开或子宫分碎 ,子宫肌瘤剔除等缩小子宫体积后切除子宫。对照组 40例常规实施经腹子宫全切除术 (TAH)。结果 2 9例大子宫肌瘤患者子宫经阴道成功切除 ,成功率 96.7% ;1例中转经腹手术。平均手术时间 (95± 12 .7)min ,平均出血量 (162 .7± 5 6.3 2 )ml ,术后平均住院时间 (4± 1.3 )d ,术后随访 2～ 12个月 ,无远期并发症。结论 大子宫肌瘤经阴道切除是安全和有效的。

从海战中走出的“椰子总统”

1961年1月20日，在鲜花和掌声中，年仅43岁的肯尼迪坐上了美国总统的宝座，这谁都知道。然而，鲜为人知的是：肯尼迪还有一个“椰子总统”的称号，这得从他入伍当海军后的一段传奇经历说起。

急症子宫切除术在产科大出血中的应用及价值

目的探讨产科急症子宫切除术在抢救产科大出血中的应用价值。方法采用回顾性资料分析方法,对我院1993年—2003年间收治的10例因产科急症行子宫切除术患者的临床资料进行分析。结果10例均为经保守治疗不能控制的产科大出血患者。其中DIC5例,胎盘粘连2例,宫缩乏力、子宫破裂、剖宫产术后晚期子宫切口感染各1例。出血量1500—3870ml,平均2472ml。10例患者均行急症子宫切除术后痊愈出院。相关因素分析显示,孕产次、多胎妊娠、分娩方式等因素与产科急症子宫切除术相关。结论产科急症子宫切除术是治疗急性产科大出血的有效措施之一。

生死漂流133天

1942年11月23日，航行在大西洋中的“斑罗蒙”号轮船被德军鱼雷击沉，22岁的中国船员潘濂一下子落入了冰冷的海水中，他向四周张望，突然看见远处有个木筏。潘濂用尽气力爬上木筏，极度的疲倦使他顾不上寒冷，不一会儿就在瑟瑟颤抖中睡着了。

民船——渡海作战不可或缺的力量

民船是指各类非军事用船的统称,包括运输船(含货轮、客轮、旅游船、客货船、渡船、驳船等)、工程船(含海洋开发船、挖泥船、打捞救生船、浮船坞等)、渔业船、农用船和运动船等。

简析石油工程服务单位作业班组管理要点

近年来,随着我国社会的快速发展,石油市场的不断改革和完善,对石油营销管理也提出了越来越高的要求。在这种形势下,石油公司要想更好地发展,实现公司的利益,要对石油工程服务进行班组管理。对石油的质量、工作人员的态度等进行严格的审查,积极发现其中有问题的地方,不断地提高石油行业的发展,促进我国综合实力的发展。

深圳市光明新区传染病上报存在现状及对策调查分析

目的了解深圳市光明新区基层医疗机构的传染病疫情报告情况。方法采用现场提问和查阅资料的方法,并将结果汇总进行描述性分析。结果 109医疗机构的门诊日志及传染病登记本、报告卡,有上报传染病的医疗机构只有35家;传染病报告卡不合格的有6家,有使用电脑直报系统的医疗机构只有8家;在社会医疗机构中,有配备传染病登记本及报告卡的单位有35家,占医疗机构的32.1%;现场提问200位相关诊室的医生,对于传染病的分类能够清楚回答的有占173人,对于传染病报告卡上的甲、乙类传染病类型能够回答正确的只有123人,在接诊时遇到传染病病人建议转诊的有71人。结论基层社会医疗机构存在较大问题,包括未配备传染病登记本及报告卡、对传染病报告系统不熟悉、对传染病的分类不熟悉;对于医院及社区健康服务中心,存在较大问题的是填写传染病报告卡不熟悉、对于传染病上报系统操作不熟练。

中国HIV-1 CRF01_AE流行株结构基因和调节／辅助基因DNA疫苗的构建和免疫原性研究

目的构建表达gag—env融合基因和tat-rev-integrase（c-half）-vif-nef融合基因的DNA疫苗，并评价其免疫原性。方法按人源密码子使用频率对AE2f株的gag、env、tat、rev、integrase、vif和nef基因序列进行优化，构建真核表达质粒。用Westernblot法验证体外表达情况；用ELISPOT法检测小鼠的细胞免疫反应。结果限制性酶切及DNA测序结果表明两个融合基因质粒构建正确，可以表达相应的融合蛋白。ELISPOT结果显示，Gag—Env特异性的T细胞反应强度为（3010±566）SFC／10^6脾细胞；Tat-Rev—Integrase（C．half）-Vif-Nef融合蛋白特异性的T细胞反应为（948±737）SFC／10^6脾细胞，均显著高于空载体组。结论构建的表达HIV-1CRF01_AE流行株gag—env融合基因和tat—rev-integrase（c-half）-vif-nef融合基因的DNA疫苗可以正确表达所编码的融合蛋白并有效地激活机体的T细胞免疫反应。

利用小鼠炎症模型评价苯扎氯铵的黏膜毒性

目的利用小鼠黏膜炎症因子模型,研究不同浓度苯扎氯铵(BZK)对生殖道黏膜的刺激毒性,以探究BZK作为黏膜用药物的安全性和应用前景。方法连续三天用浓度为0.02%、0.2%和2%的BZK凝胶处理小鼠阴道黏膜,每天收集小鼠阴道灌洗液,用多指标流式蛋白定量技术(Cytometric Bead Array,CBA)检测其中的6种炎症因子[白介素(Interleukin,IL)-2、IL-4、IL-6、IL-17A和肿瘤坏死因子(Tumor necrosis factor,TNF)-α、γ干扰素(Interferonγ,IFN)-γ]的表达情况;利用苏木紫-伊红(Hematoxylin-Eosin,HE)染色法对小鼠阴道黏膜的病理学损伤情况进行观察。结果 2%的BZK凝胶诱导了较为明显的小鼠阴道黏膜上皮损伤,0.02%和0.2%的BZK与安慰剂组相比无明显病理改变;但是0.2%的BZK显著上调了IL-6和TNF-α在阴道灌洗液中的表达,而0.02%和2%的BZK诱导的各炎症因子与安慰剂组相比差异无统计学意义。结论 2%和0.2%的BZK具有一定的黏膜毒性;0.02%的BZK展现了较好的安全性,该浓度下BZK的病原体感染抑制能力需要进一步研究确认。

实时相对定量反转录PCR检测小鼠阴道黏膜炎症因子的表达

目的建立实时相对定量反转录聚合酶链反应(real-time RQ RT-PCR)方法,能快速准确地检测各种炎症因子在阴道黏膜的转录表达情况,从而评价包括杀微生物剂在内的生殖道或直肠黏膜用候选药物的刺激毒性。方法以Eppendorf Mastercycler ep realplex实时荧光定量PCR仪为检测平台,选择小鼠β-actin基因为内参,建立基于SYBR GreenⅠ荧光染料的real-time PCR检测方法,对白介素2(Interleukin 2,IL-2)、IL-4、IL-6、IL-10、IL-17A、肿瘤坏死因子α(Tumor necrosis factorα,TNF-α)、γ干扰素(Interferonγ,IFN-γ)等炎症因子在生殖道黏膜的mRNA转录水平,同时进行检测,并用2-⊿⊿Ct方法计算实验组小鼠目的基因相对于空白组小鼠的表达差异情况。用微量样本多指标流式蛋白定量技术(Cytometric Bead Array,CBA)对结果进行验证。结果使用real-time RQRT-PCR能对小鼠阴道黏膜炎症因子的表达情况进行快速检测,结果与CBA检测结果相吻合。结论该方法快速、灵敏、特异性强、价格低廉、高通量。可用于杀微生物剂等生殖道或直肠黏膜用候选药物的临床前安全性评价工作。