共表达分子伴侣蛋白提高III型普鲁兰水解酶在短小芽孢杆菌中的分泌表达及发酵优化

本研究旨在通过共表达分子伴侣蛋白以及优化发酵条件来提高III型普鲁兰水解酶(TK-PUL)在短小芽孢杆菌中的分泌表达水平。通过构建共表达TK-PUL和分子伴侣蛋白的多种重组短小芽孢杆菌,并以胞外酶活为指标对其进行筛选,确定最有利于TK-PUL分泌表达的分子伴侣蛋白及对应的重组短小芽孢杆菌。在此基础上采用单因素实验和响应面法优化重组短小芽孢杆菌的发酵条件。结果表明,共表达分子伴侣蛋白PrsA^(Ba)的重组短小芽孢杆菌的胞外酶活达到98.79 U/mL,提高了0.31倍。该重组短小芽孢杆菌的最佳培养基包括19.65 g/L葡萄糖、21.46 g/L酵母提取物、12.01 g/L MgCl_(2)·6H_(2)O、9.02 g/L脯氨酸、0.01 g/L FeSO4·7H_(2)O、0.01 g/L MnSO4·4H_(2)O、0.001 g/L ZnSO4·7H_(2)O。在发酵温度为35℃、起始发酵pH为7.0的条件下,该重组短小芽孢杆菌于最佳培养基中培养66 h时,其胞外酶活达到192.68 U/mL,提高了1.56倍。本研究通过共表达分子伴侣蛋白和发酵优化实现了TK-PUL在短小芽孢杆菌的高效分泌表达,为TK-PUL的应用提供了基础。

嗜酸乳杆菌表达载体的构建及其甘露聚糖酶的表达

为获得产甘露聚糖酶的嗜酸乳杆菌(Lactobacillus acidophilus)菌株,该研究构建甘露聚糖酶表达载体并转化嗜酸乳杆菌,分析重组嗜酸乳杆菌产甘露聚糖酶的酶学性质,并测定重组嗜酸乳杆菌的耐酸性及甘露聚糖酶的抗蛋白酶活性。结果表明,重组嗜酸乳杆菌发酵24 h,其所产甘露聚糖酶活性为353 U/m L。甘露聚糖酶的最适催化pH值为5.5,最适催化温度为55℃。重组嗜酸乳杆菌在pH 2.0~4.5有一定的耐酸性,在pH 2.0条件下2 h的存活率为77.3%。甘露聚糖酶液用胃蛋白酶、胰蛋白酶处理160 min后,甘露聚糖酶的相对酶活分别为65%、28%。表明该甘露聚糖酶具有一定的抗胃蛋白酶和部分抗胰蛋白酶降解能力。

苎麻织物退浆与整理一浴法工艺优化

为研究苎麻织物退浆与整理一浴法处理工艺,采用含纤维素酶和淀粉酶的复合酶处理苎麻织物,分别研究了pH值、温度、浴比、整理时间、酶质量分数对苎麻织物刺痒感的影响。结果表明:在pH值5.0,温度50℃,浴比1∶10,整理时间30 min,淀粉酶质量分数1.25%,纤维素酶质量分数1.00%条件下,苎麻织物刺痒感降低41.6%,退浆率达到92.8%,失重率为11.8%,经向纬向断裂强力损失率分别为11.2%和13.5%。该复合酶一浴法技术缩短了苎麻织物退浆与整理的工艺流程,降低了苎麻织物的刺痒感,并能保持较好的织物强力。

嗜热酸性Ⅲ型普鲁兰水解酶协同压热制备莲子抗性淀粉的工艺优化及其功能特性研究

本研究以莲子淀粉为原料,采用嗜热酸性Ⅲ型普鲁兰水解酶(TK-PUL)与压热联合制备RS3型抗性淀粉(EHP-LRS3)。通过单因素实验和响应面试验对TK-PUL与压热联合制备EHP-LRS3的工艺参数进行了优化,采用扫描电子显微镜和X-射线衍射对EHP-LRS3的形貌、晶体结构进行了观察与分析,并考察了EHP-LRS3对长双歧杆菌的促增殖能力。结果表明,在TK-PUL酶解温度为80℃时制备EHP-LRS3的最佳工艺为:向质量分数为35.32%的莲子淀粉乳(pH5.00)中添加25.00 U/g(莲子淀粉)的TK-PUL,将混合物于80℃处理12.70 h,再将其依次于121℃压热处理10 min、4℃回生处理24 h。在最佳工艺条件下,EHP-LRS3的得率为58.46%。扫描电镜分析显示EHP-LRS3呈不规则的沟壑状结构。X-射线衍射分析表明EHP-LRS3的晶体结构呈现出不同于莲子淀粉A型晶体结构的B型晶体结构。EHP-LRS3对长双歧杆菌的促增殖能力优于压热法制备的RS3型抗性淀粉(HP-LRS3)。本研究采用TK-PUL与压热联合制备得到高得率的RS3型抗性淀粉(EHP-LRS3),并验证了EHP-LRS3对长双歧杆菌的促增殖能力,为莲子淀粉的高值化利用提供了理论依据。

蛋白质分子表面氨基酸突变提高植酸酶Yi APPA的活性和热稳定性

为了提高植酸酶的活性和热稳定性,增加其在食品加工领域的应用潜力,对植酸酶Yi APPA进行同源模建,结合蛋白质分子表面氨基酸突变策略,选择位于分子表面的赖氨酸和甘氨酸进行定点突变,构建单位点突变体。通过活性和热稳定性筛选,获得活性和热稳定性显著提高的突变体K216R以及热稳定性提高的突变体K189R。通过有益突变位点叠加策略,进一步构建并表征组合突变体K189R/K216R的酶活力及热稳定性。结果表明:与Yi APPA相比,K189R/K216R于80℃半衰期由14.81 min延长至23.35 min,半失活温度由55.12℃提升至62.44℃,热解折叠温度由48.36℃提升至53.18℃。并且K189R/K216R于37℃、pH 4.5的酶活力由3959.98 U/mg提高至4469.13 U/mg。分子结构建模和分子动力学模拟的结果显示:K189R/K216R中引入了新的氢键,能够提高酶部分结构单元的稳定性,使其热稳定性得到提高;同时K189R/K216R的催化口袋体积增大是其活性提高的主要原因。本研究通过蛋白质分子表面氨基酸突变策略可有效提高植酸酶Yi APPA的活性和热稳定性,为植酸酶及其他类型酶的分子改造提供参考依据。

植酸酶基因在嗜酸乳杆菌中的表达

植酸酶和嗜酸乳杆菌是重要的饲料添加剂,为获得产植酸酶的嗜酸乳杆菌菌株,克隆了大肠杆菌植酸酶基因,构建表达载体并转化嗜酸乳杆菌,对重组嗜酸乳杆菌进行发酵产酶并测定所产酶液的酶学性质,进一步研究重组嗜酸乳杆菌的耐酸性及植酸酶液的抗蛋白酶活性。结果表明:重组嗜酸乳杆菌发酵24 h植酸酶活性为984 U/mL,植酸酶的最适催化pH为4.5,最适催化温度为60℃。重组嗜酸乳杆菌在pH 2.0~4.5有一定的耐酸性,在pH 2.0条件下2 h的存活率为76.4%。植酸酶液用胃蛋白酶处理160 min后植酸酶液剩余85%的相对酶活,用胰蛋白酶处理160 min后剩余29%的相对酶活。上述研究结果为重组嗜酸乳杆菌后续应用研究提供了重要依据。

多粘类芽孢杆菌发酵液对脐橙果树内生菌的抑菌研究

目的:验证一种多粘芽孢杆菌发酵液对脐橙果树内生菌抑制特性,为筛选治理黄龙病的药物奠定基础。方法:纯化培养黄龙病果树内生菌,经16S rDNA鉴定菌属,选择和黄龙病菌有相关性的内生菌为药敏实验菌株,以青霉素G、四环素、利福平、链霉素、吡哌酸、氨苄西林和多粘类芽孢杆菌发酵液为对比抑菌药物,分析抑菌差异以便筛选合适的内生菌抑菌药物。结果:分离获得黄龙病菌的相关性内生菌6株,药敏实验发现链霉素对所有菌株无药敏,青霉素G、利福平、氨苄西林对细杆菌属具有高药敏性,四环素对代尔夫特菌属和不动杆菌属具有高药敏性,发酵液对代尔夫特菌属和伯克霍尔德菌属具有高的药敏性,其中,利福平对所有菌株均有药敏性,四环素仅对伯克霍尔德菌属无药敏性。结论:多粘类芽孢杆菌发酵液对黄龙病果树内生菌有优良的抑制效果。

100例门诊体检人群高血压检出及降压药使用情况调查分析

目的:分析100例门诊体检人群中高血压检出情况,并调查确诊人群降压药用药情况,为临床合理用药提供参考。方法:选取2023年5月—2024年5月遵义市第一人民医院门诊100例体检人群为研究对象,调查体检者基本资料,监测血压,并统计100例体检人群的高血压检出率以及降压药使用情况。结果:100例体检者中,检出高血压32例,检出率为32.00%;检出正常高值27例,检出率为27.00%。随着年龄增长,高血压检出率呈上升趋势,>60岁体检者的高血压检出率最高,为45.45%。体质量指数(BMI)越大,高血压检出率越高,以BMI>28 kg/m^(2)时检出率最高,为57.14%。32例高血压者中,以二联用药占比最高,为43.75%,其次为单一用药,占比31.25%,常用药为氨氯地平、缬沙坦、美托洛尔、贝那普利、沙库巴曲缬沙坦、厄贝沙坦氢氯噻嗪。结论:年龄较高、BMI较大者,更易发生高血压,给予2种及以上药物联合治疗,更利于保证降压药的有效性。

基于NF-κB信号通路的玉屏风散加味含药血清对RLE-6TN细胞炎症反应的影响

目的观察玉屏风散加味含药血清对大鼠肺上皮Ⅱ型细胞RLE-6TN炎症反应的影响,基于核因子(NF)-κB信号通路探讨其作用机制。方法采用脂多糖诱导RLE-6TN细胞炎症反应,将细胞分为对照组、模型组、地塞米松血清组和5%、10%、20%中药血清组,分别以不同血清干预细胞24 h。试剂盒检测细胞上清液乳酸脱氢酶(LDH)含量,荧光染色检测细胞活性氧(ROS)含量,Hoechst/PI双染观察细胞凋亡情况,ELISA检测细胞上清液肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-6、IL-1β含量,RT-qPCR检测细胞Toll样受体4(TLR4)、髓样分化因子88(MyD88)、NF-κB抑制蛋白α(IκBα)mRNA表达,Western blot检测细胞TLR4、MyD88、NF-κBp65、IκBα蛋白表达。结果与对照组比较,模型组RLE-6TN细胞上清液LDH、TNF-α、IL-6、IL-1β及细胞ROS含量显著升高(P<0.01),细胞凋亡率显著升高(P<0.01),TLR4、MyD88 mRNA和蛋白表达显著升高(P<0.01),IκBαmRNA表达显著降低(P<0.01),p-NF-κBp65/NF-κBp65、p-IκBα/IκBα比值显著升高(P<0.01);与模型组比较,20%中药血清组和地塞米松血清组细胞RLE-6TN细胞上清液LDH、TNF-α、IL-6、IL-1β及细胞ROS含量显著降低(P<0.01),细胞凋亡率显著降低(P<0.01),TLR4、MyD88 mRNA和蛋白表达显著降低(P<0.05,P<0.01),IκBαmRNA表达显著升高(P<0.01),p-NF-κBp65/NF-κBp65、p-IκBα/IκBα比值显著降低(P<0.05,P<0.01)。结论玉屏风散加味含药血清可减轻RLE-6TN细胞炎症反应,其机制可能与调控NF-κB信号通路有关。

设施环境下四个软枣猕猴桃品种光合特性

以设施栽培环境下二年生软枣猕猴桃品种为试材,采用乙醇浸提法测定叶片的叶绿素含量、Li-6400XT便携式光合仪测定光合作用参数、光响应曲线等光合生理指标,研究了4个软枣猕猴桃品种叶片在设施环境下的光合特性差异,以期为新疆阿拉尔垦区筛选出适宜的栽培品种,并为其高产优质栽培提供基础数据。结果表明:4个软枣猕猴桃品种叶绿素含量‘龙城2号’最高;叶片净光合速率(Pn)和气孔导度(Gs)日变化曲线呈双峰型,蒸腾速率(Tr)日变化曲线呈单峰型。净光合速率(Pn)大小依次为‘龙城2号’>‘魁绿’>‘缤果’>‘康甜’。‘魁绿’光饱和点(LSP)、光补偿点(LCP)较高,‘龙城2号’最大净光合速率(Pnmax)、暗呼吸速率(Rd)较高,‘缤果’居中,‘康甜’最低。光合有效辐射(PAR)对净光合速率(Pn)影响较大,气孔导度(Gs)、蒸腾速率(Tr)、胞间CO_(2)浓度(Ci)、环境温度(Ta)、空气相对湿度(RH)等参数次之。累计方差贡献率为96.515%,4个软枣猕猴桃品种的综合得分排序依次为‘龙城2号’>‘魁绿’>‘缤果’>‘康甜’。综上,‘龙城2号’光合能力较高,水分利用率较好,对光的适应性较强,较适宜在南疆设施栽培下生长,‘魁绿’‘缤果’次之,‘康甜’最弱。

复方鱼桔颗粒通过抑制BMDM中NLRP3炎症小体激活发挥抗炎效果的作用机制研究

目的:研究复方鱼桔颗粒(FFYJ)对脂多糖(LPS)诱导的原代骨髓来源的巨噬细胞(BMDM)炎症模型的影响,及其对巨噬细胞中核苷酸结合寡聚结构域样受体蛋白3(NLRP3)炎症小体信号通路的干预作用。方法:从C57BL/6小鼠腿部骨髓中提取并分离出原代细胞,经50 ng/ml M-CSF诱导7 d后得到BMDM。分为对照组(Control)、模型组(LPS+ATP)、FFYJ低剂量组(FFYJ 50μg/ml)、FFYJ中剂量组(FFYJ 100μg/ml)、FFYJ高剂量组(FFYJ 200μg/ml)、阳性药地塞米松组(DEX)。FFYJ治疗组和阳性药组预处理BMDM 1 h后开始造模。乳酸脱氢酶(LDH)释放法检测各组细胞上清中LDH的含量;ELISA检测各组细胞上清中炎症因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、IL-6和IL-1β的含量;qRT-PCR检测各组细胞中TNF-α、IL-6和IL-1β mRNA水平;Western blot检测各组细胞中NF-κB、p-NF-κB、NLRP3、Caspase-1 p45、Caspase-1 p20和GSDMD-N蛋白水平;倒置荧光显微镜观察各组细胞经Hoechst-PI染色后的细胞焦亡情况。结果:与对照组相比,模型组细胞上清液中LDH、TNF-α、IL-6和IL-1β含量显著升高(P<0.000 1);模型组细胞TNF-α、IL-6和IL-1β的mRNA水平显著升高(P<0.000 1);p-NF-κB、NLRP3、Caspase-1p20和GSDMD-N的蛋白水平显著升高(P<0.05);PI阳性细胞数明显增多(P<0.05)。与模型组比较,FFYJ治疗和阳性药显著降低了BMDMs上清液中LDH、TNF-α、IL-6和IL-1β的含量(P<0.05);下调了细胞中TNF-α、IL-6和IL-1β的mRNA水平(P<0.05);抑制了p-NF-κB、NLRP3、Caspase-1 p20和GSDMD-N蛋白的表达(P<0.05);显著减少了PI阳性细胞数(P<0.05)。结论:FFYJ通过抑制BMDM原代巨噬细胞中NLRP3炎症小体的激活发挥抗炎效果。

复方磺胺甲噁唑治疗百日咳的临床和实验室研究进展

百日咳是百日咳鲍特菌(Bordetella pertussis,BP)引起的强传染性呼吸道疾病。长期以来,红霉素、克拉霉素和阿奇霉素等大环内酯类抗菌药物是百日咳抗菌治疗的首选药物。1994年从美国亚利桑那州的1例2月龄百日咳患儿分离了第一株红霉素耐药百日咳鲍特菌(erythromycin-resistance Bordetella pertussis,ERBP),此后欧美虽有零星病例报告,但没有发现ERBP流行的迹象[1]。2013年,国内研究者在山东2例无症状青少年的鼻咽拭子首次发现ERBP[1],随后北京、西安、深圳等地对临床分离菌株进行药物敏感性检测,发现ERBP在分离株中的占比为52.3%~91.1%,且ERBP最低抑菌浓度(minimum inhibitory concentration,MIC)均>256 mg/L[1-2]。

基于物联网技术的智能照明控制系统设计

为了解决现阶段各种电灯照明严重浪费电能的问题,借助物联网技术完成智能照明控制系统设计,该控制系统的核心是AT89C52单片机,由显示模块、DTMF解码模块、键盘模块、继电器控制模块、传感器模块、自动摘机模块、语音模块以及振铃检测模块等组成。经过相关实践证明,这种系统不但具备远程控制和自动控制的功能,而且拥有灵活、方便、安全、稳定的优势,能够有效满足各种场景的照明需求,值得进行应用推广。

高静压和热预处理对真空冷冻干燥重组果蔬块品质的影响

以芒果、甜瓜、菠萝和胡萝卜为原料,采用传统热处理及不同高静压条件对复合果蔬浆进行预处理后,通过冷冻干燥(freeze?drying,FD)技术生产重组果蔬块,研究不同高静压压力对FD果蔬块理化品质、生物活性物质、抗氧化活性和感官品质的影响。结果表明:与热预处理相比,高静压预处理能显著提高FD果蔬块产品的a*值、b*值、可滴定酸含量、抗氧化活性(1,1-二苯基-2-三硝基苯肼自由基清除率、羟自由基清除率、铁离子还原能力),总酚、总黄酮、VC含量分别较热预处理提高21.11%~30.27%、59.96%~68.58%、13.35%~15.34%;醇类和酮类挥发性风味物质含量分别为189.65~207.82?μg/kg和59.60~81.16μg/kg,相较于热预处理显著提高。此外,高静压预处理FD果蔬块在5种香气属性上的感官强度和色泽、气味、滋味的喜好度也显著高于热预处理FD果蔬块。在300?MPa和500?MPa的高静压预处理条件下,FD果蔬块的感官品质最接近未处理组。高静压预处理通过提高细胞膜通透性,促进了生物活性物质和风味物质的释放,提高了抗氧化活性,与传统热预处理相比,高静压预处理有效改善了FD果蔬块的品质特性。

内水渗漏软化基底对盾构隧洞衬砌管片受力性能的影响分析

水工盾构隧洞在运行过程中存在内水渗漏导致基底软化的风险,基底软化将对隧洞管片受力变形产生影响。依托实际水工盾构隧洞工程,构建了由管片、灌浆体和围岩组成的三维有限元数值模型,针对Ⅴ类围岩条件下因渗漏导致基底均匀和不均匀软化的状况,研究了管片的受力性能变化规律。结果表明:在内外荷载作用下,管片的环向应力、竖向位移和定位销应力均随基底软化深度的增加而增大,均匀软化条件下仰拱管片出现峰值为1.88 MPa的拉应力,存在管片开裂风险;基底软化导致定位销应力增大,而管片竖向位移的变化幅度较小。研究成果可为水工盾构隧洞的安全运行监测提供科学依据。

航空燃油系统双层方孔滤网过滤特性研究

双层方孔滤网作为航空燃油系统主要抗污元件,其过滤特性对航空燃油系统的可靠性具有重要影响。综合运用CFD-DEM耦合方法与可视化试验,研究方孔双层滤网动态过滤过程和流速、流量脉动对滤网过滤效率的影响。结果表明:受支撑网的影响,双层滤网精度提高,表面介质过滤和小于网孔颗粒成群卡滞网孔是滤网过滤初期的主要存在形式,滤网过滤中期逐渐形成颗粒层;流速对滤网过滤影响较小,敏感颗粒的过滤效率出现轻微波动,流量脉动对滤网过滤效率影响显著,脉动频率和幅值越大,滤网过滤效率越低;研究结果为方孔滤网的设计选型提供了有益的参考。

面向列车运行图的高速列车能耗计算方法研究

针对列车运行图中高速列车的能耗计量问题,提出了基于牵引电算法和Davis模型相结合的改进高速列车能耗计算方法。首先分析了运行图要素对高速列车能耗的影响机制,其次比选既有列车运行图的高速列车能耗计算方法,考虑牵引能耗和自用能耗,结合列车时刻表构建高速列车停站与区间恒速运行能耗计算模型,最后设计算例进行验证。结果表明:研究所提方法拥有便捷的测算能力,所测算一站直达、停1站、停3站及站站停的高速列车总运行能耗占比分别能达到牵引电算法的52.14%,55.85%,64.18%,75.87%,且不同运行方案间列车能耗相对关系能够保持高度一致性,对估算运行图中的高速列车运行能耗具有良好的适用性。

EEMD与LSTM在轴承剩余寿命预测中的应用

剩余使用寿命(RUL)预测是实现装备健康管理与预测性维护的最主要技术手段之一,为了准确预测轴承的剩余使用寿命,提出了一种基于集合经验模态分解(EEMD)和长短时记忆网络(LSTM)的轴承剩余寿命预测方法。首先,对采集到的振动信号做时域、频域及时频分析,同时记录相应特征;进而,筛选特征,通过EEMD对振动信号予以分解并重构;最后,通过LSTM结合经过处理的信号构建健康特征指标。通过实验证明了该方法能有效的预测出轴承的剩余寿命,且有较高的预测精度。

鸽乳成分及其合成调控机制的研究进展

鸽子是晚成鸟类,刚出生的乳鸽不能直接消化饲料,需要哺乳期的种鸽(包括雌鸽和雄鸽)摄入饲料并由嗉囊组织产生鸽乳来喂养。鸽乳中含有丰富的蛋白质、脂肪、矿物元素等营养物质及微生物群,其合成分泌受种鸽饲粮营养水平的影响以及催乳素、胰岛素信号通路的调控;此外,雷帕霉素靶蛋白复合物1(TORC1)、Janus激酶2(JAK2)-信号传导及转录激活蛋白5(STAT5)信号通路和微小RNA(miRNA)相关的内源竞争RNA(ceRNA)网络在鸽乳合成中也发挥了重要作用。本文主要综述了鸽乳的营养成分、微生物群组成以及鸽乳生产过程中激素、信号通路和嗉囊组织学变化,旨在为提高肉鸽产业效率提供参考。

非手术脊柱减压系统对腰椎间盘突出症治疗效果的Meta分析

目的:明确非手术脊柱减压系统(SDS)对腰椎间盘突出症(LDH)的干预效果。方法:检索PubMed、Cochrane Library、Embase、Web of Science、中国知网CNKI、万方数据库(Wanfang Database)、中国生物医学文献数据库(CBM)、维普中文科技期刊数据库(VIP)等有关于SDS干预LDH的随机对照研究,建库时限自建库以来至2023年8月21日。由至少2名研究者进行文献筛选、提取资料,利用Cochrane系统评价手册5.1.0和Jadad量表对纳入文献进行质量评价,使用revman5.4软件进行Meta结果分析,stata14.0进行偏倚风险评价。结果:纳入16篇文献,总计965例患者。结果显示,在疼痛改善方面,SDS干预能明显降低患者疼痛评分(95%CI[-1.05~-0.75];SMD=-0.90,P<0.001);在腰椎功能改善方面,SDS干预能增加患者竖脊肌平均肌电值(95%CI[6.49~19.51];MD=13.00;P<0.001)、多裂肌平均肌电(95%CI[6.62~19.97];MD=13.30;P<0.001)、竖脊肌平均功率频率斜率(95%CI[0.05~0.09];MD=0.07;P<0.001)、多裂肌平均功率频率斜率(95%CI[0.05~0.10];MD=0.07;P<0.001),降低患者ODI评分(95%CI[-1.27~-0.71];SMD=-0.99;P<0.001);在椎间盘突出程度改善上,SDS干预能明显降低椎间盘突出指数(95%CI[-2.87~-0.77];SMD=-1.82;P<0.001),椎体后缘至突出物顶点的距离(95%CI[-1.11~-0.79];MD=-0.95;P<0.001),但在椎间盘高度干预效果不显著(95%CI[-0.38~1.19];MD=0.41;P=0.31);在有效率方面,SDS干预能显著提高患者治疗效果(95%CI[1.16~1.42];RR=1.28;P<0.001)。结论:SDS或联合治疗能够减轻LDH患者的疼痛程度、改善腰椎功能障碍、提高椎旁肌肌肉功能、缓解椎间盘突出程度、提高治疗效果,但在改善椎间盘高度上的效果并不明显。