Ena/VASP家族对人巨核细胞白血病Dami细胞中GPIb-IX复合物表达的影响

目的:探索Ena/VASP家族对人巨核细胞白血病Dami细胞中GPIb-IX复合物表达的影响。方法:设计合成针对Ena/VASP家族的Enah、EVL及VASP 3个基因的干扰siRNA,通过Lipofectamine^(TM) 2000转染人巨核细胞白血病Dami细胞株,培养48 h后收取细胞,利用qRT-PCR、Western blot和流式细胞术等方法检测巨核细胞中GPIb-IX复合物的表达情况。结果:构建了Ena/VASP家族基因干扰效果较佳的Dami细胞株。在敲减Enah、EVL及VASP基因表达后,在mRNA水平上,巨核细胞中GPIb-IX复合物的表达无明显变化;在总蛋白和膜表面蛋白水平上,敲减Enah后,巨核细胞中GPIb-IX复合物表达明显降低。结论:Enah基因可能对人巨核细胞白血病Dami细胞中GPIb-IX复合物的表达有影响,但是具体机制仍需要进一步探索。

PIWI相互作用RNA017724在肝细胞癌中的表达及其对细胞增殖、凋亡、侵袭和迁移的影响

目的:分析PIWI相互作用RNA017724在肝细胞癌组织、人肝癌细胞系中的表达及其对细胞增殖、凋亡、侵袭及迁移的影响。方法:采用实时定量PCR(real-time quantitative PCR,RT-qPCR)检测肝细胞癌组织和肝癌细胞系中PIWI相互作用RNA017724的表达水平。将PIWI相互作用RNA017724模拟物和抑制剂转染SMMC-7721和PLC/PRF/5细胞,采用CCK-8法和细胞集落形成实验检测各组细胞增殖能力,流式细胞术检测细胞凋亡率,Transwell实验检测各组细胞迁移和侵袭能力。结果:肝癌组织中PIWI相互作用RNA017724表达水平显著低于匹配的相邻正常肝组织,差异有统计学意义(P<0.05);PIWI相互作用RNA017724低表达患者的生存期较短。PIWI相互作用RNA017724抑制剂促进SMMC-7721和PLC/PRF/5细胞的增殖、迁移和侵袭,而模拟物抑制SMMC-7721和PLC/PRF/5细胞的增殖、迁移和侵袭。PIWI相互作用RNA017724对细胞凋亡无明显作用。结论:PIWI相互作用RNA017724抑制HCC细胞的增殖、迁移和侵袭。

血小板铺展的主要影响因素

目的:探索血小板铺展的主要影响因素,为相关疾病研究奠定基础。方法:体外分离C57BL/6J小鼠的血小板(2×10^(7)/ml),室温静置1-2 h后,将血小板样本均匀的铺在纤维蛋白原包被的载玻片上,利用鬼笔环肽标记骨架蛋白F-actin,封片后通过荧光共聚焦显微镜观察血小板铺展状态,分析不同浓度的纤维蛋白原和激动剂等因素对血小板铺展的影响。实验中纤维蛋白原浓度为10、30和100μg/ml,激动剂为凝血酶(0.01、0.05和0.1 U/ml)、ADP(5、10和20μmol/L)和U46619(0.125、0.25和0.5μmol/L)。若激动剂处理后的血小板呈树突状并且铺展率较高,则说明血小板铺展的方法构建成功。结果:与10和100μg/ml的纤维蛋白原组相比,在包被了30μg/ml纤维蛋白原的载玻片上粘附的血小板数目最优;另外,在凝血酶、ADP和U46619的刺激下,血小板铺展与刺激剂浓度呈正相关(ADP:r=0.925,U46619:r=0.937)。结论:血小板的铺展受到很多因素的影响,30μg/ml的纤维蛋白原、0.1 U/ml的凝血酶、20μmol/L的ADP和0.5μmol/L的U46619可成功诱导2×10^(7)/ml血小板的铺展。