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CD自杀基因联合淋巴细胞趋化因子基因疗法的肿瘤治疗作用及免疫机理研究 被引量:3
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作者 程大胜 曹雪涛 +6 位作者 鞠佃文 章卫平 王建莉 陶群 张明徽 朱学军 袁正隆 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 1998年第3期180-184,共5页
本研究以腺病毒作为载体,将大肠杆菌胞嘧啶脱氨酶(CD)基因与小鼠淋巴细胞趋化因子(Ltn)基因体内联合转染,观察了其抗肿瘤效应并分析了免疫机理.小鼠皮下接种结肠腺癌CT26细胞后3天,肿瘤局部注射表达Ltn的重组腺病毒AdLtn和表达CD的重组... 本研究以腺病毒作为载体,将大肠杆菌胞嘧啶脱氨酶(CD)基因与小鼠淋巴细胞趋化因子(Ltn)基因体内联合转染,观察了其抗肿瘤效应并分析了免疫机理.小鼠皮下接种结肠腺癌CT26细胞后3天,肿瘤局部注射表达Ltn的重组腺病毒AdLtn和表达CD的重组腺病毒AdCD,然后连续10天给予5一氟胞嘧啶(5-FC)300mg/kg进行治疗,结果表明,联合治疗组荷瘤小鼠皮下肿瘤结节的生长受到明显抑制,小鼠存活期明显长于单用AdLtn治疗组或单用AdCD/5-FC治疗组.经联合治疗后小鼠脾细胞的NK活性和对(37结肠腺癌细胞的CTL杀伤活性明显增强.瘤体细胞FACS分析结果表明,经联合基因治疗后,肿瘤组织CD4^+、CD8^+细胞浸润增加,结肠腺癌细胞表达H-2Kd和B7-1分子明显增加.提示经CD自杀基因和Ltn基因联合治疗后,肿瘤细胞免疫原性增加.本研究结果表明联合应用自杀基因和Ltn基因治疗可以提高机体对肿瘤细胞免疫的应答,增加机体的抗肿瘤作用,是肿瘤基因治疗中一条新的途径. 展开更多
关键词 自杀基因 淋巴细胞 趋化因子 基因疗法 肿瘤
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小鼠淋巴细胞趋化因子重组腺病毒载体的构建及其在骨髓树突状细胞中的表达 被引量:3
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作者 章卫平 曹雪涛 +3 位作者 马施华 何龙 袁正隆 陈国友 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 1998年第1期2-6,共5页
经RT-PCR克隆小鼠淋巴细胞趋化因子(Lymphotactin,Ltn)的全长编码cDNA,将其置于CMV启动子下游,插入E1区替代的腺病毒载体pAx1cw。Ltn重组腺病毒载体pAx1cw.CImLtn与经Eco... 经RT-PCR克隆小鼠淋巴细胞趋化因子(Lymphotactin,Ltn)的全长编码cDNA,将其置于CMV启动子下游,插入E1区替代的腺病毒载体pAx1cw。Ltn重组腺病毒载体pAx1cw.CImLtn与经EcoT22I酶切的Ad5腺病毒DNA-末端肽复合物共转染293细胞,制备Ltn重组腺病毒,扩增到的病毒滴度为3.6×109pfu/ml。用重组GM-CSF从小鼠骨髓中扩增到的树突状细胞本身并不表达Ltn;体外感染Ltn重组腺病毒后4h即可经RT-PCR检测到Ltn的表达,其24h的细胞培养上清体外对CD4+T细胞和CD8+细胞具有显著的趋化活性,表明所制备的Ltn重组腺病毒能有效介导Ltn在树突状细胞中的表达,为研究Ltn基因修饰的树突状细胞诱导T细胞免疫应答奠定基础。 展开更多
关键词 趋化因子 淋巴细胞 树突状细胞 腺病毒 载体
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人树突状细胞cDNA质粒文库的构建及其大规模随机测序体系的建立 被引量:2
3
作者 章卫平 曹雪涛 +3 位作者 万涛 朱学军 袁正隆 何龙 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 1999年第6期245-249,共5页
目的:建立人树突状细胞(DC)的cDNA文库,通过大规模随机测序克隆免疫新分子。方法:来源于正常人外周血的单核细胞,体外经GMCSF和IL4培养,扩增出高纯度的DC,抽提纯化mRNA,转录成cDNA,定向插入pS... 目的:建立人树突状细胞(DC)的cDNA文库,通过大规模随机测序克隆免疫新分子。方法:来源于正常人外周血的单核细胞,体外经GMCSF和IL4培养,扩增出高纯度的DC,抽提纯化mRNA,转录成cDNA,定向插入pSPORT20载体,建立人DC的cDNA质粒文库;用ABI377全自动测序仪对该文库进行随机测序,将得到的EST在SunE450服务器中与EMBL及Swisprot数据库进行同源性比较,筛选出代表未知基因EST,然后在GCG软件中进行分析,对重要的未知EST克隆其全长cDNA。结果:所扩增的DC经流式细胞仪分析高表达MHCⅠ、MHCⅡ、B7、CDla和CD83等表面标志,能强烈刺激同种异体T淋巴细胞的体外增殖反应;建立的DCcDNA文库92%以上克隆有平均16kb大小的插入片段;从所测的12000余条EST中筛选出代表未知基因的3000余条,克隆到109条全长新基因,包括属于细胞因子、细胞因子受体、趋化因子和粘附分子等家族的免疫新分子,部分全长基因已在Genebank中登录。结论:成功建立了人DC的cDNA基因文库及其大规模随机测序体系,并克隆到免疫分子。 展开更多
关键词 树突状细胞 CDNA文库 免疫分子 基因克隆
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肿瘤抗原冲击致敏的IL-2基因修饰的巨噬细胞治疗肾癌的实验研究 被引量:3
4
作者 邱实 曹雪涛 +5 位作者 弭静 袁正隆 雷虹 张明徽 朱学军 闵志廉 《中国免疫学杂志》 CSCD 北大核心 2000年第8期432-435,共4页
目的 :观察体外肿瘤抗原冲击致敏的白细胞介素 2 (IL 2 )基因修饰的巨噬细胞对肾癌小鼠的治疗效果并探讨其相关的免疫机理。方法 :通过重组腺病毒的介导 ,将IL 2基因转入新鲜分离的小鼠腹腔巨噬细胞 ,经肿瘤抗原冲击致敏后回输治疗原位... 目的 :观察体外肿瘤抗原冲击致敏的白细胞介素 2 (IL 2 )基因修饰的巨噬细胞对肾癌小鼠的治疗效果并探讨其相关的免疫机理。方法 :通过重组腺病毒的介导 ,将IL 2基因转入新鲜分离的小鼠腹腔巨噬细胞 ,经肿瘤抗原冲击致敏后回输治疗原位肾癌小鼠 ,采用 4h5 1 Cr释放法检测脾脏NK和CTL活性。结果 :IL 2基因修饰的巨噬细胞经肿瘤抗原冲击后体内回输可使肾癌小鼠肺转移结节明显减少 ,存活期明显延长 ,40 %肾癌小鼠达到长期存活。治疗后荷瘤小鼠脾脏NK和CTL活性显著提高。结论 :IL 2基因修饰的巨噬细胞经肿瘤抗原冲击后自体回输是治疗肾癌的有效方法。 展开更多
关键词 肾细胞癌 巨噬细胞 基因治疗 免疫疗法 IL-2
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GM-CSF/IL-4基因修饰的瘤苗不同的免疫途径诱导不同免疫反应的观察 被引量:1
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作者 朱学军 曹雪涛 +4 位作者 郑玲莉 章卫平 张明徽 袁正隆 陶群 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 1997年第4期318-319,共2页
对细胞因子基因修饰瘤苗的研究表明,IL-2、IL-4、IFN-γ、GM-CSF等一系列细胞因子基因以不同载体转入肿瘤细胞制成瘤苗后皮下免疫小鼠,均可增强机体抗肿瘤免疫力,其机制可能是由于瘤苗分泌的细胞因子促进了免疫细胞对肿瘤抗原的识别、... 对细胞因子基因修饰瘤苗的研究表明,IL-2、IL-4、IFN-γ、GM-CSF等一系列细胞因子基因以不同载体转入肿瘤细胞制成瘤苗后皮下免疫小鼠,均可增强机体抗肿瘤免疫力,其机制可能是由于瘤苗分泌的细胞因子促进了免疫细胞对肿瘤抗原的识别、提呈及对肿瘤细胞的杀伤能力.有文献报道,逆转录病毒介导的GM-CSF和IL-4共同转染瘤苗可以有效激发机体抗肿瘤免疫力,为探讨不同途径瘤苗免疫后机体的免疫反应,我们采用皮下、腹腔、脾内、静脉四种途径接种GM-CSF、IL-4基因双重转染的小鼠红白血病细胞FBL-3瘤苗,发现免疫途径不同,所激发的免疫应答类型不同,诱导机体生成的免疫力不同,提示某些瘤苗应用时应选择适当的免疫途径. 展开更多
关键词 肿瘤疫苗 免疫反应 基因修饰
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树突状细胞与自身免疫性疾病的研究进展 被引量:4
6
作者 袁正隆 曹雪涛 《国外医学(免疫学分册)》 1998年第6期318-322,共5页
DC 在自身免疫耐受和免疫细胞的活化中都起重要的作用,自身免疫性疾病是多因素造成的自身免疫反应异常的疾病,本文综述了 DC 在糖尿病,类风湿关节炎,自身免疫性甲状腺炎等自身免疫性疾病中的作用和可能的机制。
关键词 树突状细胞 自身免疫性疾病
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财经纪律与职业道德
7
作者 袁正隆 《武汉财会》 1983年第5期27-28,共2页
从八一年九月起,我曾参加市一商业局系统财经纪律检查,在工作中看到、想到一些问题,我认为这些问题与职业道德有关,特提出与同志们研究: 一、乱记科目,蒙哄过关会计制度规定结转成本的方法有四种,而一个企业一年内只能选用一种方法,可&#... 从八一年九月起,我曾参加市一商业局系统财经纪律检查,在工作中看到、想到一些问题,我认为这些问题与职业道德有关,特提出与同志们研究: 一、乱记科目,蒙哄过关会计制度规定结转成本的方法有四种,而一个企业一年内只能选用一种方法,可××商店经营商品九千多种,结转成本时是灵活运用,各取所需,其目的不外两条,一是控制库存,调剂资金,二是平衡利润,好拿奖金。又如××商店看到全年利润计划不能完成,一笔帐保留收入六十余万元,以便明年来个“开门红”。××仓库的防暑降温费,按规定标准预提后。 展开更多
关键词 会计制度规定 财经纪律 预提 利润计划 财会工作 应付款 价格补贴 劳动工资 请示汇报 财会部门
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IL-2基因修饰增强白血病抗原冲击的树突状细胞诱导的抗肿瘤免疫反应 被引量:11
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作者 唐华 曹雪涛 +4 位作者 朱学军 张明徽 袁正隆 于益芝 章卫平 《中华血液学杂志》 CAS CSCD 北大核心 1999年第11期573-576,共4页
Objective To investigate whether adenovirus mediated IL 2 gene modification can improve antitumor immunity of the tumor antigen pulsed dendritic cells(DC) in vivo. Methods DC were generated from bone marrow, then, pul... Objective To investigate whether adenovirus mediated IL 2 gene modification can improve antitumor immunity of the tumor antigen pulsed dendritic cells(DC) in vivo. Methods DC were generated from bone marrow, then, pulsed with FBL 3 erythroleukemia cell lysates and transfected with IL 2 gene simultaneously. IL 2 secretion and T cell stimulating activity of the DC were detected. The number and cell subsets of draining lymph nodes, cytotoxic lymphocyte(CTL) activity ,and the increase of protective effect for the mice s.c vaccinated with DC were observed. Results IL 2 gene modified, antigen pulsed DC could secrete high level of IL 2 in vitro, stimulate proliferation of syngeneic T cells markedly. DC vaccine could increase the number of draining lymph node and induce CTL activity, which directed to FBL 3, more significantly. After the DC vaccination, the survival time of the mice challenged with wild type FBL 3 cells were prolonged. Conclusion Antitumor immune response could be induced more potently by vaccination with IL 2 gene modified, antigen pulsed DC. 展开更多
关键词 白血病 白细胞介素2 基因治疗 T细胞
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小鼠GMCSF基因修饰瘤苗腹腔免疫对抗原提呈细胞数量和功能的促进效应 被引量:1
9
作者 朱学军 黄欣 +4 位作者 章卫平 何龙 袁正隆 李楠 曹雪涛 《中华血液学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2000年第11期591-594,共4页
目的 观察小鼠粒 巨噬细胞集落刺激因子 (mGM CSF)基因修饰的瘤苗体内免疫小鼠后的抗肿瘤效应以及对抗原提呈细胞数量和功能的影响。方法 应用腺病毒载体介导mGM CSF基因修饰FBL 3小鼠红白血病细胞 ,灭活后用作瘤苗腹腔免疫小鼠 ,检... 目的 观察小鼠粒 巨噬细胞集落刺激因子 (mGM CSF)基因修饰的瘤苗体内免疫小鼠后的抗肿瘤效应以及对抗原提呈细胞数量和功能的影响。方法 应用腺病毒载体介导mGM CSF基因修饰FBL 3小鼠红白血病细胞 ,灭活后用作瘤苗腹腔免疫小鼠 ,检测免疫后体内诱导的细胞毒性T淋巴细胞 (CTL)活性 ,观察小鼠存活期 ;计数免疫后腹腔中抗原提呈细胞 (APCs)的数量 ,流式细胞仪分析腹腔贴壁细胞中 33D1+树突状细胞 (DCs)的含量及检测其体外刺激同种异体混合淋巴细胞反应的能力。结果 mGM CSF基因修饰瘤苗腹腔免疫的小鼠体内诱导出较高水平的CTL活性 ,并可全部抵抗亲本肿瘤细胞的再攻击 ;进一步分析表明瘤苗免疫后增加腹腔中APCs的数量及腹腔贴壁细胞中 33D1+DCs的含量 ,腹腔贴壁细胞体外刺激同种异体混合淋巴细胞反应的能力增强。结论 腺病毒载体介导mGM CSF基因修饰的瘤苗体内具有较强的抗肿瘤效应 ,此特异性抗肿瘤免疫功能的增强可能与瘤苗旁分泌mGM CSF 。 展开更多
关键词 GM-CSF 免疫疗法 白血病 树突细胞地抗原提呈细
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一种核不均一核糖核蛋白M4缺失突变体的克隆
10
作者 黄欣 赵忠良 +4 位作者 袁正隆 张明徽 朱学军 陈国友 曹雪涛 《中国科学(C辑)》 CSCD 2000年第4期370-375,共6页
利用减法杂交技术筛选人树突状细胞(DC)经抗原刺激后特异表达的基因,成 功地获得了十多个特异表达基因,其中包括一种核不均一核糖核蛋白(heterogeneous nuclear ribonucleoprotein,hn... 利用减法杂交技术筛选人树突状细胞(DC)经抗原刺激后特异表达的基因,成 功地获得了十多个特异表达基因,其中包括一种核不均一核糖核蛋白(heterogeneous nuclear ribonucleoprotein,hnRNP)M4第159~197位氨基酸缺失的新基因.对部分肿瘤细 胞系及原代培养细胞进行RT-PCR检测发现,它的表达与hnRNP M4基因是一致的,同 时证实了该基因表达于经KLH刺激后的DC而非正常的DC.组织分布分析显示,该基 因高表达于脾脏、外用血淋巴细胞、肺和肝脏.另外,通过多种细胞因子刺激的骨髓基 质细胞(bone marrow-derived stromal cells, BMSC)也表达这两种分子,但TNF-α处理后 mRNA的表达消失.这一发现增加了对DC在抗原提呈过程中基因表达变化的认识,为 hnRNP家族增添了新成员. 展开更多
关键词 基因克隆 免疫学 核不均一核糖核蛋白
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Cloning and characterization of a novel deletion mutant of heterogeneous nuclear ribonucleoprotein M4 from human dendritic cells
11
作者 黄欣 赵忠良 +4 位作者 袁正隆 张明徽 朱学军 陈国友 曹雪涛 《Science China(Life Sciences)》 SCIE CAS 2000年第6期648-654,共7页
To identify differentially expressed genes from antigen-stimulated human dendritic cells (DC), subtractive cloning was adopted and more than ten novel genes differentially expressed were cloned. One is a deletion muta... To identify differentially expressed genes from antigen-stimulated human dendritic cells (DC), subtractive cloning was adopted and more than ten novel genes differentially expressed were cloned. One is a deletion mutant of heterogeneous nuclear ribonucleoprotein (hnRNP) M4 in which the residues from 159 to 197 of hnRNP M4 have been absent. The deletion mutant was shown to- be co-expressed with hnRNP M4 in cell lines. The mutant was expressed in antigen-stimulated DC but not in normal DC. Northern blot analysis revealed the presence of a major hnRNP M4 deletion mutant mRNA transcript of 2.4 kilobase with the highest levels in peripheral lymphocytes, lung, liver and spleen. It was also expressed in bone marrow-derived stromal cells (BMSC), BMSC treated with several cytokines but not in BMSC treated with TNF-a. The results revealed a new member of hnRNP family and suggested that hnRNP would participate in antigen process and presentation. 展开更多
关键词 DENDRITIC cells subtractive HYBRIDIZATION gene CLONING heterogeneous nuclear RIBONUCLEOPROTEIN DELETION mutant.
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