牛巴贝斯虫新疆株MSA-2c基因重组质粒的构建、真核表达及其免疫反应性研究

根据GenBank公布的牛巴贝斯虫裂殖子表面抗原MSA-2c基因序列设计引物,采用PCR方法从患病牛的全血基因组中扩增得到798 bp的MSA-2c基因片段,将其克隆至真核表达载体pcDNA3.1(+),测序验证后,小白鼠尾静脉注射瞬时表达MSA-2c基因,取其肝脏提取总RNA,采用反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)扩增可得到目的条带;用重组质粒pcDNA3.1(+)-MSA-2c肌肉注射免疫小白鼠4次后,将获得的抗血清作为抗体,纯化的GST-MSA-2c融合蛋白作为抗原进行Western-blot检测,可得到抗原-抗体结合产生的特异性条带,表明重组质粒具有免疫学活性。

先天性白内障小鼠主要脏器重量和血液生理生化指标的分析

目的建立SPF级先天性白内障小鼠体重及主要脏器重量,血液生理生化等指标的背景资料。方法以28日龄及56日龄正常KM小鼠为对照组,以同日龄先天白内障小鼠为实验组,分别测定小鼠体重、主要脏器重量以及血液生理生化指标。结果与28日龄KM小鼠相比较,同日龄白内障小鼠各项指标均无统计学意义;与56日龄KM小鼠相比较:(1)小鼠体重、心、肝、脾、肺、肾、雄鼠睾丸重量差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。(2)血液学检查数据显示:雌鼠的平均血小板压积、血小板分布宽度以及雄鼠的白细胞、血小板、淋巴细胞比率差异有统计学意义(P<0.01)。(3)血液生化学检查数据显示碱性磷酸酶、尿酸、葡萄糖、总蛋白、雄鼠谷丙转氨酶、白蛋白、雌鼠的尿素、甘油三酯差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。结论 56日龄白内障小鼠与同日龄KM小鼠相比,体重及主要脏器重量以及部分生理生化指标有一定的差异。研究结果可以为科研人员提供参考数据。

子午沙鼠与SD大鼠肾脏形态学特征的比较

目的为子午沙鼠种群研究奠定基础,为以子午沙鼠作为研究对象开发动物模型的研究者提供数据支持。方法本研究以野生子午沙鼠和实验用SD大鼠为研究对象,观察了两者肾脏组织形态学特点,并对其肾脏组织形态学指标、肾体比、肾单位密度等参数进行了比较。结果两种大鼠相比:肾脏髓质与皮质面积之比、内髓质与皮质面积之比、内髓质面积与肾脏切面面积之比、单位面积内近曲与远曲小管数之比的差异均有统计学意义;两者的肾体比、肾单位密度亦有极显著性种间差异。结论肾脏形态和组织学特征表明野生子午沙鼠肾脏组织形态结构与其浓缩尿液的能力具有较大相关性,符合耐干旱哺乳动物的肾脏特点。

新疆克拉玛依地区奶牛隐性乳房炎病原菌的分离鉴定

用兰州乳房炎检测试剂(Lanzhou mastitis test,LMT)对克拉玛依规模化奶牛场进行了奶牛隐性乳房炎流行病学调查。结果显示,该地区奶牛隐性乳房炎的发病率为70.43%(543/771)。对543份阳性牛乳样品进行了病原菌的分离鉴定,结果发现,阳性乳样品中细菌分离率达89.13%(484/543),葡萄球菌、链球菌、肠杆菌和棒状杆菌为主要致病菌,且多为几种致病菌的混合感染。

新疆牛环形泰勒虫Tams1基因的克隆与表达

采用PCR方法扩增环形泰勒虫Tams1基因,将扩增产物与pUcm-T载体连接,重组质粒经PCR和双酶切鉴定、测序确认后被亚克隆于pGEX-4T-2表达载体中。构建的表达重组质粒经IPTG诱导表达后,进行SDS-PAGE、Western blot分析。结果显示,克隆的Tams1基因片段长846bp,为一个完整的开放阅读框,编码281个氨基酸,与GenBank中的Tams1基因核苷酸同源性在93.6%～99.8%之间;系统进化树分析表明新疆分离株与印度株、毛利塔尼亚株和北非共和国株进化途径一致,与苏丹株、巴林株进化途径相差较远;推测的蛋白质抗原决定簇预测表明,Tams1基因编码的氨基酸具有13个交叉的抗原决定簇;表达的融合蛋白为56ku,能够被环形泰勒虫多克隆血清所识别,表明该融合蛋白具有较好的反应原性和免疫原性,为进一步开展牛环形泰勒虫的分子生物学诊断、亚单位疫苗和核酸疫苗的研究奠定了可靠的基础。

牛环形泰勒虫巢式PCR诊断方法的建立

根据GenBank上发表的环形泰勒虫Tamsl基因序列设计2对巢式引物，成功建立了环形泰勒虫病的巢式PCR快速检测方法。验证试验结果表明，PCR扩增产物测序结果与GenBank收录的Tamsl序列同源性在92％～99％，对环形泰勒虫检测具有良好的特异性、重复性以及灵敏度。对新疆焦虫病疫区牛群血样检测发现，巢式PCR检出率为62．2Yoo（61／98），高于常规PCR检出率（58．2％，57／98）和血涂片镜检检出率（35．7％，35／98），提示该巢式PCR方法可用于大规模的环形泰勒虫病的流行病学调查。

新疆牛环形泰勒虫Tams1基因的克隆与序列分析

采用PCR技术，从新疆焦虫病疫区感染牛的全血中扩增到Tamsl基因，该基因长度为846bp，编码281个氨基酸。同源性分析表明，该基因与其他9个国际流行虫株的核苷酸同源性为93．6％～99．8％，氨基酸同源性为88．6％～99．6％。系统发育进化树分析表明，新疆分离株同印度株、毛利塔尼亚株、土耳其株、北非共和国株进化途径一致，与苏丹株和巴林株进化途径相差较远。氨基酸抗原决定簇分析发现新疆分离株编码的氨基酸有13个抗原决定簇。

牛巴贝斯虫GST-MSA-2c融合蛋白间接ELISA血清学诊断方法的建立

【目的与方法】在优化表达牛巴贝斯虫GST-MSA-2c融合蛋白和建立ELISA反应条件的基础上,进一步探讨牛巴贝斯虫GST-MSA-2c融合蛋白及其所建立的ELISA检测方法的特异性,从而建立牛巴贝斯虫GST-MSA-2c融合蛋白间接ELISA血清学检测方法。【结果】牛巴贝斯虫GST-MSA-2c融合蛋白间接ELISA检测方法能排除GST的干扰,与其它梨形虫病无交叉反应,与牛巴贝斯虫巢式PCR检测方法的阳性符合率为96%。【结论】所建立的GST-MSA-2c融合蛋白间接ELISA血清学检测方法重复性好、特异性强、灵敏度高。这是国内首次利用重组蛋白抗原建立的牛巴贝斯病血清学诊断方法,为大规模地进行牛巴贝斯虫病的流行病学调查和血清学诊断提供有效的技术手段。

普通级与清洁级灰仓鼠脏器重量与脏器系数的比较

目的 测定并比较普通级与清洁级灰仓鼠的主要脏器重量及脏器系数的差异.方法 解剖普通级与清洁级灰仓鼠各40只,使用电子天平共测定12种脏器指标,并计算了脏器系数.结果 清洁级与普通级灰仓鼠雄性之间比较,心、肝、附睾重量有统计学意义（P＜0.01）,脑、肾脏的脏器系数差异有统计学意义（P＜0.01）；清洁级与普通级灰仓鼠雌性之间比较,心脏重量差异统计学意义（P＜0.05）,肾脏脏器系数有统计学意义（P＜0.01）；普通级灰仓鼠雄雌之间脏器系数比较,脾差异统计学意义（P＜0.05）；清洁级灰仓鼠雄雌之间脏器系数比较,心脏差异有统计学意义（P＜0.01）.结论 清洁级与普通级灰仓鼠的脏器重量、脏器系数差异较大.

单稀释法间接ELISA和终点法中和试验检测犊牛轮状病毒疫苗抗体效价比较

用NCDV标准毒株接种恒河猴肾细胞(MA-104),制备病毒抗原液,制成油乳佐剂灭活疫苗进行3月龄以内的犊牛田间免疫试验。结果表明,免疫组的OD492nm平均值为0.6,免疫40 d后达到峰值1.5,免疫后609、0 d仍维持较高的抗体效价,OD492nm平均值分别是1.4和0.9。中和抗体效价在二次免疫时、二次免疫40、60、90 d平均值分别为56.668、413.025、314.9、104.64。实验评价OD492nm值和血清中和抗体效价关系,相关性很大,并证明这种疫苗对预防轮状病毒引起犊牛腹泻是安全有效的。

PRRSV新疆分离株的ORF5序列分析与同源性比较

采用RT—PCR技术，分别对PRRSV新疆分离株XJ—a，XJ—b，XJ—C的ORF5片段的ORF5基因进行扩增，获得长度为603bp的特异性目片段。ORF5片段序列分析表明，新疆3个分离株的ORF5基因与欧洲型PRRSV毒株序列核苷酸的同源性为56．1％～56．4％，与标准美洲型PRRSV毒株序列的核苷酸同源性达到86．6％～87．2％，与国内部分省市流行株的同源性在96．0％～99．2％。PRRSV新疆分离株属于北美洲型PRRSV的变异毒株，属同一亚型，毒株间也存在一定的差异，具有高度致病性的生物学特征。

食品微生物检验内容与检测技术分析

社会的发展,时代的进步,带动了我国科技水平的进一步提高,当然,各个领域都能体现出我国科技的迅速发展,这也为各领域带来了全新的挑战与机遇。食品检验作为社会公众高度重视的一项内容,传统食品检验方式已然无法满足当下发展需求,微生物检验技术的合理应用,能提升检验结果的精准性,是未来发展的一个重要趋势。值得注意的是,若想进一步提升食品微生物检验质量,为食品安全负责,为广大人民群众的身体健康负责,还需要业内人士充分掌握食品微生物检验内容及其特点,对具体检验技术进行更加细致的分析。

小鼠胚胎的玻璃化冷冻研究

用不同冷冻载体(玻璃管、塑料管和0.25 mL细管)及不同冷冻方法(程序化冷冻和玻璃化冷冻)对小鼠3.5 d^4 d桑椹胚和囊胚进行冷冻保存,并与不做任何冷冻保存处理直接培养进行对比。结果表明,使用玻璃管、塑料管和0.25 mL细管作为胚胎的承载材料进行玻璃化冷冻,效果差异不显著;采用程序化冷冻与OPS玻璃化冷冻法,对小鼠胚胎进行冷冻保存可以取得较好的结果。从而得出,用不同材质的冷冻载体进行玻璃化冷冻,可以获得与程序化冷冻相同的良好效果。

哺乳动物胚胎低温保存研究进展

胚胎冷冻是一项新的细胞冷冻保存技术,胚胎低温保存对于提高哺乳动物繁殖效率有很重要的意义,本文对家畜胚胎低温保存的特点,原理和方法进行了综述,并介绍了下班化冷冻保存的新方法。

牛梨形虫病综合防治措施的实验性研究

【目的】处于干旱、半干旱区的新疆是蜱侵袭较严重的地区。目前已发现牛群中存在这三种梨形虫病,但只有牛泰勒虫病有有效的疫苗防治。探讨新疆牛梨形虫病综合防治措施,制定出该区综合性的预防和治疗方案并予以实施。【方法】选择牛梨形虫病比较严重的疫区作为实验点,根据该区的气候、季节特点,通过流行病学调查、驱蜱、疫苗接种、药物治疗。【结果】该区的牛梨形虫病综合防治措施牛梨形虫病的发病率显著降低,实验期间牛群中没有发现死亡。【结论】通过制定牛梨形虫病综合防治措施使疫区牛群的牛梨形虫得到有效控制,在新疆农区与牧区具有借鉴意义。

检测牛轮状病毒抗体间接ELISA方法的建立与应用

以田间分离的轮状病毒CHLY(G6型)作为抗原,建立了犊牛轮状病毒(BRV)抗体检测与监测的间接ELISA方法。田间监测牛轮状病毒感染率为32.91%(26/79),疫苗源性抗体高峰出现在二次免疫后第40天至第60天,抗体持续期为3个月。该方法可用于粪便、血清样品的检测,具有特异性强、快速简便等优点,适合于对轮状病毒特异性抗体的动态监测和批量检测。

Rncat小鼠不同交配方式的繁殖性能及晶状体浑浊度比较

目的研究不同交配方式SPF级Rncat先天性白内障小鼠繁殖学及晶状体浑浊度特征。方法以背景品种昆明小鼠为对照组,以Rncat先天性白内障小鼠近亲交配和最佳避免近交法交配为实验组,分别测定连续繁殖5代的繁殖性能及眼部晶状体浑浊度。结果与近亲交配的Rncat先天性白内障小鼠相比,最佳避免近交法交配的Rncat先天性白内障小鼠、昆明小鼠的繁殖性能、晶状体浑浊度差异显著(P<0.05或P<0.01)。结论近亲交配的Rncat先天性白内障小鼠和最佳避免近交法交配的Rncat先天性白内障小鼠繁殖性能和晶状体浑浊程度有一定差异,可以为实验人员提供参考。

让智慧评语成为学生成长的催化剂

数学作业是学生掌握知识、形成技能的必要手段。充分发挥数学评语在教学中的正确导向和激励作用,有利于学生智力和身心得到全面的积极主动的发展,不仅可以激发学生的学习兴趣,提高学生学习的自信心,还可以培养学生的创新意识,促进师生关系的和谐发展。

一种新型含氯低温消毒剂的消毒效果及安全性评价

目的观察以二氯异氰尿酸钠为主要成分的固-液二元新型低温消毒剂的杀菌效果,并进行毒理学安全性评价。方法采用细菌繁殖体(金黄色葡萄球菌和大肠埃希菌)载体定量杀菌试验和现场试验对该消毒剂的消毒效果进行观察,采用小鼠急性经口毒性试验和微核试验对该消毒剂的安全性进行评价。结果该消毒剂原液在-18℃低温条件下作用5 min,对布片载体上金黄色葡萄球菌和大肠埃希菌的杀灭对数值均>3.00,在现场试验中(温度约-15℃),对金属载体上金黄色葡萄球菌的杀灭率≥99.9%;小鼠急性口服LD_(50)>5000 mg/(kg·bw),对小鼠骨髓嗜多染红细胞微核率无明显改变作用。结论该消毒剂在-18℃低温条件下具有较好的杀菌效果,安全性较好。