化学发光法测定辣根过氧化物酶浓度的实验条件探讨

探讨了对碘苯酚（PIP）增强的鲁米诺—过氧化氢—辣很过氧化物酶（Luminol-H_2O_2-HRP）体系的反应特性,通过正交试验并经方差分析,获得了增强发光酶免疫检测法测定辣根过氧化物酶（HRP）及其标记物的最佳实验条件（缓冲液的pH=8.2,Luminol的浓度5×10^(-4)mol/L,H_2O_2的浓度4×10^(-3)mol/L,PIP的浓度4×10^(-4)mol/L,乙二胺四乙酸的浓度0.25mg/ml,温度25℃.反应时间10min）。在上述最佳条件下检测HRP的浓度,其线性范围为:10^(-9)～10^(-12)g/L,Y=-0.05+1.07X（r=0.96,P<0.01）,最低检出限为 0.2pg（5 amol）。