强骨胶囊抗维甲酸所致大鼠骨质疏松症的实验研究

应用维甲酸所致的骨质疏松症模型，灌胃强骨胶囊４５ｍｇ·ｋｇ－１·ｄ－１、９０ｍｇ·ｋｇ－１·ｄ－１、１８０ｍｇ·ｋｇ－１·ｄ－１三个剂量组２８ｄ。结论：该药各组和阿法Ｄ３组与模型组比较均能明显提高大鼠骨密度（Ｐ＜０．０５）、骨结构力学的最大载荷、最大能量吸收值（Ｐ＜０．０５），骨材料力学的弹性应变、最大应力、弹性模量（Ｐ＜０．０５），其中大剂量组（除弹性模量外）作用更为明显且优于阿法Ｄ３组。说明该药能增加骨组织的承载力，提高骨骼抵抗外力冲击的能力，并对骨的几何形状及内在材料特性有一定的改善作用。另外，该药能升高血Ｃａ、Ｅ２、Ｔ、ＦＳＨ、ＢＡＬＰ、ＡＬＰ（Ｐ＜０．０５），降低ＰＴＨ（Ｐ＜０．０５）水平。总之，强骨胶囊具有增加骨密度，改善骨生物力学指标，具有性激素及促性腺激素样作用，可以提高血钙及血、骨中的碱性磷酸酶，促进骨形成，抑制骨吸收。

第二代骨吸收生化标志物——血清抗酒石酸酸性磷酸酶5b的临床研究

目的 对血清TRACP5b作为骨吸收生化标志物进行临床研究。方法 利用BoneTRAP试剂盒 ,对 473例正常及骨质疏松患者血清做TRACP5b检测及分析。结果 男性和女性 ,随年龄的增加 ,特别是男性更年期及女性绝经期后 ,血清TRACP5b水平均不断升高 ,表明骨吸收增强 ;当患有骨质疏松后 ,血清中TRACP5b的水平高于同龄人 ,且男性及女性骨质疏松患者血清TRACP5b水平均高于正常人 ,统计学提示有显著性差异。

白蛋白结合型紫杉醇对人骨肉瘤OS-732细胞的体外抑制作用观察

目的观察白蛋白结合型紫杉醇(Abraxane)对人骨肉瘤OS-732细胞的体外抑制作用。方法取传代第3天、处于指数增殖期的人骨肉瘤OS-732细胞,分别加入不同浓度的阿霉素、紫杉醇(泰素)和Abraxane培养,于培养24、72、144 h时用MTT法测定细胞的光密度值(OD值)并计算细胞毒性指数(CI),倒置相差显微镜观察细胞形态,流式细胞术检测细胞周期。结果骨肉瘤OS-732细胞加入Abraxane后,OD值下降,以加入100、1 000μg/ml的Abraxane组及培养72、144 h时下降明显,CI则相应升高,同时细胞变小、核碎裂,G2～M期细胞的比例逐渐增加;除100μg/ml浓度处理24 h和72 h后,泰素处理组的CI高于Abraxane组外,两组相同浓度、相同处理时间的CI相近;最高剂量Abraxane和最高剂量阿霉素组的CI也相近。结论 Abraxane在体外对骨肉瘤OS-732细胞有显著的抑制作用,能将骨肉瘤细胞阻滞于G2～M期。Abraxane与泰素和阿霉素的细胞毒性相似。

带腱鞘异体肌腱移植的实验研究

目的 探讨深低温冷冻带腱鞘异体肌腱移植的可行性 ,为屈指肌腱 区腱鞘和肌腱缺损重建提供新的修复材料。方法 将 6 0只北京双 A鸡随机分为两组 ,A组为异体移植 ,B组为自体移植。每组再分两个亚组 ,A1全鞘异体肌腱移植 ;A2部分鞘 (滑车 A2～ A4)异体肌腱移植 ;B1全鞘自体肌腱移植 ;B2部分鞘 (滑车 A2～A4)自体肌腱移植。异体材料采用深低温处理 ,移植术后进行组织形态学、移植免疫学及肌腱滑动功能检测。结果 A1组与 B1组移植术后局部组织反应重 ,腱鞘形成生物屏障 ,影响肌腱的营养致使肌腱变性 ,纤维化 ,部分坏死。A 2组与 B2组肌腱愈合良好 ,组织修复能力强 ,腱鞘与肌腱间可分离。带部分腱鞘异体肌腱经深低温处理后 ,其组织抗原性明显降低 ,组织修复能力同自体移植 ,愈合后腱鞘与肌腱间隙存在 ,移植鞘与正常肌腱组织结构相同。

1α，25双羟维生素D_3对成骨样细胞增殖与分化的影响

采用同位素掺入，细胞周期、细胞化学和扫描电镜等方法观察了１α，２５双羟维生素Ｄ３［１，２５（ＯＨ）２Ｄ３］对人及大鼠成骨样细胞ＯＳ－７３２和ＲＯＳ１７／２．８增殖及分化的影响。结果表明：１，２５（ＯＨ）２Ｄ３对ＯＳ－７３２细胞增殖的抑制作用呈明显的时效和量效关系。在给１０－７ｍｏｌ／Ｌ的１，２５（ＯＨ）２Ｄ３后第４和第６天，对ＯＳ－７３２细胞生长的抑制率分别为４０％和６０％；对ＤＮＡ，ＲＮＡ和蛋白质合成的抑制作用分别为５９％，４１％和２２％。流式细胞计测定结果表明：１，２５（ＯＨ）２Ｄ３使ＤＮＡ合成受阻；扫描电镜显示：１，２５（ＯＨ）２Ｄ３有抑制ＲＯＳ１７／２．８细胞表面微绒毛的作用。此外，细胞化学染色表明：该激素有增加成骨样细胞碱性磷酸酶活性和促进骨形态形成蛋白合成的作用，即刺激骨形成的作用。

免疫抑制剂对培养大鼠巨噬细胞和雪旺细胞影响的研究

目的初步探讨多种免疫抑制剂对培养的大鼠巨噬细胞和雪旺细胞数量的影响。方法取新生大鼠腹腔巨噬细胞和坐骨神经雪旺细胞进行培养,细胞生长稳定、定量计数后,分别加入不同浓度的环孢素A(ciclosporinA,CsA)、FK506和甲基强地松龙(CsA浓度为10-5、10-6、10-7和10-8mol/L;FK506浓度为10-6、10-7、10-8和10-9mol/L;甲基强地松龙浓度为10-3、10-4、10-6和10-8mol/L),设立不加药物的空白对照组。于培养24、48和72h后,分别取各浓度药物作用的细胞,用MTT法检测细胞数量。结果对于巨噬细胞,甲基强地松龙仅在10-4mol/L对其有明显保护作用,而CsA和FK506则分别在10-6、10-7、10-8mol/L和10-7、10-8、10-9mol/L能够较好地保护巨噬细胞。对于雪旺细胞,10-3mol/L甲基强地松龙对其生长有显著抑制作用,而10-8mol/L作用72h,则表现为对雪旺细胞明显的保护作用。除了10-5mol/LCsA作用72h会显著减少培养的雪旺细胞数量外,其他浓度的CsA和FK506对雪旺细胞的数量无显著影响。结论高浓度的甲基强地松龙以及一定浓度的CsA和FK506能够保护培养的巨噬细胞,但高浓度的甲基强地松龙和CsA可抑制雪旺细胞的生长,长时间、低剂量的甲基强地松龙对雪旺细胞有明显的保护作用。

17β-雌二醇对人成骨样细胞OS-732增殖和分化的影响

采用绘制生长曲线３Ｈ－ＴＤＲ掺入、ＡＬＰ、ＢＧＰ的定量测定、免疫组化、原位杂交等和光镜等方法，探讨了１７β－雌二醇对ＯＳ－７３２细胞增殖和分化的影响及对骨粘连蛋白（ＯＮ）ｍＲＮＡ表达的影响。结果显示：１７β－雌二醇以剂量依赖性促进ＯＳ－７３２细胞的增殖，其中以１０－８ｍｏｌ／Ｌ浓度作用最强；１７β－雌二醇可以轻度降低ＡＬＰ的活性和ＢＧＰ的分泌，对ＯＳ－７３２细胞分化有轻微抑制作用。免疫组化实验结果表明ＯＳ－７３２细胞上存在ＥＲ受体，且给药后核内ＥＲ增多，为雌激素直接作用于成骨样细胞提供了一个例证。原位杂交结果表明ＯＳ－７３２上存在（ＯＮ）ｍＲＮＡ的表达，而给药后无明显变化。

SCI数据库关于神经干细胞移植治疗脊髓损伤研究的10年文献分析

背景:脊髓损伤是中枢神经系统的严重创伤,是目前公认的疑难病之一。组织工程细胞移植为脊髓损伤治疗提供了新的思路,使损伤轴突修复、再生和恢复脊髓部分神经功能成为可能。目的:利用SCI数据库文献检索和深度分析功能,对神经干细胞移植治疗脊髓损伤研究的10年文献资料进行多角度的探讨分析。设计:文献计量学分析。资料提取:由第一作者以"neural stem cells(神经干细胞),spinal cord injury or spinal injury(脊髓损伤),cell transplantation(细胞移植),spinal transection(脊髓横断)"为关键词检索SCI数据库2002-01/2011-12的相关文献,并将分析结果及资料导出,以文字和图表的形式进行统计和计量分析,描述其分布特征。入选标准:纳入标准:检索神经干细胞移植治疗脊髓损伤研究相关的文献。文献类型包括研究原著、综述、会议记录及摘要、快报文章、编辑素材。排除标准:与文章目的无关的文献,大于10年较陈旧的文献,未发表的文章以及需电话追踪和手工检索逐一分析的文献。主要数据判定指标:以文献的类型、出版时间、发表文献的作者分布、学科类别、机构分布、国家地区分布、来源期刊、文献被引情况及基金资助机构进行相关分析。结果:SCI数据库2002/2011收录的文献中共检索到500篇神经干细胞移植治疗脊髓损伤研究相关的文献,研究原著以348篇位居首位,其中有15篇可以确定为经典文献。在时间分布上,文献数量2002/2011总体呈上升趋势,来源出版物呈分散情况,其中Journal of Neurotrauma《神经外伤杂志》发表文献量22篇,占全部文献的15.09%。其次为Journal of Neuroscience Research《神经科学研究杂志》21篇。结论:通过文献计量学方法对来源于SCI数据库关于神经干细胞移植治疗脊髓损伤研究的文献进行分析,可为了解该领域的概貌、现状和研究者进一步确定该领域研究的热点难点提供有价值的参考。

尿微量白蛋白ELISA结果在正常人群中的分布及临床意义

目的应用建立的ELISA抗原竞争法测定不同年龄段正常人及糖尿病患者尿微量白蛋白水平。方法建立ELISA抗原竞争法,用同类进口试剂盒对本方法进行质量评价;检测682例正常人及60例糖尿病患者随意尿中微量白蛋白含量。结果尿微量白蛋白标准曲线线性良好,本法测得正常人尿微量白蛋白参考值范围为0～27.9mg/L,平均值为9.68mg/L,男女人群间无显著性差异。正常人14～20岁年龄段尿微量白蛋白为35.2mg/L,60岁和70岁以上两个老年组分别为34.4mg/L和36.9mg/L;60岁以上糖尿病患者的尿微量白蛋白含量显著高于同龄对照组。结论正常人尿微量白蛋白参考值范围为0～27.9mg/L。青春期及60岁以上正常人尿微量白蛋白浓度可达34.4～36.9mg/L;60岁以上糖尿病患者的尿微量白蛋白高于同龄正常人群。

脑梗死患者血浆胰岛素样生长因子-1的含量变化及其意义

目的 研究脑梗死急性期患者血浆胰岛素样生长因子 1(IGF 1)的含量变化及其临床意义。方法 30例脑梗死急性期患者于发病后 2 4h内及发病后第 3天、第 10天上午 6～ 8时采血 ,采用放免法测定血IGF 1含量。另选30例脑梗死后遗症期患者及 30名正常人作为对照。结果 脑梗死急性期患者血IGF 1(第 1天为 99± 5 1,第 3天为91± 5 1,第 10天为 93± 44 ,单位 :μg/L)明显低于脑梗死后遗症期患者 (171± 5 1)及正常人 (175± 49)。 结论 脑梗死急性期患者血浆IGF 1含量降低 ;IGF 1在脑梗死的发生、发展中起一定作用。

1,25双羟维生素D_3对成骨样细胞骨架和基因表达的影响

用荧光免疫法研究了１，２５双羟基维生素Ｄ３对大鼠成骨样细胞（ＲＯＳ１７／２．８）细胞骨架的影响和用斑点杂交技术研究了１，２５（ＯＨ）２Ｄ３对人成骨样细胞（ＯＳ－７３２）基因表达的影响。结果表明：在１０－７ｍｏｌ／Ｌ１，２５（ＯＨ）２Ｄ３连续作用４ｄ后，大鼠ＲＯＳ１７／２．８细胞的微管蛋白和波形纤维蛋白明显改善，纤粘蛋白荧光明显增强。而在１，２５（ＯＨ）２Ｄ３作用前后ＯＳ－７３２细胞ｃ－ｍｙｃ和ｍｅｔＤ基因均处于高度活跃表达状态。本文还讨论了细胞分化与细胞骨架及基因表达的关系。

唑来膦酸联合多柔比星治疗人骨肉瘤裸鼠模型的实验研究

目的观察唑来膦酸(ZOL)单药在体内对人骨肉瘤裸鼠移植瘤的治疗作用,明确ZOL联合DOX化疗治疗骨肉瘤的疗效。方法人骨肉瘤细胞株OS-732复苏后体外培养传代备用。48只SPF级BALB/c雌性裸鼠备用。运用组织块接种法于裸鼠右腋后皮下成瘤,实验分为6组:生理盐水对照组(NS组),DOX组,ZOL低、中、高剂量组,DOX+ZOL组。根据肿瘤倍增体积和瘤重得出抑瘤率,按照金氏公式计算Q值明确两种药物对抑制肿瘤的相互作用关系。免疫组化Ⅷ因子评价肿瘤内微血管密度(MVD)、Tunel凋亡细胞计数。结果 DOX组、ZOL低剂量组、ZOL中剂量组、ZOL高剂量组、DOX+ZOL组抑瘤率分别为43.01%、16.83%、23.88%、6.66%、49.55%,Q值为0.87,显示二者效应为单纯相加;DOX组、DOX+ZOL组凋亡指数、MVD与NS组有统计学差异,但DOX组与DOX+ZOL组间无差异。结论对于人骨肉瘤OS-732皮下移植裸鼠模型,ZOL单药干预抑瘤作用不显著;ZOL与DOX联合用药在本研究实验动物体内表现为相加作用。

增塑淀粉的细胞毒性实验

目的:测试增塑淀粉的生物安全性。方法:采用一种能快速评定细胞增殖率和细胞毒性的比色分析方法—MTT比色法,检测该材料对小鼠成纤维细胞L929细胞相对增殖率的影响,评价其细胞毒性。结果:按照GB/T16175-1996标准,增塑淀粉在3个观察点的细胞相对增值率:2d为85.63%,4d为82.22%,7d为113.05%,相对增值率随时间延长而升高,该材料的细胞毒性为0-1级。结论:增塑淀粉无明显细胞毒性。

1α,25二羟基维生素D_3对人早幼粒白血病细胞(HL—60)的诱导分化作用

1α,25二羟基维生素D_3在体外可诱导HL-60细胞向单核/巨噬样细胞发展。在形态上,核/质比例减少,核仁减少,细胞变得不规则并伸出伪足;在细胞化学方面,细胞对NBT还原能力增强,α萘酚醋酸酯酶和酸性磷酸酶阳性率明显增加,细胞周期的变化是:二倍体细胞明显增多,G_0+G_1期增加和S期减少。表明在1α,25(OH)_2D_3作用下,HL-60细胞向成熟分化,细胞DNA合成受抑制。

降钙素对人成骨样细胞增殖与细胞膜流动性的影响

为了解降钙素 (CT)对体外培养的人成骨样细胞 OS- 732增殖与细胞膜流动性的影响 ,并与 1,2 5(OH ) 2 D3的作用进行比较 ,在培养液中添加 1IU/ m l CT前后观察 DNA合成速率、细胞增殖、细胞周期和细胞膜流动性的变化。结果表明 CT有明显促进 OS- 732细胞增殖和 DNA合成的作用 ,使 G2 +M期细胞所占的百分比增加 ,而 S期细胞的百分比下降。1,2 5 (OH) 2 D3可使细胞膜流动性增加 ,而 1IU/ m l CT使其下降。结论认为降钙素与 1,2 5 (OH) 2 D3不同 ,它促进人成骨样细胞增殖和降低细胞膜流动性。

阿霉素联合重组人血管内皮抑制素对人骨肉瘤细胞OS-732作用的体外实验研究

目的确定阿霉素和重组人血管内皮抑制素两种药物联合对人骨肉瘤细胞的体外作用。方法阿霉素、重组人血管内皮抑制素及两药联用处理人骨肉瘤细胞OS-732,分别在24h、72h及144h应用MTT法测定其细胞毒性,同时用倒置相差显微镜观察细胞形态学改变。结果在阿霉素10μg/ml和100μg/ml作用72h和144h后,细胞增殖活性受抑制率达到50%以上,重组人血管内皮抑制素在第72h时对骨肉瘤细胞抑制率为7.3%～9.2%,联合用药组细胞增殖活性与阿霉素单药组无显著性差异。阿霉素和联合用药组细胞均发生细胞变小,核碎裂,失去细胞正常形态,而重组人血管内皮抑制素单药组细胞形态与对照组相似。结论重组人血管内皮抑制素仅在给药后短期内对人骨肉瘤细胞有轻度的抑制作用,重组人血管内皮抑制素不影响阿霉素对骨肉瘤细胞的细胞毒作用。

移植性人骨肉瘤OS-732裸鼠模型的建立

目的建立移植性人骨肉瘤裸鼠模型,为骨肉瘤的提供研究实验模型。方法采取皮下细胞悬液注射法与组织块植入接种法,建立人骨肉瘤裸鼠模型。人成骨肉瘤OS-732细胞株体外传代培养后,将1×107细胞悬液注入裸鼠腋后皮下(10只裸鼠),或将已成瘤的瘤组织块接种于裸鼠腋后皮下(10只裸鼠),观察肿瘤生长情况。接种后4周处死裸鼠,剥瘤称重,行病理鉴定。比较两种方法的成瘤率、终末瘤体积及瘤重、肿瘤相对增长率;大体观及病理组织学。结果两组裸鼠接种2周后均有局部肿瘤形成,细胞悬液组成瘤率70%,组织块组成瘤率100%,两组成瘤率差异无显著性(P>0.05);两组终末瘤体积及瘤重差异具有显著性(均P<0.05)。细胞悬液组相对增长率高于组织块组,接种后第16天开始两组肿瘤增长率具有显著性差异(P<0.05)。病理组织学鉴定符合骨肉瘤镜下特点。结论成功建立了移植性人骨肉瘤裸鼠模型,为临床研究提供了可靠方法。

免疫抑制剂对嗜铬细胞瘤12细胞和L929细胞增殖的影响

目的 初步探讨多种免疫抑制剂对嗜铬细胞瘤12（pheochromocytoma 12，PC12）细胞和L929细胞增殖的影响。方法 对数生长期PC12细胞和L929细胞传代，取细胞株复苏后第3代细胞均以1×10^6／ml密度接种于培养板中，分别加入10、10、10^-7和10^8mol／L环孢菌素A（cyclosporin A，CsA），10^-6、10^-7、10^-8和10^-9mol／LFK506以及10^-3、10^-4、10^-6和10^-8mol／L甲基强地松龙，并设立空白对照组。于培养24、48和72h后，取各浓度药物作用的细胞，采用MTT法检测细胞增殖。结果 高浓度（10mol／L）甲基强地松龙和较低浓度（10^-8～10^-7mol／L）CsA，在给药后48h内对PCI2细胞增殖有明显促进作用，此后促增殖作用不明显；而各个浓度的FK506均无促进PCI2细胞增殖的作用。高浓度甲基强地松龙（10^-3mol／L）和CsA（10^-6～10mol／L）作用24h后，对L929细胞增殖有显著抑制作用，FK506仅在较高浓度（10^-6mol／L）有一过性（仅出现于给药后48h）促进L929细胞增殖的作用。结论 10^-3mol／L甲基强地松龙和10^-8～10^-7mol／LCsA能够在短时间内促进PC12细胞增殖，而10^-3mol／L甲基强地松龙和10^-6～10^-5mol／L CsA对L929细胞增殖有显著抑制作用。

弹性体生物材料增塑淀粉的细胞 毒性实验(英文)

背景：普通淀粉经过增塑,强度和弹性大大增加,成为增塑淀粉,该材料分子量巨大、缠绕点多、对小分子具有超强包容性、凝胶化能力强, 可作为替代海藻酸盐的可降解材料, 并通过加入骨诱导因子, 成为具有止血及诱导成骨双重作用的组织工程材料; 还可用于口腔组织引导膜、烧伤后皮肤敷料等。目的： 通过细胞毒性实验,测试增塑淀粉的生物安全性。设计：观察对比实验。单位：北京市创伤骨科研究所;北京积水潭医院;北京化工大学;北京大学口腔医学院。材料：实验于2006-04/10在北京市创伤骨科研究所细胞实验室完成。增塑淀粉是通过将含水 12%的玉米淀粉与一定比例的甘油在哈克密炼机中熔融共混得到的, 温度和转速分别为 110 ℃和 80 r/min ,混炼时间 25 min,断裂伸长率 115.3%～245.3%;由北京化工大学北京市新型高分子材料制备与加工重点实验室研制。实验选用的小鼠成纤维细胞 L929 细胞株由北京大学医学部细胞库提供。方法： 在 1×10^7 L^-1 L929 细胞悬液中加入增塑淀粉后获得浸提液浓度为 50%,对照组为该悬液常规培养液。用 MTT 比色法定量测试材料对 L-929 细胞相对增殖率的影响, 并根据 GB/ T16175-1996 标准评估细胞毒性。应用倒置显微镜观察两组细胞培养 2,4,7d 后形态和生长状况。主要观察指标：①细胞毒性。②细胞形态及增殖情况。③细胞相对增殖率。结果：①细胞毒性：增塑淀粉组在培养 2, 4 d 后 A 值低于对照组,7 d后的 A 值高于对照组,差异有显著性意义（P 〈 0. 01）,提示培养 2,4 d后增塑淀粉组细胞毒性大于对照组,而 7 d 则相反;实验材料细胞毒性分级为 0～1。②细胞形态及增殖情况：培养 2 d 时两组细胞均未占满视野, 细胞形态呈三角、四边形, 对照组有梭形细胞;培养 4 d时细胞布满视野, 细胞生长旺盛。增塑淀粉组细胞间仍有间隙, 对照组细胞间无间隙, 部分区域细胞出现堆积现象。培养 7 d 时淀粉组细胞生长出现堆积、重叠现象, 生长旺盛度优于对照。③细胞相对增殖率：细胞培养 2,4,7 d 后相对增殖率随培养时间延长而升高,分别为 85. 63%, 82. 22%, 113. 05%。结论： 增塑淀粉无明显细胞毒性,有良好的生物安全性。