细胞增殖检测方法的研究进展

细胞增殖检测在医疗器械生物学评价、药物筛选、免疫学以及化妆品安全性评价等多个领域内均具有广泛的运用.体外细胞增殖试验的检测方法通常有代谢活性物检测,主要包括MTT法、XTT法、MTS法、WST-1法、CCK-8法、CFDA-SE法;DNA含量检测,主要包括3H胸腺嘧啶核苷(^(3)H-TdR)渗入法、2,5-溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)法、Edu法、流式细胞术;细胞增殖相关抗原检测包括Ki67和PCNA.对以上细胞增殖检测方法的各自特点展开综述,以期为相关研究提供参考.

基于大片吸虫分泌排泄产物层析组分的牛片形吸虫病间接ELISA诊断方法的建立

为建立更敏感、特异的牛片形吸虫病早期诊断方法,本试验将收集的大片吸虫分泌排泄产物(Fasciola gigantica excretory-secretory products,FgESP)进行凝胶过滤层析并从中筛选出检测效果最优的UV280吸收峰,从此峰对应的组分中筛选出诊断效果最优的层析组分后将其作为抗原,通过棋盘滴定试验优化抗原包被浓度、血清稀释度、酶标二抗稀释度、显色时间等,确定临界值,建立牛片形吸虫病间接ELISA诊断方法。对建立的方法进行敏感性和特异性试验,检测试验感染0~14周的水牛血清和临床160份水牛血清样本,并与已有的诊断抗原FgESP(阴阳临界值为0.320)进行诊断效果比较。结果显示,层析组分F22具有较优的检测效果。间接ELISA的最佳反应条件为:F22抗原包被浓度0.157μg/mL,待测血清与酶标二抗的稀释度分别为1∶400和1∶40000,显色时间为25 min。应用建立的方法检测15份水牛阴性血清,确定D_(450 nm)阴阳性临界值为0.408。比较F22与FgESP发现,二者特异性相似,但F22作为抗原的敏感性高于FgESP。检测试验感染大片吸虫的水牛0~14周血清,结果表明,从感染第2周开始F22-IgG水平极显著高于FgESP-IgG水平(P<0.01),因此,F22比FgESP诊断效果更优。对160份水牛血清检测发现,F22阳性检出率为71.25%,FgESP阳性检出率为63.75%。上述结果表明,相比于FgESP,以F22作为诊断抗原建立的大片吸虫病间接ELISA诊断方法敏感性更高,可更有效地进行牛大片吸虫病的早期诊断。

小议养犬的历史与文化

犬属于食肉类动物,世界各地都有犬分布。有科学界的人士认为犬是由人类从狼驯化而来,驯养时间在4~1.5万年前。犬待人忠诚,被广泛饲养。寿命约为十年左右。最早的犬化石证据来自于德国,这些证据证实了犬起源于西南亚以及欧洲,犬在不同品种上形态多样,又有犬起源于不同群体的假说。总之,种种表明犬早已与人类相处了上万年,犬的饲养历史悠久,饲养文化深厚,犬的存在与进化和人类文明发展有着深厚的联系。西方人还有精美的艺术作品来歌颂犬,犬一直被认为是人类最忠实的朋友。

一次和二次感染大片吸虫水牛PBMC因子动态变化的研究

为了探究水牛一次和二次感染大片吸虫后外周血单核细胞(PBMC)因子的动态变化,试验将6头10月龄杂交水牛均分为一次感染组和二次感染组,一次感染组于第4周时口服感染囊蚴250个,二次感染组于第0,4周时分别口服感染囊蚴250个,采用间接ELISA方法检测是否感染成功。一次感染组于第4(感染前)~10,15,20周及二次感染组于第0(感染前)~10,15,20周时采集水牛颈静脉血液并分离PBMC,提取RNA后进行实时荧光定量PCR扩增,分析不同时间PBMC标志免疫相关的细胞因子——Th1[γ干扰素(IFN-γ)]、Th2[白细胞介素-4(IL-4)]、Treg[白细胞介素-10(IL-10)、转化生长因子-β(TGF-β)]基因的相对表达量变化。结果表明:一次感染组和二次感染组水牛分别在第6,3周被确定感染,动物模型构建成功。与感染前相比,一次感染组IFN-γ基因相对表达量在第6周显著降低(P<0.05),第15周极显著升高(P<0.01),第20周显著升高(P<0.05);二次感染组在整个试验期均差异不显著(P>0.05)。一次感染组IL-4基因相对表达量在第15,20周极显著升高(P<0.01);二次感染组在第15周极显著升高(P<0.01),第20周显著升高(P<0.05)。一次感染组IL-10基因相对表达量在第5周显著升高(P<0.05);二次感染组在第15周显著升高(P<0.05)。一次感染组TGF-β基因相对表达量在第5周极显著升高(P<0.01),二次感染组在第5周显著升高(P<0.05)。一次感染组与二次感染组比较,IFN-γ、IL-4、TGF-β基因相对表达量均差异不显著(P>0.05),IL-10基因相对表达量在第15周差异显著(P<0.05),此外在第5周IFN-γ基因相对表达量呈现出明显不同的变化趋势。说明大片形吸虫一次和二次感染水牛引起的免疫应答类似,提示一次感染大片吸虫未能诱导水牛产生有效杀伤虫体的免疫应答,是水牛对大片吸虫二次感染易感的原因之一。

广西地区牛片形吸虫病流行病学调查及用药方案的初步探索

为了初步了解广西地区牛片形吸虫病的流行情况及预防片形吸虫病的最佳用药方案,试验采用以大片吸虫分泌排泄产物(FgESP)及FgESP凝胶过滤层析组分F22为诊断抗原的间接ELISA方法对广西地区12个地级市进行牛片形吸虫病的流行病学调查;同时随机调查了南宁市周边7个牛场的药物驱虫方案,从针对片形吸虫进行药物驱虫的牛场中采集一定数量的血清样本检测阳性率,然后利用该牛场的驱虫药物进行药物驱虫试验,即将6头阳性水牛随机分成试验组和对照组,对试验组水牛进行一次性用药,并在用药前、用药1个月和2个月时进行间接ELISA检测和粪便虫卵检查。结果表明:广西地区牛片形吸虫的感染较为严重,以FgESP为诊断抗原的间接ELISA方法检测出的平均阳性率为57.30%;南宁市、防城港市、玉林市阳性率较高,分别为83.75%、88.75%、83.57%;柳州市、贺州市阳性率较低,分别为3.85%和6.25%。以F22为诊断抗原的间接ELISA方法检测出的平均阳性率为68.19%;南宁市、防城港市、玉林市阳性率分别为87.50%、90.00%、93.58%,柳州市、贺州市阳性率分别为10.26%和37.50%。两种诊断方法的平均符合率为83.92%。南宁市周边牛场中仅有一个牛场针对片形吸虫进行了药物驱虫,该牛场片形吸虫的感染率较低,采用的驱虫药物为硝氯酚。利用硝氯酚对试验组的3头水牛各用药1次,在用药1,2个月后试验组抗体呈阴性,抗体水平极显著低于对照组(P<0.01),粪便中未检出虫卵。说明广西地区牛片形吸虫感染严重,F22抗原可作为牛片形吸虫病的诊断抗原,硝氯酚对广西地区牛片形吸虫病有较好的驱虫效果。