纳米顺铂对小鼠卵母细胞体外成熟的影响

纳米顺铂通过纳米载体包载顺铂进而发挥抗肿瘤作用,但纳米顺铂在杀死肿瘤细胞的同时,其对动物生殖细胞的影响尚不明确,试验通过在卵母细胞成熟培养液中添加顺铂及纳米顺铂对比了二者对小鼠卵母细胞体外成熟的影响。采集ICR小鼠未成熟卵母细胞并随机分为对照组、顺铂组和纳米顺铂组,体外培养16 h后统计卵母细胞成熟率;并对比卵丘卵母细胞复合体和裸卵经顺铂和纳米顺铂处理后减数分裂进程的差异,以探究颗粒细胞对纳米顺铂影响卵母细胞减数分裂的作用。通过免疫荧光染色检测染色体、纺锤体及肌动蛋白帽的形态变化以确定纳米顺铂对卵母细胞体外成熟过程中细胞骨架的影响。结果显示,顺铂组卵母细胞成熟率显著低于对照组,纳米顺铂组卵母细胞成熟率显著高于高浓度顺铂组,去除颗粒细胞后,纳米顺铂组停滞于GV期卵母细胞比例显著低于高浓度顺铂组。与对照组相比,顺铂组和纳米顺铂组的染色体排列正常率和细胞骨架形态正常率均显著降低,但纳米顺铂组染色体排列正常率显著高于顺铂组,两组之间细胞骨架正常率无显著性差异。结果提示,纳米顺铂通过增加减数分裂的完成性及维持核染色体的正常排布来减弱对小鼠卵母细胞的毒性作用,但不能改善顺铂对卵母细胞骨架的损伤,颗粒细胞能够在一定程度上降低纳米顺铂对卵母细胞减数分裂恢复的抑制作用。

人乳铁蛋白乳腺特异性表达载体的构建及其功能的验证

构件pbCNCS/LF36经微注射获得转基因小鼠,同时为了准确筛选出整合的单克隆细胞,增加1个Cre/LoxP-GFP-Neo系统构建成pAPLM,将其转染山羊胎儿成纤维细胞筛选阳性细胞。结果表明:小鼠受体妊娠率28.5%,产仔32个,PCR整合检测4只阳性(3♀、1♂,整合率12.5%)。构件产生的3只母鼠和4号后代母鼠乳汁中重组人乳铁蛋白(hLF)用ELISA方法检测,表达量分别为3.8、2.8、0.9mg.mL-1,4号后代3只母鼠表达量分别为4.2、3.9、3.6mg.mL-1。构件pAPLM片段转染细胞后,经G418筛选,挑取单克隆扩大培养,其中8株PCR阳性克隆细胞荧光显微镜观察100%都有GFP的表达。以上结果证实,双启动子能调控外源基因在乳腺中特异高水平表达hLF,双标记基因可提高筛选阳性供核细胞的准确性,这为进一步作体细胞转基因克隆奠定基础。

不同FSH剂量·季节和重复超排对山羊超数排卵的影响

[目的]研究不同FSH剂量、季节和重复超排等因素对供体羊超排效果的影响,为扬州地区进一步做好山羊胚胎移植和胚胎生物工程研究提供必要的数据。[方法]设计不同FSH剂量(240 IU和300 IU)、季节(10～12月份和4～6月份)、重复超排(第1次和第2次),鉴定超排效果。[结果]FSH 240 IU和300 IU组的平均排卵点和可用胚数分别为10.12个、8.82枚和15.55个、13.15枚,2组间平均排卵点和可用胚数差异显著(P<0.05);在4～6月份和10～12月份的平均排卵点和可用胚数分别为9.05个、7.05枚和15.55个、13.15枚,2组间平均排卵点和可用胚数差异显著(P<0.05);供体使用1次和2次的超排效果差异不显著(P>0.05)。[结论]FSH剂量、季节因素对超排效果影响显著,供体重复使用对超排效果影响不显著。

复合催化剂降解纤维素制备5-羟甲基糠醛

以离子液体1-烯丙基-3-甲基咪唑氯盐([Amim]Cl)为溶剂,以磺酸型阳离子交换树脂和CrCl_3·6H_2O为复合催化剂,在微波辅助加热条件下采用一锅法降解微晶纤维素制备5-羟甲基糠醛,考察了催化剂加入量、反应温度、反应时间、加水量等反应条件对微晶纤维素降解反应的影响。实验结果表明,当[Amim]Cl用量为2 g、微晶纤维素质量为0.1 g、m(磺酸型阳离子交换树脂)∶m(微晶纤维素)=1∶1、n(Cr Cl_3·6H_2O)∶n(微晶纤维素)=1∶10、反应温度为160℃、反应时间为30 min、加水量为50μL时,微晶纤维素可完全转化,同时总还原糖收率为75.2%,5-羟甲基糠醛收率最高可达53.0%。

程序化冷冻对小鼠胚胎发育的影响

取小鼠原核(220枚)、2~4细胞胚胎(227枚)、桑椹胚(127枚),将其分为3组,每一时期胚胎分成两半,一半取出后立即冷冻复苏并体外培养至囊胚,另一半体外培养至囊胚后冷冻复苏,子宫冲取囊胚(78枚)冷冻复苏为对照组;各组囊胚均移植至子宫,比较程序化冷冻对小鼠早期胚胎存活率的影响。结果表明:原核、2~4细胞胚胎、桑椹胚体外培养至囊胚后冷冻复苏率分别为56.4%、72.2%、81.6%,移植产仔率分别为38.1%、41.6%、56.8%,原核、2~4细胞组复苏率和产仔率极显著或显著低于对照组,桑椹胚组与对照组差异不显著,显示体外培养对早期胚胎冷冻存活有影响;原核、2~4细胞胚胎、桑椹胚冷冻后体外培养至囊胚,胚胎移植后产仔率分别为25.3%、28.2%、42.1%,与对应胚胎时期体外培养至囊胚冷冻复苏后移植产仔率相比,原核、2~4细胞组均存在显著差异,而桑椹胚组差异不显著,显示原核、2~4细胞的早期胚胎体外培养至囊胚后冷冻可提高冷冻存活率。

锌指核酸酶技术在动物转基因中的研究进展

锌指核酸酶(zinc-finger nucleases,ZFNs)技术是近年来发展起来的一种基因修饰技术,利用ZFNs可特异识别靶位点DNA序列并使其断裂。与传统基于同源重组的基因打靶相比,ZFNs能使打靶效率提高100000倍,并使基因断裂与突变修复达到同样效果。ZFNs已经应用于多种生物,包括昆虫、两栖类生物、线虫、植物、多种动物和人类细胞。这些应用提高了人们对复杂生理系统的理解,使ZFNs成为一种生产转基因动物、细胞系和植物的有力工具,并在治疗人类疾病中发挥重要作用。文章对ZFNs技术原理及其应用于哺乳类动物转基因的研究进行了回顾和展望。

从我国科技发明落后现状谈创造力与创新能力培养

从我国诺贝尔获奖情况及科技创造发明现状与世界各发达强国的较大差距中,审视我国教育存在的严重问题——"创造性培养的缺失"!借鉴世界各创新型国家的成功经验、举措及先进教育理论和思想,探析我国基础教育创造力和创新能力的培养.

酪蛋白和巨细胞病毒复合启动子激活人乳铁蛋白cDNA基因在转基因小鼠乳腺中的表达

为了提高转基因动物乳腺特异性表达水平，构建了两种不同启动子的乳腺特异性表达载体，以比较其乳腺特异性表达效果。应用山羊β-酪蛋白或牛αs1-酪蛋白调控序列、鸡β-球蛋白隔离元件、巨细胞病毒（CMV）基因表达调控元件构建了乳腺特异性表达复合启动／增强子（Pcmv），以单一的酪蛋白启动子作为对照，与人乳铁蛋白cDNA组成乳腺特异性表达载体，并制备了转基因小鼠。经ELISA检测，复合启动／增强子构件指导人乳铁蛋白cDNA在原代转基因小鼠乳腺中重组人乳铁蛋白（rhLF）表达水平（2．0～8．1g·L^-1）明显高于单一酪蛋白启动子构件（0—12mg·L^-1），而在所有转基因小鼠的血清和唾液中未检测到rhLF。结果提示：酪蛋白-Pcmv复合启动／增强子不仅可提高转基因小鼠乳腺特异性表达水平，而且具有良好的乳腺表达特异性。

不同激素和重复超排对家猫超排效果的影响

用促卵泡素(FSH)和孕马血清促性腺激素(PMSG)对橘猫进行超数排卵,手术法冲取卵母细胞,并对卵巢上的排卵点和获卵数进行统计,探讨不同激素和重复超排对橘猫超排效果的影响。结果表明:FSH组排卵点数和卵母细胞数分别为6.8和8.8个,国产PMSG组和韩国PMSG组排卵点数和卵母细胞数分别为5.1、7.7及6.2、8.5个,3组间排卵点数和卵母细胞数差异不显著;重复超排时,国产FSH组超排获得的排卵点数和卵母细胞数分别为3.5和5.2个,国产PMSG组排卵点数和卵母细胞数分别为3.1和4.5个,两组间排卵点数和卵母细胞数差异不显著。这一研究说明FSH和PMSG均可用于家猫超数排卵,为开展家猫胚胎工程相关研究奠定了基础。

CD105在肿瘤抗血管治疗中的研究与进展

新生血管为肿瘤生长、扩散和转移提供营养来源,是肿瘤生长和转移的推动力,并为肿瘤组织的增殖提供了基础。CD105是新生血管内皮细胞增殖的标志物之一,标记具有增殖活性的内皮细胞,主要表达在肿瘤的新生血管。与以往泛血管内皮标记因子相比,CD105是一种敏感性较强的新生血管生成标志物,能更准确反映肿瘤的扩散速度和转移情况,可作为衡量血管内皮细胞增殖状态的指标之一。因此,以CD105为靶向抑制肿瘤新生血管生长的治疗肿瘤的新方法成为了目前研究的热点。

季节因素对山羊超数排卵效果的影响

文章旨在研究季节对供体奶山羊超数排卵效果的影响,为胚胎移植等生物工程技术的研究提供必要的数据。分别在春季(3~5月份)秋季(9~11月份)和冬季(12~2月份)3个季节用FSH多次递减注射法对奶山羊进行超数排卵处理,鉴定超排效果。结果:春秋冬3个季节超排的平均排卵点和平均获卵数分别为9.20个、7.15枚,10.58个、9.48枚和10.42个、10.49枚,春季平均排卵点和平均获卵数均显著低于秋冬季节(P<0.05),表明季节对奶山羊的超排效果影响显著。

我国高校体育俱乐部运行机制探析

我国高校体育俱乐部的发展几经沉浮,至今已进入发展相对迟缓期.借鉴当今世界早已处在市场经济条件下的各体育发达国家的相关成功经验,着重对我国高校体育俱乐部的运行机制进行探讨,提出我国高校体育俱乐部应采用“非营利性(no-profit)俱乐部制度运行”.目前我国高校体育俱乐部普遍存在的问题都有望得到解决.

融合条件对小鼠体细胞核移植融合率的影响

目的提高小鼠体细胞核移植过程中融合效率。方法使用CRY-3型和CE-450型细胞融合仪对B6D2F1小鼠去核卵母细胞与该品系小鼠胎儿成纤维细胞构成的重构胚进行融合，通过PEG／DMSO对供核细胞的预处理，比较了不同融合液，不同电极形状融合槽和供核细胞代次对融合率的影响。结果（1）以PEG／DMSO对供核细胞预处理5min的融合率显著高于同条件下未处理组（51．11％vs25．64％）（P〈0．05）；（2）融合液中含0．1g／L聚乙烯醇（PVA）组的融合率高于无PVA组；重构胚在甘露醇浓度为0．32mol／L融合液中的融合率（48．21％）高于其他甘露醇浓度组（27．78％，41．67％和30．11％）；（3）使用针状电极融合槽时的融合率（42．31％，43．13％）高于同条件下平行丝状电极融合槽组（30．43％，33．33％），其中又以在2000V／cm，20μs，2个脉冲时，交流电预处理30S组最高（43．13％）；（4）供核细胞传代一次后融合率随着传代次数的增加而下降。结论通过PEG／DMSO对供核细胞进行预处理，并在融合液中添加PVA时，结合优化的融合条件可以提高小鼠体细胞核移植过程中融合率。

合成载小分子肽羊胎素碳酸钙/磷酸钙纳米材料的方法研究

碳酸钙/磷酸钙是脊椎动物骨骼和牙齿的主要无机成分,具有良好的生物相容性,在生物医学领域具有良好的应用前景。从羊胎儿中提取的小分子肽羊胎素具有很好的生物学作用,为进一步提高小分子肽羊胎素在皮肤中的渗透性和功效,利用生物矿化法合成载小分子肽羊胎素碳酸钙/磷酸钙纳米材料,利用扫描电镜、傅立叶红外光谱对纳米颗粒进行表征,检测其载小分子肽能力和pH的敏感性。结果表明:利用小分子肽羊胎素溶液实现Ca^(2+)、CO_(3)^(2-)、HPO_(4)^(2-)共沉淀获得小分子肽/碳酸钙/磷酸钙复合纳米颗粒同时高效载小分子肽(1.8%),纳米颗粒具有球形结构,直径小于50 nm,且具有较好的pH响应性和蛋白质持续释放能力。在兔和猫眼上试验表明载小分子肽纳米颗粒对动物眼睛无刺激性,有较好的生物安全性。这一研究为利用天然小分子肽合成钙纳米材料提供了依据,同时为进一步开发新一代小分子肽羊胎素纳米材料应用于化妆品奠定了基础。

犬细小病毒病的流行病学调查

犬细小病毒病是一种急性、烈性、致死性传染病,特征是非化脓性心肌炎或出血性肠炎,心肌炎型多见于4～6周龄的幼犬,临床症状未出现就突然死亡,出血性肠炎在临床上极为常见,多数能治愈,多发于幼犬,病死率为10%～50%。为了解犬细小病毒病的发病率与犬的月龄、品种、性别、发病时间之间的关系,在2010年3月至2011年2月收治105例犬细小病毒病例,根据流行病学可以看出,2、3月龄的犬发病率最高,纯种犬发病率高,在其秋冬季应当加重预防与治疗,综合本次调查,对本病提出一些科学防治的建议。

酸性离子液体催化降解纤维素的研究

以离子液体1-烯丙基-3-甲基咪唑氯盐([Amim]Cl)为溶剂,以咪唑类酸功能离子液体[Cnmim]HSO_4(n=2,3,4,5,6,7)为催化剂,在微波辅助加热条件下降解微晶纤维素(MCC),考察了反应温度、反应时间、催化剂用量、加水量、催化剂的哈米特酸度及种类等反应条件对MCC降解反应的影响。结果表明,酸性离子液体的催化效果与其酸性大小有关,其中[C_6mim]HSO_4的哈米特酸度值最小,酸性最强,作为催化剂时效果最佳,当[C_6mim]HSO_4的加入量为0.1 g,纤维素和催化剂的摩尔比为1∶1,反应温度为110℃,反应时间为40 min,加水量为70μL时,微晶纤维素转化率为100%,可还原糖收率为89.94%,葡萄糖收率高达46.24%。该反应使用常见的微波法,操作简单、方便、快速且无污染,与以往反应相比得到的葡萄糖收率较高,为在工业上应用提供了一种可行的方法。

重组人SOD1/3转基因山羊的制备及表达产物的检测

设计了以hSOD1、hSOD3为编码序列,以山羊β-酪蛋白/CMV杂合启动增强子构建乳腺特异性表达载体rhSOD1、rhSOD3,共转染母山羊胎儿成纤维细胞,采用PCR和扩增产物序列分析筛选获得SOD1/3克隆细胞株,应用体细胞核移植(SCNT)制备双转基因山羊。出生小羊经PCR和扩增产物序列分析验证是否成功整合外源基因,经Western blotting、ELISA及体外活性检来验证分析表达产物。结果表明:获得SOD1/3转基因山羊胎儿成纤维细胞系6株;原代双转基因体克隆山羊1只(♀);从该转基因羊乳汁中检测到rhSOD1、rhSOD3,浓度分别为:88.81±8.36 mg/L和267.82±12.67 mg/L;转基因羊乳汁中重组人SOD酶活性为1 432±157 U/mL。研究表明,以双载体和单标记基因转染山羊胎儿成纤维细胞可获得双基因整合转基因细胞系,并且以SOD1与SOD3功能基因均可在山羊乳腺中共同表达,表达产物具有较好的生物学活性。

山羊BLG基因侧翼区的克隆及序列分析

克隆奶山羊β-乳球蛋白基因5′、3′调控区并对其进行序列分析。从徐淮奶山羊组织中提取基因组DNA,采用高保真长模板PCR法克隆得到山羊β-乳球蛋白基因4.2 kb的5′调控区和1.8 kb的3′调控区。将纯化后的PCR产物克隆到pGEM-TEasy载体中,经酶切鉴定和序列测定验证克隆的正确性。部分序列分析表明,5′区与GenBank中登录的山羊和绵羊BLG基因5′区同源性分别为100%和95%;3′区同源性则分别为99%和93%。克隆得到的奶山羊BLG调控区与山羊BLG伪基因显著不同,5′区和3′区同源性分别为83%和88%。结果表明,克隆得到的奶山羊BLG调控区可用于构建乳腺特异性表达载体,为指导外源基因在转基因动物乳腺中的高效表达奠定了基础。

牛瘟流行病学的调查研究

对大量数据资料进行分析的基础上,运用统计方法,对我国历史上及世界上牛瘟的流行情况及特征作了具体阐述,并对其流行病学及风险分析进行了初步研究得出:牛瘟潜伏期最长为21d,流行周期在中国历史上为3～10年,在欧洲历史上为30～40年,在印度、巴基斯坦的流行周期为4～5年,在亚太地区的流行具有一定的季节性,其流行季节多为4～5月份。为能全面掌握世界各地牛瘟的流行分布情况,进行了牛瘟的周期性、季节性两方面的分析,并对各个国家针对牛瘟所采取的控制措施进行了比较、分析。