制订计划,莫脱离教师与现实——访柘荣县教师进修学校学前教育教研员袁秀芳

首先要树立务实观,即制订的计划内容一定是针对班级实际问题的,具有可操作性,在日常执行的时候才具有可观可感的实效性;其次要有整体观,班级计划与园务计划及各部门、各阶段计划相关联,牵一发而动全身,让班级计划与其他计划并肩而行,不可或缺;最后要有民主观,幼儿园实行民主管理,全园参与制订计划,让计划成为老师自己的计划,发挥主观能动性,而不是被动地执行计划。

非洲猪瘟病毒荧光定量PCR检测方法的建立

为建立一种快捷高效的非洲猪瘟病毒(ASFV)的检测方法,本研究根据GenBank中登录的ASFV B646L基因保守区序列设计引物和探针,通过优化PCR反应体系和反应条件,建立了非洲猪瘟Taqman荧光定量(ASFV-qPCR)检测方法,验证其特异性、灵敏性和重复性。结果显示:本研究所建立的检测方法特异性强,与猪瘟病毒(CSFV)、猪伪狂犬病病毒(PRV)、猪圆环病毒(PCV)、猪细小病毒(PPV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)均无交叉反应;灵敏度高,能检出10拷贝阳性质粒DNA;重复性好,组内和组间重复试验变异系数均小于1.5%。本研究为非洲猪瘟快速诊断提供了有力技术支撑,为进一步开发ASFV多重荧光PCR检测技术奠定了坚实的基础。

胸膜肺炎放线杆菌分离株血清型的PCR鉴定和Apx毒素基因检测

旨在调查胸膜肺炎放线杆菌流行株的血清型及Apx毒素基因携带情况,采用PCR方法对APP分离株进行血清型鉴定和Apx毒素基因检测。结果表明,64个分离株分别被鉴定为2、5、7、8、12、15、19共7个血清型。7个血清型中发现12种不同的Apx毒力因子模式。毒力因子分析结果显示,同一血清型的不同菌株携带的Apx毒素基因存在差异,不同血清型的菌株也可能会携带相同模式的Apx毒素基因。本研究表明,血清8型胸膜肺炎放线杆菌是浙江省的优势血清型,血清19型菌株在国内首次被检测到。血清型与所携带的Apx毒素基因之间不存在必然联系。

奥司他韦联合头孢呋辛钠治疗急性上呼吸道感染患者的临床疗效

目的观察奥司他韦联合头孢呋辛钠治疗急性上呼吸道感染患者的效果。方法选取2022年3月—2023年3月厦门市第五医院收治的急性上呼吸道感染患者80例,经随机数字表法分为头孢组(n=40)与联用奥司他韦组(n=40)。头孢组予以头孢呋辛钠治疗,联用奥司他韦组在头孢组基础上给予磷酸奥司他韦胶囊,2组均用药5 d。比较2组临床疗效,临床症状改善时间,用药前与用药5 d后血清炎性因子(肿瘤坏死因子-α、白介素-6、C反应蛋白、白介素-17),不良反应。结果联用奥司他韦组总有效率高于头孢组(95.00%vs.75.00%,χ^(2)=6.275,P=0.012)。联用奥司他韦组退热时间及咳嗽、咽部充血、咽痛消失时间短于头孢组(P<0.05或P<0.01)。用药5 d后,2组血清肿瘤坏死因子-α、白介素-6、C反应蛋白、白介素-17水平低于用药前,且联用奥司他韦组低于头孢组(P<0.01)。联用奥司他韦组与头孢组不良反应总发生率比较,差异无统计学意义(7.50%vs.12.50%,χ^(2)=0.139,P=0.709)。结论奥司他韦联合头孢呋辛钠治疗急性上呼吸道感染患者的效果显著,可加快患者症状消失,减轻机体炎性反应,且不会增加不良反应发生风险,安全性较高。

猪传染性胸膜肺炎放线杆菌APX Ⅱ基因特异片段的克隆和表达

将猪传染性胸膜肺炎放线杆菌APXⅡ的一段毒素基因克隆到原核表达载体pET-28a(+)的多克隆位点中,经鉴定后得到重组质粒pET-APXⅡ,并将其转化到受体菌BL21中,诱导剂IPTG进行诱导表达,4 h后达到高峰。经12%SDS-PAGE电泳检测,表达得到的融合蛋白大小约为31 kD。经Western blotting分析,表达蛋白能与APP阳性血清发生特异性反应,而与阴性血清不反应,说明该表达蛋白具有免疫原性,这为下一步用此表达蛋白作为抗原,对APP进行诊断试剂的研制和基因工程疫苗的研究提供科学依据。

一步法CSFV和PRRSV双重实时荧光定量RT-PCR诊断方法的建立与初步应用

根据猪瘟病毒(CSFV)和猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的序列,分别设计了1对特异性引物和1条Taq Man探针,建立了一步法检测CSFV和PRRSV双重实时荧光定量RT-PCR方法。结果表明,建立的方法特异性高,与PCV2,PRV,PPV,PEDV,JEV,BVDV无交叉反应;可以检出20个拷贝数的模板RNA,比常规RT-PCR方法的灵敏度高10倍;对同一样品进行4次重复试验,变异系数(CV)低于4%,方法重复性好。应用建立的荧光定量RT-PCR和常规RT-PCR对50份疑似病例组织进行检测,结果荧光定量RT-PCR检出30份PRRSV阳性,13份CSFV阳性,均高于常规RT-PCR方法的检出数(24份PRRSV阳性,10份CSFV阳性)。本研究建立的双重实时荧光定量RT-PCR方法具有快速、特异性好、灵敏度高的特点,可用于PRRSV和CSFV的实验室快速诊断和流行病学调查。

护理人员发生针刺伤的现状及其防护

针刺伤是目前护理工作中最常见的职业性伤害,护士是医务人员中发生针刺伤的高危人群,护士职称的差异对针刺伤发生存在着影响,护士最易发生针刺伤的操作环节为回套针帽。针对护理人员发生针刺伤的现状提出防护措施。

利用Real-time PCR对外周血白细胞中EIAV前病毒及血浆中病毒RNA含量的测定

利用Real_timePCR和Real_timeRT_PCR方法对马传染性贫血病(EIA)驴白细胞弱毒疫苗(DLA_EIAV)、DLA_EIAV感染性分子克隆衍生毒(vOK8226)、强弱毒嵌合病毒(vOKVltr)以及EIA强毒接种马后不同时期外周血白细胞中前病毒含量及血浆中病毒含量进行了监测,结果发现直接攻击强毒的2匹马及1匹接种vOK8226后再用强毒攻击的马血浆中病毒含量快速升高,伴随着明显的临床反应,最后均以死亡结束。其它免疫接种马在攻击强毒后均获得保护,没有发病,马血浆中有低水平病毒存在,攻毒后3个月血浆中检测不到病毒,说明感染马体内病毒的大量增殖与疾病的进程有着直接的关系。而外周血白细胞中前病毒的含量在各试验马各时期均能检测到,说明EIAV以前病毒的形式潜伏在感染马体内,疫苗的免疫只能控制发病,而不能清除感染的病毒。

猪胸膜肺炎放线杆菌apx Ⅳ表达蛋白单克隆抗体的制备

将APP apx Ⅳ N端基因克隆于pET-28a载体中,转化大肠杆菌,并进行诱导表达。收获融合表达的apx Ⅳ蛋白,按50μg/只的剂量与等量弗氏佐剂乳化后,经腹腔接种BALB/C小鼠,免疫3次后,取其脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行融合,用apxⅣ表达蛋白作为包被抗原,通过间接ELISA方法筛选阳性克隆,获得了3株能稳定分泌抗apx Ⅳ蛋白抗体的杂交瘤细胞株,命名为4H3,1D11和4C1。亚型鉴定结果显示,3株单克隆抗体为IgG1型。经Western blot分析证实,3株杂交瘤细胞上清液能与apxⅣ表达蛋白特异反应。本研究获得的融合蛋白单克隆抗体为今后建立该菌的免疫胶体金诊断技术,分析apxⅣ蛋白的抗原表位等提供有益价值。

胶体金作为免疫佐剂的初探

利用柠檬酸三钠还原法制备胶体金，经扫描电镜观察，粒径大小为15～20nm。以牛血清白蛋白为指示抗原，以小白鼠为模式动物，设立弗氏完全佐剂和弗氏不完全佐剂作对比，探索胶体金作为免疫佐剂的可能性。试验结果显示，胶体金能够显著提高鼠体内抗牛血清白蛋白抗体的水平，其抗体水平高于弗氏不完全佐剂试验组，而略低于弗氏完全佐剂试验组。因此，胶体金有可能开发成为新一代免疫佐剂。

猪腹泻大肠杆菌LTa(R210G)和LTb原核表达及其在小鼠的免疫反应

大肠杆菌不耐热性肠毒素(LT)具有免疫增强作用,是良好的免疫佐剂。为了更好的研究其免疫增强效果,本研究将LT的两个亚基LTa(R210G)和LTb克隆到pGST中,原核表达LTa(R210G)和LTb,经Western-blotting分析,表达蛋白具有免疫原性。对表达蛋白进行大量纯化后,以卵清蛋白为模式蛋白(OVA)为模式蛋白,免疫小鼠,ELISA结果表明,OVA+LTa(R210G)佐剂组小鼠的抗体滴度最高,OVA+LTb和OVA+LTa+LT组抗体滴度相似,高于OVA+氢氧化铝组,而OVA+氢氧化铝组高于无佐剂OVA组。因此,LTa(R210G)和LTb具有良好的免疫增强作用,是一种极有希望的免疫佐剂。

感染性分子克隆衍生的马传染性贫血病毒的免疫学特性

将马传染性贫血病毒驴白细胞毒疫苗(DLA EIAV)、DLA EIAV感染性分子克隆衍生毒(vOK8226)以及强弱毒嵌合毒(vOKVltr)分别接种健康马,并于接种后第 220 d,用 EIAV强毒辽宁株(L EIAV)攻击,观察临床变化,并测定接种后各结构蛋白的抗体变化。结果发现,攻毒后,2匹非免疫对照马和克隆衍生毒接种组中的 1 匹马体温均出现典型的稽留热并死亡,死亡马呈现典型的马传染性贫血的病理组织学变化,其他免疫马未见任何临床变化;在攻毒后第 450 d剖杀所有存活马,也未见任何病理组织学变化。抗体检测结果表明,免疫接种后攻毒前各组 p11 和 p9 抗体均检测不到,嵌合毒接种组p15、p26和gp45抗体水平高于其他组。攻毒后非免疫对照马体内抗p9、p11、p15、p26和 gp45抗体均显著升高,并持续至死亡;嵌合病毒接种马体内各结构蛋白抗体水平与攻毒前没有显著变化,克隆衍生毒接种马体内各结构蛋白抗体水平比攻毒前有所升高。通过临床观察、病理组织学检测以及攻毒后各结构蛋白抗体记忆反应情况分析,置换了强毒 LTR 的DLA EIAV感染性分子克隆衍生毒(强弱毒嵌合病毒)免疫马能够抵抗马传染性贫血病毒强毒的攻击,获得完全保护,而DLA EIAV感染性分子克隆衍生毒免疫马未能完全抵抗强毒的攻击。

猪伪狂犬病病毒鲁A株的分离鉴定

从山东省某些猪场疑似猪伪狂犬病发病仔猪的脑及内脏中分离到多株病毒 ,对其中一代表毒株进行了全面鉴定。该分离毒株在兔肾原代细胞 ( RK)上和鸡胚成纤维细胞 ( CEF)上连传 5代 ,均出现典型细胞病变 ,再接种于 RK- 13细胞、BHK- 2 1细胞、Vero细胞、PK15细胞和 14 3TK- 细胞 ,均出现典型细胞病变 ;在 RK- 13细胞上的 TCID50 为10 - 6 .52 / 0 .1m L ;在电镜下可见到典型的伪狂犬病病毒粒子 ;对氯仿、乙醚敏感 ,5 6℃ 30 m in灭活 ;能被伪狂犬病病毒标准阳性血清中和 ;病毒接种于家兔和小鼠 ,均出现典型伪狂犬病症状与病变 ;提取所分离病毒的 DNA作为模板 ,应用特异性引物 ,以 PCR方法可扩增出伪狂犬病病毒 g D基因中 2 72～ 5 34nt之间 2 6 2 bp长的特异性片段。上述结果证明 ,所分离病毒为猪伪狂犬病病毒 ,并将其命名为猪伪狂犬病病毒鲁

2010—2013年浙江省猪流行性腹泻病毒临床检测及PEDV-S基因型分析

2010年以来,全国大部分地区暴发新生仔猪严重流行性腹泻,给养猪业造成巨大经济损失。为分析猪流行性腹泻病毒(PEDV)在浙江省的流行和遗传变异情况,对2010—2013年收集的临床腹泻样品,以针对PEDV-S基因N端序列的RT-PCR检测病原,并测序其中的41份样品的扩增序列,分析PEDV-S1基因型变异情况。临床检测结果表明:PEDV临床检出率由2010年的42.86%提高到2013年的70%以上,并且浙江省各地的检出率都在50%以上;一年中7至8月份检出率明显降低。PEDV-S1基因N端序列分析结果表明,临床检测株的S1基因与传统毒株PEDV CV777的S基因序列及中国最早检测到的基因序列亲缘关系较远,可能浙江省PEDV的流行株可能属于一个新的基因型。同时研究结果提示PEDV-S基因的变异可能是现有CV777毒株疫苗免疫保护力不佳的原因。

国外抗冲共聚聚丙烯结构的研究

利用升温淋洗分级柱、核磁共振波谱仪、差示扫描量热仪、凝胶渗透色谱仪和扫描电子显微镜等研究了国外抗冲共聚聚丙烯(PP)的组成、序列结构、相对分子质量及其分布、热转变、相态结构和宏观性能。结果表明,该抗冲共聚PP由均聚PP、乙丙橡胶和可结晶的乙丙共聚物组成,具有优良的机械性能;均聚PP为抗冲共聚物提供刚性,乙丙橡胶可提高抗冲共聚物的韧性;抗冲共聚物的相对分子质量呈多分散性,其分布较宽;乙丙橡胶的相对分子质量较大,以直径为1～2μm的微粒均匀分布在PP基体中,有利于提高抗冲共聚物的冲击强度;抗冲共聚物的熔点较高,耐热性好。

猪传染性胸膜肺炎放线杆菌ApxⅣ毒素基因的克隆与表达

以猪传染性胸膜肺炎放线杆菌(APP)血清2型标准菌株基因组DNA为模板,用PCR方法扩增ApxⅣ毒素基因特异片段1.5 kb左右,将PCR产物纯化后与pMD18-T连接并测序,结果该片段的碱基序列与GenBank中标准株序列的同源性为98%。随后将该片段亚克隆到原核表达载体pET-28a(+)的多克隆位点,经鉴定后得到重组质粒pET-ApxⅣ,将此重组质粒转化到受体菌BL21-DL3中,并用诱导剂乳糖进行诱导表达,5 h后表达达到高峰。经12%SDS-PAGE电泳检测,表达得到的融合蛋白约为61 000。经Western blotting分析,表达蛋白能与APP阳性血清发生特异性反应,而与阴性血清不反应。

针刺联合支持性心理干预在精神分裂症患者中的前瞻性研究

目的 探讨针刺联合支持性心理干预在精神分裂症患者中的应用效果。方法 选取2020年10月—2021年10月于九江市第五人民医院收治的82例精神分裂症患者,分为对照组和观察组,采用随机数字表法对其进行分组,各41例。予以对照组患者进行维持原有常规抗精神病药物治疗联合支持性心理干预,并在以上对照组的基础上,予以观察组患者针刺治疗,12周为2组患者的治疗周期。对比2组患者治疗前后PANSS评分、MCCB、WCST、PSQI评分、生活各领域评分,治疗期间不良反应发生情况。结果 与治疗前相比,治疗后2组PANSS阳性因子、PANSS阴性因子、PANSS一般精神病理因子、PANSS总分、PSQI量表评分均降低,且较对照组相比,观察组更低;2组MCCB、WCST评分、生活各领域各项评分以及总分均升高,且较对照组相比,观察组更高;治疗期间,观察组不良反应总发生率低于对照组(均P<0.05)。结论 精神分裂症患者采用针刺联合支持性心理干预可有效改善其阴性与阳性症状,提高患者的生活质量、睡眠质量、执行能力和认知功能,还可降低患者治疗期间的不良反应发生率。

PCR结合分子杂交法检测鸡传染性支气管炎病毒

利用逆转录－ＰＣＲ（ＲＴ－ＰＣＲ）特异性扩增鸡传染性支气管炎病毒（ＩＢＶ）基因组中Ｍ基因和Ｎ基因之间一段核酸片段。以ｐＵＣ１９质粒载体将此片段克隆，用ＥｃｏＲＩ和ＨｉｎｄⅢ酶切此重组质粒，回收克隆片段后，制成生物素标记的核酸探针。用ＲＴ－ＰＣＲ及生物素核酸探针法分别对ＩＢＶ，ＩＢＤＶ，ＩＬＴＶ，ＭＤＶ及ＮＤＶ进行检测，结果证明该方法为ＩＢＶ特异性检测方法。对人工感染ＩＢＶ的ＳＰＦ鸡口腔棉拭样品进行跟踪检测，证明本方法能在ＳＰＦ鸡接毒后１～１０ｄ内检出ＩＢＶ。

浙江地区猪圆环病毒2型检测及遗传变异分析

为了掌握浙江地区猪圆环病毒2型(porcine circovirus type 2,PCV2)流行病学特点和遗传变异情况,应用PCR检测方法,对2018年浙江地区猪场采集的临床疑似病料进行PCV2检测,并对部分阳性病料进行全基因扩增、克隆、序列测定和ORF 2遗传进化树分析。结果显示:329份临床疑似样品中,PCV2阳性率27.4%(90/329),其中宁波地区阳性率最高,为52%;保育猪和肥育猪阳性率最高,分别为38.8%(64/165)和68.8%(11/16)。选取7份病料进行全基因组扩增,每个毒株随机挑选3个或4个阳性克隆进行序列测定,共得到22个毒株进行遗传变异分析。22株病株同源性为93.3%~99.8%,与16个参考毒株同源性为93.5%~99.8%。根据遗传进化树分析,22个毒株分别处于3个分支,其中6株PCV2a,6株PCV2b,10株PCV2d,说明目前浙江地区PCV2d是优势毒株。ORF 2遗传进化树分析显示,ORF 2核苷酸同源性较全基因组核苷酸同源性低,3个分支分别处于PCV2b、PCV2d和PCV2e,预示浙江地区流行毒株可能在向PCV2e转变。本研究掌握了PCV2在浙江地区的流行动态,为浙江省PCV2疫苗株的选择和疫苗研发提供了理论依据。