申克孢子丝菌SPDS基因的生物信息学分析及分子克隆

[目的]分析预测申克孢子丝菌cDNA中编号为Locus_ 168_Contig_1序列编码的基因及蛋白质结构、功能特征,并进行分子克隆.[方法]利用NCBI及Expasy网站提供的BLASTx、SignalIP、InterPro Scan等生物信息学软件分析其序列,判断其是否为全长编码序列、同源序列名称,并分析其结构、定位及功能等;将其中的全长编码区利用PCR方法进行扩增后克隆到pET-30a（＋）载体,测序验证.[结果]该序列是亚精胺合成酶（SPDS）的同源基因,全长序列为1062 bp,包含完整的编码区190 ～1 062 bp,编码291个氨基酸,在GenBank中,其与粗糙脉孢菌的SPDS基因同源性最高,达88％.理化性质预测其编码蛋白疏水性高;无质体、线粒体等定位序列,不存在跨膜螺旋结构,为非分泌型蛋白.进化树分析结果显示与粗糙脉孢菌同源性最高;PCR扩增及测序结果证实目的基因成功克隆进入pET-30a（＋）质粒.[结论]获得申克孢子丝菌SPDS的基因及蛋白结构、功能特点,构建了其重组表达质粒,将为进一步明确其在孢子丝菌病中的致病作用奠定理论基础.

2008年版美国临床实验室标准化委员会产孢丝状真菌药敏试验方案简读

美国临床和实验室标准化委员会（Clinical Laboratory and Stardards Institute，CLSI，原名NCCLS）于2003年出版了关于产孢丝状真菌的液体培养基稀释法（微量法与多量法）抗真菌药物敏感性试验方案M38一A…，规范了不包含皮肤癣菌在内的丝状真菌的药敏试验条件，如接种量、孵育周期、孵育温度、培养基配方和MIC判定标准等。

Sharpin蛋白在寻常型银屑病皮损内的表达及其与PASI评分关系的研究

目的:探讨Sharpin蛋白在寻常型银屑病皮损内的表达及其与PASI评分的关系。方法:采用实时荧光定量PCR及免疫组织化学方法检测Sharpin在寻常型银屑病及正常皮肤内的表达,并探讨其与临床病理特征的关系。结果:Sharpin mRNA在寻常型银屑病皮损内较正常皮肤内表达明显升高,两者差异有统计学意义(t=0.03,P<0.05);免疫组化结果提示Sharpin蛋白在寻常型银屑病皮损内高表达,且在寻常型银屑病皮损内的阳性表达率高于正常皮肤组织,平均染色得分亦高于正常皮肤(P值均<0.05)。此外,Sharpin蛋白表达与治疗前寻常型银屑病PASI评分呈正相关(r=0.83,P<0.05)。结论:Sharpin蛋白可能参与了银屑病发病机制,对提示银屑病病情及预后可能具有一定的意义。

类几丁质酶3蛋白1在申克孢子丝菌刺激巨噬细胞的表达和作用研究

目的探讨巨噬细胞类几丁质酶3蛋白1在申克孢子丝菌刺激后的表达和作用研究。方法通过测定巨噬细胞与申克孢子丝菌共孵育时杀菌率,使用实时荧光定量PCR检测不同时间点巨噬细胞的类几丁质酶3蛋白1mRNA表达水平,同时体外实验检测类几丁质酶3蛋白1对申克孢子丝菌的抑菌作用,同时采用空白对照和白念珠菌阳性对照比较两者的差异。结果巨噬细胞可吞噬杀灭申克孢子丝菌分生孢子,也可吞噬阳性对照白念珠菌酵母相细胞。巨噬细胞类几丁质酶3蛋白1mRNA表达水平在申克孢子丝菌组和空白对照组无明显差别,作用于阳性对照的白念珠菌组的巨噬细胞类几丁质酶3蛋白1mRNA表达水平明显上调。体外实验显示类几丁质酶3蛋白1对申克孢子丝菌分生孢子的无明显抑制作用,对白念珠菌繁殖却有较强的抑制作用。结论申克孢子丝菌未能诱导巨噬细胞表达类几丁质酶3蛋白1抑制其增殖从而逃逸清除,而白念珠菌感染可上调巨噬细胞类几丁质酶3蛋白1表达从而抑制其增殖减轻感染,这可能是申克孢子丝菌特有的致病作用机制之一。

白念珠菌与LDH抗体的交叉免疫研究

目的识别白念珠菌苹果酸脱氢酶(Candida albicans malate dehydrogenase,CaMDH)保守表位结构。方法本研究利用生物信息学方法,预测CaMDH的结构、功能和进化关系,并选取同源序列中与CaMDH序列一致性较低的日本血吸虫乳酸脱氢酶(Schistosoma japonicum lactate dehydrogenase,SjLDH)免疫血清与白念珠菌总蛋白进行交叉免疫反应。结果发现CaMDH与常见病原生物的同源序列一致性可达43%,其中与SjLDH一致性最低(18.2%)。CaMDH具有乳酸脱氢酶保守区域,7个主要的B细胞表位,其中3处与SjLDH表位相似。苹果酸脱氢酶活化点包含于NAD(P)结合部分中。白念珠菌总蛋白与SjLDH免疫血清交叉免疫反应阳性。结论交叉免疫反应阳性提示识别结合位点为LDH/MDH同源序列高度保守的表位结构,为进一步从高度保守的抗原决定簇中筛选真菌疫苗表位、诊断特异抗体、抗真菌药物治疗靶点提供了实验基础。

申克孢子丝菌翻译控制肿瘤蛋白的结构分析与功能预测

【目的】从cDNA文库中识别申克孢子丝菌翻译控制肿瘤蛋白(TCTP)的基因并分析预测其结构功能和应用前景。【方法】利用NCBI和ExPASy网站中的各种基因和蛋白的序列结构信息分析工具,结合DNAstar和VectorNTI suite生物信息学分析软件包,从申克孢子丝菌全长cDNA质粒文库中识别TCTP的基因及其编码区,分析、预测该基因编码的蛋白结构特征和功能。【结果】TCTP基因全长621 bp,编码区具有207个氨基酸。在GenBank同源序列中,其与蓝菌属真菌(Grosmannia clavigera)TCTP氨基酸序列一致性达到78%。理论预测分子质量为64581.4 ku。无质体和线粒体定位序列。预测结果显示编码蛋白含有1个跨膜区、7个亲水性部位和5个主要B细胞表位。与蓝菌属真菌及球毛壳霉(C.globosum)的TCTP进化关系最近。【结论】应用生物信息方法筛选出申克孢子丝菌TCTP的cDNA全长序列并预测其结构与功能、潜在抗原表位,为进一步实验研究该蛋白生物学特性提供了依据。

原发性皮肤间变性大细胞淋巴瘤1例并临床分析

原发性皮肤间变性大细胞淋巴瘤是临床少见的一种皮肤肿瘤。其临床特征为原发于老年人皮肤的红色结节或肿瘤,病理特征为CD30阳性大细胞的大量表达(>75%)。治疗采用减量CHOP方案,效果明显。

一株致面部感染的灰黄青霉的形态学观察

目的:明确一株致面部感染的灰黄青霉的形态学特征。方法:使用SDA培养基对灰黄青霉进行大培养,观察其菌落特征;使用玻片法对灰黄青霉进行小培养,制作扫描电镜样本后观察其微观形态特征。结果:此株灰黄青霉的菌落呈灰绿色至深褐色,接种后5天菌落直径为1～1.5 cm,表面可见大量的放射状皱纹,中心有脐状突起;质地呈绒状,带轻微絮状,在边缘面上的颗粒状通常更为突出;边缘可见淡黄色色素环;菌落反面呈乳黄色,质地平滑,表面可见放射状皱褶。扫描电镜显示分生孢子梗长,孢梗茎表面粗糙。帚状枝复杂,瓶梗呈瓶状,梗基顶端无膨大,分生孢子链较长,排列成圆柱状,可弯曲,分生孢子呈圆形或宽椭圆形,孢壁粗糙。结论:此株灰黄青霉的形态特征与野生株基本相符。

Gadd45a基因在寻常型银屑病皮损中的表达及意义

目的:检测寻常型银屑病皮损中生长阻滞和DNA损伤基因(Gadd45a)mRNA的表达水平及Gadd45a蛋白在皮损中的表达部位,探讨其在寻常型银屑病角质形成细胞异常增殖中的作用。方法:收集20例寻常型银屑病患者的皮损及20例健康对照皮肤组织,RT-PCR法检测Gadd45a mRNA的表达水平,采用免疫组化法检测Gadd45a蛋白的表达部位,并进行比较。结果:RT-PCR结果显示,与健康对照皮肤比较,寻常型银屑病皮损中Gadd45a mRNA的相对表达量为4.51±1.57,差异有统计学意义(P<0.05);免疫组化结果显示Gadd45a蛋白主要表达于表皮角质形成细胞的胞浆中,在寻常型银屑病病皮损的角质形成细胞中为棕黄色颗粒,在健康对照皮肤角质形成细胞中为阴性或者偶见。结论:Gadd45a的高表达可能在寻常型银屑病皮损角质形成细胞的良性异常增殖中发挥了重要作用。

翻译控制肿瘤相关蛋白

翻译控制肿瘤相关蛋白在细胞内和细胞外均起作用。它在翻译和转录水平受到胞外的各种信号调控,在肿瘤、凋亡、免疫等多个方面发挥重要作用。本文对该蛋白的结构组成、生物功能、受调控的机制等方面进行综述。

光滑念珠菌Cdc42基因生物信息分析

目的:分析和预测光滑念珠菌Cdc42基因及其编码蛋白的结构和特性。方法:利用NCBI、ExPASy和CBS网站中的各种信息分析工具,并结合Vector NTI suite 8.0生物信息学分析软件包,分析预测光滑念珠菌Cdc42基因并预测该基因编码蛋白结构的特征和功能。结果:Cdc42基因全长为576 bp,编码区具有191个氨基酸,在GenBank同源序列中,其与酵母Cdc42氨基酸序列一致性达到99%,且有Cdc42保守域。Cdc42蛋白相对分子量预测为21 420.83,理论等电点为6.31。预测Cdc42编码蛋白ɑ螺旋(H)、β折叠(E)、无规则卷(L)的比例分别是29.84%、28.70%、41.88%,1个GTP/ATP结合位点。Cdc42蛋白为疏水蛋白,无跨膜区,无信号肽。结论:成功预测Cdc42基因及编码蛋白生化及结构特征,为下一步对其进行克隆和表达奠定基础。

IL-36γ与IL-38的表达失衡可能与寻常型银屑病的炎症程度相关

目的探究细胞因子IL-36γ、IL-38在寻常型银屑病炎性反应中的作用。方法收集29例寻常型银屑病(PV)患者(包括轻中度14例,重度15例)及19例正常对照者血清及外周血单个核细胞(PBMC),使用ELISA法检测血清中IL-36γ及IL-38表达量,RT-qPCR检测PBMC中IL-36γ及IL-38 mRNA相对表达水平。收集12例使用IL-17A单抗治疗的银屑病患者血清及PBMC,检测IL-17A单抗治疗前及治疗4周后血清及PBMC中IL-36γ、IL-38表达水平。将IL-17A与HaCaT细胞共培养,在不同时间点收集细胞,通过RT-qPCR检测HaCaT细胞中IL-36γ、IL-38 mRNA表达水平变化。结果轻中度及重度PV患者血清IL-36γ表达水平均显著高于对照组(t值分别为12.27、16.45,均P<0.001),血清IL-38表达水平均显著低于对照组(t值分别为5.83、7.61,均P<0.001)。PV患者外周血PBMC中,IL-36γmRNA表达高于对照组,IL-38 mRNA表达低于对照组,差异均有统计学意义(均P<0.01)。使用IL-17A单克隆抗体治疗4周后:患者血清IL-36γ表达水平显著降低(t=3.24,P=0.004),IL-38表达水平显著升高(t=3.36,P=0.001);PBMC中IL-36γ及IL-38 mRNA表达水平具有相同趋势。IL-17A刺激致使HaCaT细胞IL-36γ表达水平出现增高,而IL-38表达水平降低。结论寻常型银屑病患者外周血中促炎因子IL-36γ表达明显增高,而抑炎因子IL-38表达明显受到抑制;IL-17A单克隆抗体治疗可在一定程度上逆转IL-36γ及IL-38表达水平,提示IL-36γ及IL-38可能在银屑病慢性炎症中发挥重要作用,且可能是作为协助评估银屑病患者病情严重程度以及银屑病生物制剂治疗疗效的重要血清学标记物。

苯扎氯铵消毒液引起的相关皮炎的临床及病理特征:附7例报告

目的分析7例苯扎氯铵消毒液引起的皮炎病例的临床表现及组织病理特征,增强对该病的认识。方法收集2022年8—11月至南方医科大学皮肤病医院就诊的7例因接触苯扎氯胺消毒液引起的相关皮炎患者资料,对其临床表现及病理资料进行回顾性分析。结果7例患者临床表现为间擦部位皮肤反复环状红斑、脱屑。4例完成组织病理检查,均可见海绵形成、棘层肥厚、真皮浅层血管周围炎,其中2例可见表皮及真皮中性粒细胞聚集。治疗上避免再次接触苯扎氯铵消毒液,系统应用糖皮质激素及环孢素。结论苯扎氯铵消毒液引起的皮炎表现特异,治疗效果佳,确诊需进一步完善斑贴试验。

非布司他引起药疹1例

非布司他是一种新型非嘌呤类黄嘌呤氧化酶(XO)选择性抑制剂,通过降低血尿酸盐浓度发挥作用。研究认为非布司他在治疗痛风方面较别嘌醇相比具有良好的疗效及安全性,目前较少由非布司他引起的药疹病例。本文报道了1例口服非布司他3天后出现药疹的痛风患者,对患者进行HLA-B*5801检测,提示HLA-B*5801等位基因(+),表明非布司他及别嘌醇不存在交叉过敏,使用非布司他前检测HLA-B*5801可能对不良反应发生有提示意义。

白细胞介素37的免疫学研究进展

IL-37是白介素1家族新发现的成员,可在多种免疫细胞中表达,在固有免疫阶段及适应性免疫阶段均被证实发挥重要的抗炎作用。目前认为与多种内毒素血症、缺血性损害、肝炎等疾病及多种自身免疫性疾病的发展过程及严重程度密切相关,但其抗炎作用的具体机制目前尚未完全明确。本文将对IL-37的分类、分布、结构、作用机制、生物学效应、与疾病关系、表达调控等作一综述。

复方倍他米松注射液致过敏性休克1例

报告1例肌肉注射复方倍他米松注射液致过敏性休克的病例。患者男,26岁,因"全身红斑、脱屑伴痒2月余"入院,初步诊断:1.药疹?2.成人特应性皮炎?予复方倍他米松注射液抗过敏治疗,5分钟后患者出现头晕、烦躁、血压下降等过敏性休克的表现,予常规抗过敏性休克的急救措施治疗后,患者休克得以纠正。医护人员应注意患者个体因素的复杂性,对于高度敏感或有药物过敏史的患者,在诊治中应提高警惕,防患于未然。

Wnt5a、Sfrp5水平与寻常型银屑病及肥胖的相关性分析

目的:探讨Wnt5a、Sfrp5水平与寻常型银屑病及肥胖的关系。方法:收集正常人和寻常型银屑病血浆,分为非肥胖正常人组、肥胖正常人组、非肥胖银屑病组和肥胖银屑病组,每组各20例。采用ELISA检测血浆Wnt5a及Sfrp5水平,比较组间血浆Wnt5a及Sfrp5水平并作相关分析。结果:与非肥胖正常人组血浆Wnt5a水平(0.082±0.054)ng/m L比较,非肥胖银屑病患者[(0.105±0.049)ng/m L]和肥胖银屑病患者[(0.320±0.155)ng/m L]血浆Wnt5a水平明显升高(P值均<0.01),肥胖正常人群组[(0.105±0.049)ng/m L]无明显改变。非肥胖正常人组血浆Sfrp5水平为(75.11±19.72)ng/m L,肥胖正常人组[(55.85±13.65)ng/m L]、非肥胖银屑病组[(58.09±16.78)ng/m L]及肥胖银屑病组[(52.21±15.72)ng/m L]血浆Sfrp5水平较其降低(P值均<0.05)。结论:Wnt5a及Sfrp5可能与寻常型银屑病及肥胖发生发展相关,是联系银屑病和代谢综合征之间的重要介质。

银屑病慢病管理模式的建立

银屑病因其反复发作、无法根治的特点,成为皮肤科重点防治的一种慢性疾病。目前,我国银屑病慢病管理模式的开展缺乏理论和经验支持,尚处于摸索阶段。为提高银屑病患者的管理效率,规范诊疗过程,本研究就南方医科大学皮肤病医院银屑病一站式慢病管理模式的建立进行初步探讨,期望为我国银屑病的诊疗和护理提供参考策略,也为临床和科研提供优势平台。

一般型皮肤异色病样淀粉样变11例分析

目的:分析一般型皮肤异色病样淀粉样变(PLCA)的临床特点。方法:收集总结我院11例经组织病理确诊的一般型皮肤异色病样淀粉样变患者的临床资料(病史、皮损特点、治疗及转归等)进行分析。结果:11例均为成人期发病。首发部位均在四肢,9例日晒后加重,7例伴有苔藓样丘疹,3例伴有水疱,3例有家族史。结论:在临床中,表现为皮肤异色、苔藓样丘疹,首发于四肢,无智力低下和身材矮小,需考虑一般型PLCA的可能。

移动医疗APP对管理生物制剂治疗银屑病的效果

目的评价移动医疗APP对生物制剂治疗银屑病患者慢病管理的效果。方法纳入2020年6—9月期间在南方医科大学皮肤病医院银屑病专病门诊,经筛查适宜使用生物制剂治疗并有意愿使用的银屑病患者201例,随机分为APP随访组101例,非APP随访组100例,按生物制剂疗程治疗,观察随访1年,1年后对患者满意度进行问卷调查,比较使用移动医疗APP和不使用APP的患者PASI改善情况、满意度情况及随访依从性差异。结果与非APP随访组比较,使用APP管理的患者对APP相关的门诊诊疗环节(挂号、签到、门诊)等满意度评分升高(均P<0.05),依从性提高(χ^(2)=23.78,P<0.01),PASI评分降低(1.23±1.29比7.14±1.76,t=14.63,P<0.05),且PASI改善程度增高(93.11%比59.34%)。结论通过移动医疗APP管理银屑病患者,优化多个门诊就诊环节,可提高患者就诊体验及满意度,加强患者健康教育及随访管理,有助于提高患者依从性,对银屑病管理有积极作用。