结缔组织生长因子与LPS致肝纤维化的关系

目的 :研究结缔组织生长因子 (CTGF)表达水平与LPS致大鼠肝纤维化的关系。方法 :体外培养条件下 ,LPS处理大鼠肝星状细胞 (HSC) ,半定量RT -PCR方法检测不同时点不同LPS浓度处理的HSCFNmRNA和CTGFmRNA的表达水平。结果 :LPS不仅短时间内即能上调HSCFNmRNA和CTGFmRNA表达 ,而且LPS与CT GFmRNA的表达量呈一定的剂量效应关系。恒定LPS作用浓度 (1μg/ml)下 ,CTGFmRNA的表达水平随LPS作用时间的增加而增加 ,LPS作用 2 4h- 4 8h后CTGFmRNA的表达水平最高。结论 :LPS是一个重要的致纤维化因素 ,可同时上调HSC的FNmRNA和CTGFmRNA表达。

CD1小鼠动脉导管Kca mRNA表达情况研究

目的 研究高电导钙离子激活的钾通道 (Kca)mRNA在妊娠晚期胎鼠和新生CD1小鼠动脉导管(DA)上的表达情况 ,以期阐明Kca在小鼠DA关闭调控方面的作用。方法 采用逆转录聚合酶链反应 (RT PCR)和Southern杂交方法 ,检测了经剖宫产分娩的妊娠d1 7、d1 8和d1 9CD1胎鼠 ,以及自然产d1新生小鼠DAKcamRNA的表达情况。结果 KcamRNA表达于胎鼠DA ,以d1 9表达水平最高 ,但新生小鼠DA无KcamR NA表达。结论 KcamRNA在胎鼠DA有表达 ,但出生后无表达 ,提示在宫内低氧环境中Kca可能是维持DA开放状态的一个重要因素 。

左向右分流容量负荷过重大鼠血红素氧化酶的表达及氯沙坦对其的影响

目的探讨容量负荷过重大鼠及氯沙坦治疗后肺动脉高压肺血管重建与血红素氧化酶(HO)mRNA表达水平的关系。方法行左向右分流术建立容量负荷过重SD大鼠模型并给予氯沙坦治疗,分别测定实验各组肺动脉压、右心室压等血流动力学指标;计算右心室相对重量;体视学方法测定肺小动脉厚度百分比和肌性化小动脉百分比;逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)测定大鼠肺组织、左右心室HO-1、HO-2mRNA的表达。结果氯沙坦能显著减低肺动脉压力,使右心室相对重量降低,氯沙坦组肺小动脉厚度百分比和肌性化小动脉百分比均较手术组明显下降。手术组HO-1mRNA表达较对照组显著增高,而氯沙坦组HO-1mRNA表达水平较手术组明显降低,HO-2mRNA表达在三组间差异无统计学意义。结论氯沙坦能显著降低容量负荷过重大鼠的肺动脉高压,抑制肺血管重构程度,同时可下调HO-1mRNA的表达。HO-1参与了肺动脉高压形成、肺血管重构的病理过程。

儿童缺铁性贫血发病和贫血程度的危险因素分析

目的分析儿童缺铁性贫血发病、贫血程度的危险因素。方法回顾性分析我院儿科2000年1月至2006年3月收治的114例儿童缺铁性贫血患儿的临床资料。结果本组缺铁性贫血患儿中婴幼儿占76.31%,农村患儿占58.77%,城市患儿占41.23%,母乳喂养但未按时添加辅食者占64.04%。住院病例中有合并症者占82.46%,合并感染者占50.00%,呼吸道感染者占80.70%。单因素分析显示年龄、居住地、喂养方式及病程与贫血程度有关;多因素分析显示,1岁以内的小儿、病程1～3月是贫血程度的危险因素。结论缺铁性贫血高发于婴幼儿,农村儿童较城市儿童多见,母乳喂养但未按时添加辅食者较人工喂养、混合喂养者多见,贫血程度与年龄、病程关系密切。针对高危人群、危险因素预防和早期诊断有重要意义。

196例传染性单核细胞增多症的并发症和实验室检查

目的 总结传染性单核细胞增多症 (传单 )患儿的并发症与实验室检查特点 ,利剩于减少临床漏诊与误诊。方法 回顾性分析 1999年 1月～ 2 0 0 0年 12日我院收治 196例传单患儿并发症的发生情况和实验室检查特点。结果 本组 83%病例发生于 7岁以下儿童 ,并发症发生率 80 % ,尤以肝脏损坏最常见。眼睑水肿发生率 19.8% ,是传单常见的一种临床表现。并发症累及 2个或 2个以上系统占 2 1% ,而发生中枢系统并发症或多器官系统损坏者预后不良。变异淋巴细胞比例增高见于 90 %以上病例 ,其是诊断传单简便有效的筛查手段 ,但其增高程度与疾病的病情和预后无关。EBV VCA IgM的阳性率与病程、年龄等因素有关。 结论 尽管大多数传单呈良性临床经过 ,且多具有较典型的临床表现 ,但本病并发症常见且多样 ,可累及多种器官、系统 ,影响疾病的转归和预后。对EBV VCA IgM阴性而临床高度怀疑该病病例可采用EBV抗原原位杂交或PCR扩增技术协助诊断。因此 。

c-sis反义寡核苷酸对肺血管平滑肌细胞增殖和细胞周期的影响

目的 :探讨从血小板源生长因子 -B链 (PDGF -B)的基因水平阻断对肺血管平滑肌细胞增殖的影响。方法 :给肺动脉平滑肌细胞 (VSMC)分别施加不同剂量的c -sis癌基因反义寡核苷酸 (ASON) ,通过四甲基偶氮唑蓝 (MTT)法观察细胞不同时相的增殖曲线 ;采用流式细胞术观察不同干预条件下VSMC细胞周期的变化。结果 :中、大浓度ASON对细胞增殖有明显抑制作用。在中浓度的ASON作用下 ,加入PDGF -BB能促进VSMC的增殖。ASON干预前后 ,VSMC增殖周期中各期细胞构成发生显著的变化 ,以G0 +G1期细胞增多、S +G2 +M期细胞减少为特征。各组的G0 +G1期细胞均显著多于对照组 (P <0 0 5 )。小剂量与中剂量、中剂量与大剂量间G0 +G1期细胞有显著差异 (P <0 0 5 )。结论 :中、大剂量ASON能明显抑制肺VSMC的增殖 ,可使G0 +G1期细胞数明显增多 。

贫血患儿血清生长分化因子15水平及其鉴别重型β地中海贫血的临床意义

目的研究不同类型贫血患儿血清生长分化因子15（GDF15）水平及其与贫血程度、红系造血、铁代谢的相关性,以及在重型β地中海贫血（SBT）鉴别中的临床价值。方法入选85例不同类型的贫血患儿,包括缺铁性贫血（IDA）19例,慢性病贫血（ACD）8例,再生障碍性贫血（AA）24例,重型β地中海贫血（SBT）17例,非SBT溶血性贫血（nonSBT HA）17例,另选21例健康体检儿童为对照组;采用ELISA方法测定血清GDF15水平,并分析其与血红蛋白（Hb）水平、网织红细胞参数和铁代谢指标的相关关系,ROC曲线分析血清GDF15水平对于儿童SBT的诊断价值。结果各贫血亚组和对照组之间血清GDF15水平的差异有统计学意义（H=56.75,P〈0.001）。除ACD外,其他贫血亚组的血清GDF15水平均高于对照组,SBT组GDF15水平均高于对照组和其他贫血亚组,差异有统计学意义（P’〈0.003）,其中SBT组患儿血清GDF15中位浓度为对照组的28倍。贫血患儿GDF15与Hb水平呈显著负相关（rs=–0.429,P〈0.01）。贫血患儿GDF15水平与网织红细胞比例、网织红细胞绝对计数、RI和RPI显著正相关（rs=0.264-0.375,P均〈0.05）。贫血患儿GDF15水平与SF、SI和TS均显著正相关（rs=0.473-0.717,P均〈0.01）;与Tf和TIBC呈负相关（rs=–0.345、–0.349,P均〈0.05）。血清GDF15水平诊断重型β地中海贫血的ROC曲线下面积（AUC）为0.969（95%CI：0.937-1.0;P〈0.01）,如以血清GDF15浓度5 000 pg/ml作为截断值,诊断SBT的特异度为98.5%。结论血清GDF15水平显著升高是SBT患儿极为显著的血液生化特征,可能与骨髓无效造血密切相关;血清GDF15水平检测有助于SBT与其他类型溶血性贫血的鉴别。

铁剥夺对白血病细胞凋亡相关基因表达的影响

目的 探讨去铁胺 (DFO)对白血病细胞K562凋亡相关基因表达的影响及其可能分子机制。方法 采用RT PCR法分析Rb及c myc基因在RNA水平变化。结果 DFO 50 μmol/L及 1 0 0 μmol/L作用于K562细胞 2 4h及 48h ,Rb及c mycmRNA水平较空白对照组增加 (P <0 .0 5) ,且以 1 0 0 μmol/L组增加明显。 结论 铁剥夺剂使K562细胞Rb及c mycmRNA表达增加可能是其诱导白血病细胞凋亡的机制之一。

靶向FBXL20基因的siRNA片段的筛选及其验证

在人结肠腺癌SW480细胞株及口腔鳞癌HSC3细胞株中,筛选有效干扰fbxl 20的siRNA片段.设计合成3对靶向fbxl 20 mRNA的小干扰RNA片段,通过阳离子脂质体介导转染SW480细胞和HSC3细胞.结果发现siRNA-1,siRNA-2,siRNA-3均能抑制SW480细胞和HSC3细胞fbxl20 mRNA的表达,siRNA-2抑制作用最明显,抑制率分别为86.8%和100%.MTT试验显示:siRNA-2转染SW480细胞和HSC3细胞后,细胞增殖能力明显降低,细胞增殖抑制率分别为29.5%和43.4%.Transwell小室迁移实验表明,HSC3细胞在转染24 h后,细胞迁移能力明显减弱,迁移抑制率高达72.4%.流式细胞术检测细胞凋亡结果显示:转染36 h后,SW480细胞实验组细胞凋亡率为21.9%;转染24 h后,HSC3细胞实验组细胞凋亡率为44.7%.本实验成功的筛选出了特异性的抑制fbxl 20基因的siRNA片段,并初步鉴定了fbxl 20基因的功能.

实时荧光定量PCR快速检测大肠埃希菌的方法研究

目的基于TaqMan探针建立产肠毒素大肠埃希菌实时荧光定量PCR检测方法。方法针对编码大肠埃希菌耐热肠毒素STI、不耐热性肠毒素LTI基因片段设计引物、探针,采用外标法,绘制标准曲线,进行荧光定量PCR检测。结果引物、探针特异性良好,该方法的灵敏度可达到每反应1DNA拷贝,特异性强,检测范围在100～107拷贝每反应,重复性及稳定性好,整个过程只需要2h。结论该方法能快速、灵敏、特异检出产肠毒素大肠埃希菌。

TPA诱导K562细胞分化过程中线粒体铁蛋白表达情况研究

为了研究K562白血病细胞在十四烷酰佛波醇-乙酯(TPA)诱导分化过程中线粒体铁蛋白(MtF)、运铁蛋白受体Ⅰ(TfR1)和铁蛋白(Fn)mRNA表达水平的变化情况,并探讨MtF在白血病细胞增殖和细胞铁代谢方面的作用,采用TPA(终浓度16nmol/L)诱导K562白血病细胞向单核细胞定向分化,并于诱导分化后第1、3和5天收集细胞,用瑞氏染色法观察各时点细胞形态,流式细胞术检测细胞表面分化抗原CD64的表达水平,使用半定量RT-PCR方法检测各时点细胞MtF、TfR1和Fn mRNA表达水平,管家基因β-actin用作对照。结果表明,TPA(16nmol/L)可诱导K562细胞向单核细胞分化,细胞呈现单核细胞典型的形态学特征,在诱导培养第5天诱导分化率可达95%,细胞表面CD64表达水平显著增加。诱导分化前K562细胞具有一定水平MtF表达,但随着TPA诱导细胞分化的增强,MtF和TfR1 mRNA表达水平进行性下调,诱导分化第5天的表达水平分别为诱导分化前的50.3%和68.2%,而Fn mRNA表达水平则逐渐上调,诱导分化第5天表达水平为诱导分化前的1.97倍。结论:TPA诱导K562细胞向单核细胞分化过程中MtF和TfR1 mRNA表达下调,而Fn mRNA表达上调;这种协调变化有助于降低细胞通过TfR1介导的铁摄取,从而抑制或影响细胞增殖能力。

婴幼儿巨细胞病毒感染致类白血病反应7例分析

目的探讨儿童巨细胞病毒(CMV)感染致类白血病反应的临床特点。方法对四川大学附属华西第二医院儿童血液科所收治的7例CMV感染后致类白血病反应患儿的临床资料,进行回顾性分析。结果7例患儿中6例婴儿,临床上多有发热、出血、贫血、肝脾淋巴结肿大等表现,外周血白细胞明显升高,出现幼稚细胞,抗CMV-IgM(+),CMV-IgG(-),骨髓检查正常或未达白血病诊断标准,经更昔洛韦抗病毒治疗疗效满意,多数患者恢复良好,血象和骨髓象恢复正常。结论婴幼儿CMV感染可能是类白血病反应病因之一,临床上类似血液肿瘤性疾病,应结合临床表现和有关实验室检查综合分析鉴别,对疑难病例应密切观察和长期随访。

儿童噬血性淋巴组织细胞增生症GDF15表达研究及高铁蛋白血症机制初探

目的研究噬血性淋巴组织细胞增生症(HLH)患儿外周血细胞生长分化因子15(GDF15)和细胞铁稳态调节相关分子mRNA表达情况,探讨HLH高铁蛋白血症发生机制。方法 HLH组为18例初诊HLH患儿,对照组为19例健康儿童。EvaGreen荧光定量RT-PCR检测相关基因mRNA表达水平,2-Ct方法计算基因相对表达量。结果 HLH组GDF15mRNA的中位表达量高于对照组,差异有统计学意义(4.584对1.490,P<0.05);HLH组铁转出蛋白(Fpn)、铁蛋白重链(Fn-H)和铁调节蛋白2(IRP2)mRNA的相对表达量高于对照组,差异均有统计学意义(P均<0.05),而细胞内铁感知蛋白FBXL5 mRNA中位表达量低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。实验组GDF15表达量与Fpn和Fn-H表达量呈正相关。结论 HLH患儿GDF15表达显著上调,有助于抑制巨噬细胞进一步活化。HLH患儿Fpn和Fn-H表达显著上调,并与GDF15呈正相关,提示巨噬细胞异常持续活化和细胞因子风暴,显著促进Fn-H的转录和分泌,而GDF介导的Fpn表达上调,促进细胞内铁转出,很可能为HLH高铁蛋白血症发生的2个关键机制。

研究型医院“3+1”多维科研服务平台

科研服务平台是研究型医院学科建设、科技创新与人才培养的重要支撑体系。在全面深化科技体制改革的新形势下,某院整合仪器设备共享平台、实验动物中心、生物样本库三大优势资源,并以信息化服务平台为综合载体,搭建"3+1"多维科研服务平台,践行服务支撑与运行管理并重的理念,为研究型医院科研服务平台建设与管理工作提供参考与借鉴。

医学科研实验室精细化管理的探索与实践

针对目前高校和科研院所实验室管理的现状和主要问题,提出实验室精细化管理的重要性。并结合实际,分别从科研实验室安全管理、科研试剂耗材采购管理、科研仪器设备管理几个方面来探讨了相关精细化管理。

化学发光自显影检测人血中巨细胞病毒抗体

本文报道用化学发光自显影技术(Chemiluminescent photographic detection,CPD)与点免疫测定(Dot-immunobinding assay,DIA)结合检测了人血中巨细胞病毒(HCMV)抗体。从氧化剂、发光增强剂、缓冲液种类优选及浓度优选找出了化学发光废物液的最佳配方。以硝酸纤维素膜(NC)为载体,用x-光胶片记录化学发光,检测辣根过氧化物酶(HRP),检测限2×10^(-15)～10^(17)mol。用NC以来心法检测HCMV-Ab,与常规ELISA法对比,57例样品中,定性判断阴阳性彼此符合48例,符合率为84.2%(48/57),但CPD法所用酶标抗体浓度较ELISA法小千倍。