不同细胞进行牛血清中牛源病毒检测的比较试验

对不同细胞进行牛血清中牛源病毒检测的比较实验,选出用于牛血清中病毒检测的最适合外源病毒增殖的细胞,从而提高血清中病毒的检出率,以确保用于疫苗生产的牛血清安全可靠。将牛腹泻病毒、牛腺病毒、牛细小病毒、牛副流感病毒、呼肠孤病毒和狂犬病毒接种到培养好的MDBK细胞、VERO细胞、BT细胞中,逐日观察细胞的病变情况,待观察到10%细胞出现病变或者培养7 d后,进行免疫荧光染色,选出适合用于六种病毒增殖的细胞系。结果显示,BT细胞对所有病毒敏感,VERO细胞对BAV、BVDV病毒不敏感,MDBK对REO、BVDV、RV三种病毒不敏感。综合比较后,选择BT细胞为BPIV、BPV、BAV、BVDV的增殖及实验用细胞,VERO细胞为REO、RV的增殖及实验用细胞。

重症手足口病87例临床特征及危险因素分析

目的探寻手足口病重症化的早期预警指标,为早期识别、尽早干预提供科学依据。方法回顾性分析87例重症手足口病患儿的临床资料并进行单因素和多因素分析。结果与普通病例相比,重症病例多见于3岁以内的婴幼儿;临床常持续高热或高热难退、初期的呕吐、精神萎靡、嗜睡、易惊、惊厥、难以解释的烦躁不安、肢体抖动、震颤、肌阵挛、无力、神经反射异常等可提示神经系统受累的表现多不典型,但发生率明显高于普通组,高血压、高血糖、EV71感染检出率差异均有统计学意义(P<0.05);单因素及多因素分析显示:年龄<3岁、体温39℃以上>3天或常规退热效果不好、精神萎靡、嗜睡、易惊、惊厥、难以解释的烦躁不安、肢体抖动或震颤或肌阵挛、持续高血压、神经反射异常、EV71感染、白细胞>15×10~9/L且中性粒升高、血糖>9 mmol/L等13项指标是手足口病重症化的独立危险因素。结论年龄<3岁、体温39℃>3天或常规退热效果不好、精神萎靡、嗜睡、易惊、惊厥、难以解释的烦躁不安、肢体抖动或震颤或肌阵挛、血压持续增高、神经反射异常、EV71感染、白细胞>15×10~9/L且中性粒升高、血糖>9 mmol/L为手足口病重症化的早期预警指标,具有早期识别重症手足口病的作用。

试论青海撒拉族“骆驼舞”的表演艺术特征

富足的物质生活让撒拉族人有了精神上的追求,“骆驼舞”的出现就是撒拉族人精神追求的产物,它有着浓重的宗教色彩。“骆驼舞”所表达的故事是撒拉族先祖在迁徙之路上发生的奇闻,最后他们遵循神的旨意在青海省循化撒拉族自治县(以下简称循化县)这块土地上扎根繁衍。它在一定程度上印证着撒拉族的来源,在历史上占据着重要地位,但是有些人只把它看成撒拉族历史的一个记忆延续、一个本民族传说的延伸,由此作为撒拉族来源的佐证;更有甚者认为这只是婚礼上助兴的节目.

乙型脑炎减毒活疫苗生产株SA14-14-2全基因组序列测定及基因遗传稳定性

目的对乙型脑炎减毒活疫苗生产株SA14-14-2株进行全基因组序列测定和分析,并观察该生产株在疫苗制备过程中的基因遗传稳定性。方法根据DNA序列数据库(Gen Bank)公布的SA14-14-2株的序列,设计合成7对引物,提取疫苗生产株SA14-14-2及其工作种子批生产的3批原液、3批成品疫苗的病毒RNA,通过RT-PCR方法扩增SA14-14-2株的cDNA片段,分别克隆到pGEM-T载体,转化至大肠埃希菌DH5α中,挑取阳性菌落克隆、鉴定后测定全序列并对序列进行比较分析,观察毒株在传代的过程中病毒滴度的稳定性。结果乙型脑炎减毒活疫苗生产株SA14-14-2株基因组全长10 976 bp,编码3 433个氨基酸。3批原液和3批成品疫苗的基因组全长为10 977 bp,比较分析发现,在3'端非编码区10 701处多一个G核苷酸的插入。与DNA序列数据库(Genbank)登录号为D90195的全长序列同源性分别是99.9%、99.9%、99.9%、99.9%、99.8%、99.9%、99.8%,其中E蛋白的同源性均为100%。SA14-14-2生产株的病毒滴度为7.22 lg PFU/mL,原液和成品疫苗的滴度分别为7.32、7.23、7.32、6.86、6.92、6.70 lg PFU/mL。结论乙型脑炎减毒活疫苗生产株SA14-14-2基因稳定,具有良好的一致性,为乙型脑炎减毒活疫苗的质量的稳定性提供了可靠依据。

浅谈“数学情境”的创设

教学实践证明：最好的学习动机是学生对所学的内容产生浓厚的兴趣。因此在教学中，教师精心创设教学情境，组织丰富而有趣的教学活动，能有效激发学生的学习兴趣和探究意识，产生求知欲望，积极参与到“想探究”、“想尝试”的过程中来。营造一个快乐的学习氛围。

序贯使用去甲肾上腺素和蒙脱石在抢救有机磷农药中毒中的作用

目的探讨序贯使用去甲肾上腺素和蒙脱石在抢救急性有机磷农药中毒(AOPP)中的治疗作用。方法116例口服有机磷农药急性中毒患者随机分成两组:①A组66例,先使用去甲肾上腺素清水洗胃、导泻后胃管内或口服注入蒙脱石混合液;②B组50例,进行常规洗胃、导泻和常规治疗。观察两组患者的洗胃液潜血试验、胆碱酯酶的变化、出现阿托品化的时间、血压、病程以及特殊的临床表现等。结果A组患者全血胆碱酣酶活力的恢复、洗胃液潜血试验率、出现阿托品化的速度明显较B组快,病程短,特殊的临床表现发生率低,差异具有非常显著性(P<0.01),收缩压方面两组相比较,差异无显著性(P>0.05)。结论序贯使用去甲肾上腺素和蒙脱石对AOPP患者有抑郁上消化道出血、保护胃肠功能、阻止毒物吸收、减少特殊的临床表现出现的作用。

牛血清白蛋白残留量检测试剂盒内部参考品的制备及标定

目的制备牛血清白蛋白(bovine serum albumin,BSA)残留量检测试剂盒的内部参考品,用于考察试剂盒的稳定性.方法首先对乙型脑炎减毒活疫苗生产过程中的3种工作液(病毒稀释液、病毒浸泡液、细胞上清液)进行BSA残留量检测.然后选择BSA含量适宜的工作液,适当稀释后制成内部参考品.由2名实验人员同时选取3个不同批号的试剂盒,在不同的日期进行3次检测,对内部参考品进行标定,并根据标定结果确定其赋值范围.分别采用方差分析和t检验对不同批号试剂盒和不同实验人员的检测结果进行比较.标定后连续8个月共20次使用该参考品考察试剂盒的稳定性.结果根据BSA残留量检测结果,选择病毒浸泡液,以疫苗冻干保护剂3倍稀释后制成内部参考品.2名实验人员的108次检测均值为33.46 ng/ml,标准差为2.15 ng/ml,变异系数为6.40%.根据标定结果,确定内部参考品的赋值范围为27.01~39.91 ng/ml.不同批号试剂盒检测结果的差异有统计学意义(F=11.497,P<0.01),不同实验人员检测结果的差异无统计学意义(t=0.500,P>0.05).采用5个批号试剂盒总共对该参考品进行20次检测,BSA残留量均在30.00~36.63 ng/ml范围内,均值为33.14 ng/ml,标准差为1.73 ng/ml,变异系数为5.20%,不同批号试剂盒检测结果的差异无统计学意义(F=0.997,P>0.05).结论制备的BSA残留量检测试剂盒内部参考品可用于试剂盒的稳定性考察.

牛血清中牛病毒直接免疫荧光检测方法的建立及验证

目的建立牛血清中牛病毒直接免疫荧光检测方法,并进行验证。方法建立直接免疫荧光法检测牛血清中牛病毒,对细胞接种浓度和血清浓度、病毒接种量、荧光抗体浓度、染色温度及时间进行优化;对优化的方法进行重复性、特异性、灵敏度验证,并与细胞培养法的检测结果进行比较。结果优化的试验条件为：Vero和BT细胞的接种浓度分别为0.5×105和1.0×105个/ml,血清浓度为5%,病毒接种量为100~300 CCID50,荧光抗体1∶10稀释,4℃染色12 h以上,但不超过24 h。2名实验人员按建立的方对3批牛血清分别进行3次检测,均未检出6种牛病毒;每种病毒仅在相应抗体进行染色时出现荧光;该方法检测6种牛病毒的灵敏度较高。分别采用细胞培养法和直接免疫荧光法检测15批新生牛血清和5批胎牛血清,结果均未检出牛病毒。结论建立的牛血清中牛病毒直接免疫荧光检测方法重复性好,特异性强,灵敏度高,操作简便,与细胞培养法的检测结果无差异,可应用于牛血清中牛病毒的检测。

乙型脑炎减毒活疫苗检定用BHK21工作细胞库的质量控制

目的对乙型脑炎减毒活疫苗（乙脑疫苗）检定用BHK21工作细胞库进行全面质量控制以确保其质量。方法按照《中华人民共和国药典》2010年版三部收录的细胞鉴别试验、无菌检查、支原体检查、外源病毒污染检查和病毒敏感性检查方法，对检定用BHK21工作细胞库进行全面质量检定。结果待检BHK21细胞的同工酶电泳图谱与BHK21细胞标准图谱一致。细菌、真菌、支原体、外源病毒检测结果均符合规定要求。病毒敏感性检测显示，待检BHK21细胞培养的乙脑疫苗病毒滴度为6．93 lgPDF／ml，与合格BHK21细胞培养的乙脑疫苗（病毒滴度为6．89 lgPDF／m1）相似，均达到质量标准要求（6．48～7．12 lgPDF／ml）。结论检测合格的BHK21工作细胞库可用于乙脑疫苗的质量检定来保证乙脑疫苗质量。

ELISA检测庆大霉素残留量数据拟合模型的探讨

目的探讨ELISA检测乙型脑炎减毒活疫苗中庆大霉素残留量的数据拟合模型,以验证和优化定量检测系统。方法采用商品化庆大霉素残留酶联免疫检测试剂盒对乙型脑炎减毒活疫苗进行庆大霉素残留量检测,通过二次多项式模型、对数线性模型和四参数logistic模型对实验数据进行拟合处理,分析比较各模型的决定系数(R2)、实验点分布、回收率等指标。结果二次多项式模型、对数线性模型和四参数logistic模型的变量显著性检验均有统计学意义(P<0.05),R2均值分别为0.9970、0.9944、0.9993,二次多项式模型和四参数logistic模型拟合优度较好;各拟合模型的标准品实验点在标准曲线两侧的分布都较为均匀,四参数logistic模型最佳,尤其是在中、低浓度范围(0.1~0.9 ng/ml);各拟合模型在0.1~8.1 ng/ml浓度范围的标准品回收率均达到中国药典要求,且差异无统计学意义。结论二次多项式模型、对数线性模型和四参数logistic模型均适用于ELISA检测庆大霉素残留量的数据分析,其中二次多项式模型和四参数logistic模型拟合较好,这对持续优化该项定量检测具有重要指导意义。

青春期应该这样度过——社工为偏远山区学生开展性教育课程

服务背景社工在偏远山区学校开展走访工作和助学活动时发现,学生的性健康知识比较匮乏。比如有的女生月经初潮到来时以为自己身患绝症,因害怕增添家庭负担不敢告知别人;有的女生即使通过有经验的同学了解了月经的信息,也可能因为不会正确使用卫生巾而出现各种卫生问题,在试错中慢慢摸索经验;还有些男生误以为遗精是尿失禁,因害羞不敢向家人和老师寻求帮助。

论民族民间舞课在学前教育专业开设的重要性及训练方法

在全面推进美育工作的浪潮下,学前教育专业舞蹈课程的开设也充分提高着学生的美育水平。民族民间舞作为高校学前教育专业教学中的一门重要课程,通过民族民间舞课的学习可以让学生了解多民族的人文文化以及传统风俗。此门课程的教学活动内容专门针对学前教育专业的学生设定,该课程具有培养审美创新能力以及传播传承民族文化,树立爱国情怀的特点,让学生了解该门课程的重要性,并通过学习摸索出一套适合自己的正确有效的训练方法,为成为幼教之后的教学工作中打下基础。

乙型脑炎减毒活疫苗中猪圆环病毒PCR检测方法的建立及验证

目的建立乙型脑炎减毒活疫苗中猪圆环病毒1型(porcine circovirus 1,PCV1)和猪圆环病毒2型(PCV2)PCR检测方法,并进行验证及初步应用。方法参照Gen Bank中登录的PCV1(AY193712)及PCV2序列(AY181946)设计引物,以提取的PCV1和PCV2基因组DNA为模板,分别经PCR扩增726 bp的PCV1片段和433 bp的PCV2片段,并对PCR反应中的退火温度、引物浓度、Mg2+浓度参数进行优化。将PCR扩增产物分别与p MD18-T载体连接,连接产物转化感受态大肠埃希菌DH5α,挑取阳性克隆,测序并进行同源性分析。对优化的PCR方法进行灵敏度和特异性验证,并用该方法检测3批乙型脑炎减毒活疫苗工作种子批、4批明胶和10批胰蛋白酶中的PCV1和PCV2。结果确定PCR反应的退火温度为54℃,引物浓度为10μmol/L,Mg2+浓度为10 mmol∕L。扩增的目的基因测序结果与Gen Bank中发布的PCV1及PCV2序列的同源性均为100%。建立的PCR方法最低可检出10 pg的目的基因;该方法只对PCV1和PCV2基因组DNA能扩增出特异性条带。用该方法检测乙型脑炎减毒活疫苗工作种子批、明胶和胰蛋白酶,均未检出PCV1和PCV2。结论成功建立了乙型脑炎减毒活疫苗中PCV1和PCV2的PCR检测方法,该方法具有较高的灵敏度和较强的特异性,可用于乙型脑炎减毒活疫苗工作种子批及两种猪源性原材料的PCV1和PCV2污染检测。

吸附无细胞百白破联合疫苗中白喉类毒素的质量分析

目的:对成都生物制品研究所有限责任公司2007-2013年生产的吸附无细胞百白破联合疫苗中白喉类毒素的原液和成品的关键质量属性进行分析。方法:建立了白喉类毒素趋势分析和实验室间对比分析的方法。结果:及时发现了白喉类毒素的质量和生产过程中发生的问题及偏差,确定了产生问题和偏差的影响因素。结论:证明了成都公司白喉类毒素生产和检定过程的稳定性,白喉类毒素的质量是稳定的。

乙型脑炎减毒活疫苗外源病毒因子检查法阳性对照的选择

目的 选择合适的阳性对照供乙型脑炎（乙脑）减毒活疫苗外源病毒因子检查法（细胞培养法）使用.方法 细胞病变试验中,将乙脑病毒稀释成不同浓度,分别接种3种细胞,培养2～3 d,观察培养期末细胞病变.病变较典型时对应的病毒浓度即为本试验细胞病变阳性对照浓度.血吸附试验中,将植物血凝素经0.5％鸡、豚鼠红细胞悬液稀释成不同浓度,分别加入3种细胞中,置2～8℃或20～25℃0.5h,观察血吸附情况.血吸附较典型的植物血凝素浓度即为本试验血吸附阳性对照浓度.结果 乙脑病毒浓度为3～4 lg噬斑形成单位/ml时可引起20％～50％细胞病变,植物血凝素浓度为30～40 mg/L时可导致20％～50％细胞血吸附.结论 适当浓度的乙脑病毒和植物血凝素可作为外源病毒因子检查法的试验阳性对照.

“村财乡管”财务管理模式探索与反思

在我国社会经济快速发展的今天,使得农村经济发展迅猛,农村人们生活水平也日益提高,但是农村政府在进行财务管理过程中还存在一些问题,造成财务管理质量一直处于最低水平。基于此,本文就对'村财乡管'财务管理模式进行探索、反思,以期待为农村财务管理工作提供参考依据。

酶标法检测抗菌素残留量数据处理方法的探讨

目的探讨酶标法检测抗菌素残留量的数据处理方法。方法采用卡那霉素和庆大霉素快速检测试剂盒(间接竞争ELISA法)检测乙型脑炎减毒活疫苗2种抗菌素的残留量;采用半对数直线、半对数二次曲线和对数直线3种方法,以最小二乘法对实验数据进行拟合处理,分析、比较实验点残差分布、残差平方和、相关系数和实验误差等指标。结果半对数直线拟合较差,半对数二次曲线和对数直线方程拟合较好;半对数二次曲线法中实验点在标准曲线两侧的分布较均匀,各点的残差平方和远小于半对数直线法;半对数二次曲线法和对数直线法所得标准曲线的相关系数较高,检测庆大霉素标准品的实验误差均小于半对数直线法。结论半对数二次曲线法和对数直线法均优于试剂盒推荐的半对数直线法,而在极限值处理、计算简便等方面对数直线法更优。