氨氮胁迫下饥饿和再投喂对黄颡鱼幼鱼生长性能、血液健康、抗氧化能力及免疫应答的影响

为了研究氨氮胁迫下饥饿和再投喂对黄颡鱼幼鱼生长性能、血液健康、抗氧化能力及免疫应答的影响,以初始体质量为(14.36±0.21)g的黄颡鱼幼鱼为研究对象,随机分为对照组和试验组(每组3个重复,每个重复30尾),对照组人工饱食投喂42 d,试验组饥饿14 d后恢复饱食投喂28 d,2组试验鱼都暴露于5.7 mg/L总氨氮中。结果显示:氨氮胁迫下饥饿14 d后,试验组黄颡鱼幼鱼体质量、头肾巨噬细胞吞噬指数和血清溶菌酶活性均显著低于对照组(P<0.05);试验组黄颡鱼幼鱼血清谷丙转氨酶、谷草转氨酶活性和尿酸含量,肝脏超氧化物歧化酶活性和丙二醛含量均显著高于对照组(P<0.05)。氨氮胁迫下饥饿14 d再恢复投喂28 d后,试验组黄颡鱼幼鱼终末体质量显著低于对照组(P<0.05),但特定生长率显著高于对照组(P<0.05);试验组黄颡鱼幼鱼血清谷丙转氨酶、谷草转氨酶、碱性磷酸酶活性及尿酸和甘油三酯含量均显著低于对照组(P<0.05);试验组黄颡鱼幼鱼肝脏超氧化物歧化酶活性与对照组无显著性差异(P>0.05);试验组黄颡鱼幼鱼头肾巨噬细胞吞噬指数和血清总免疫球蛋白含量显著高于对照组(P<0.05);试验组黄颡鱼幼鱼头肾巨噬细胞呼吸爆发、血清总补体含量和溶菌酶活性与对照组无显著性差异(P>0.05)。结果表明,氨氮胁迫下,饥饿会对黄颡鱼幼鱼的生长及健康造成抑制;饥饿后再投喂,黄颡鱼幼鱼表现出部分生长补偿,血液恶化、抗氧化酶活性和免疫抑制得到不同程度的缓解。

急性氨氮毒性对黄颡鱼头肾巨噬细胞抗氧化及炎症相关基因表达的影响

为了研究急性氨氮胁迫对黄颡鱼头肾巨噬细胞抗氧化及炎症相关基因表达的影响,实验通过建立黄颡鱼离体头肾细胞模型,开展为期96 h的急性氨氮胁迫实验。结果显示,0.14和0.28 mg/L总氨氮处理组SOD基因的相对表达量显著低于对照组,但0.28 mg/L总氨氮处理组GPX基因的相对表达量显著高于其他组;0.14和0.28 mg/L总氨氮处理组IL-1和TNF基因的相对表达量显著低于对照组,而0.28 mg/L总氨氮处理组IL-8基因的相对表达量显著低于0.14 mg/L总氨氮处理组和对照组;吖啶橙染色检测发现,0.14 mg/L总氨氮处理组实验鱼头肾巨噬细胞内可见边缘不规则的黄绿色荧光,0.28 mg/L总氨氮处理组实验鱼头肾巨噬细胞内可见致密浓染的黄绿色荧光信号。研究表明,氨氮毒性能够影响黄颡鱼头肾巨噬细胞抗氧化相关基因的表达;细胞凋亡可能是造成鱼类氨中毒致死的主要原因之一。

乌药叶化学成分的研究

目的研究乌药Lindera aggregate(Sims) Kosterm叶的化学成分。方法乌药叶70%乙醇提取物采用硅胶、Sephadex LH-20、制备HPLC进行分离纯化,根据理化性质及波谱数据鉴定所得化合物的结构。结果从中分离得到13个化合物,分别鉴定为hydroxylinderstrenolide(1)、lindenanolide H(2)、lindenanolide A(3)、atractylenolideⅢ(4)、chlojaponilactone A(5)、9,9′-dihydroxy-3,4-methylenedioxy-3′-methoxy[7-O-4′,8-5′] lignans(6)、槲皮素(7)、山柰酚(8)、槲皮素-3-O-β-D-木糖苷(9)、槲皮素-3-O-α-L-阿拉伯呋喃糖苷(10)、山柰酚-3-O-α-L-鼠李糖苷(11)、山柰酚-3-O-(4″-反式-对-香豆酰基)-α-L-鼠李糖苷(12)、山柰酚-3-O-(2″,4″-二-反式-对-香豆酰基)-α-L-鼠李糖苷(13)。结论其中化合物2~6、12~13为首次从该植物中分离得到。

三叶崖爬藤matK基因编码区全序列测定及编码产物研究

以三叶崖爬藤(Tetrastigma hemsleyanum)matK基因为研究对象,利用生信分析其matK基因编码区的全序列及其产物的氨基酸序列特征,并构建14种爬藤属植物的分子系统进化树。结果表明,三叶崖爬藤的matK基因的大小为969 bp,共有6个开放阅读框;为亲水性蛋白;信号肽剪切位点预测处于64~65位氨基酸;亚细胞定位蛋白只存在于叶绿体中;三叶崖爬藤与毛枝崖爬藤(Tetrastigma obovatum)亲缘关系最近,与崖爬藤(Tetrastigma obtectum)的亲缘关系最远。

镉胁迫对黄颡鱼幼鱼抗氧化酶活性及免疫应答的影响

为了研究急性镉(Cd^(2+))胁迫对黄颡鱼幼鱼肝脏抗氧化酶活性及非特异性免疫应答的影响,实验挑选初始体质量为(5.94±0.05)g的健康黄颡鱼幼鱼,随机分成2个处理组,每组设置3个重复,开展为期96 h的急性Cd^(2+)胁迫实验。结果表明:高Cd^(2+)组实验鱼肝脏中超氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧化物酶和谷胱甘肽还原酶活性在6 h时达到最高,而硫代巴比妥酸反应物含量在12 h时达到最高;高Cd^(2+)组实验鱼肝脏中溶菌酶(LYZ)、碱性磷酸酶(AKP)和酸性磷酸酶(ACP)活性显著低于低Cd^(2+)组;高Cd^(2+)组实验鱼肝脏中LYZ、AKP及ACP活性最低值出现在48~96 h。研究表明,急性Cd^(2+)胁迫产生的大量自由基并不能被机体自身的抗氧化酶体系完全清除;高Cd^(2+)浓度会对抗氧化和免疫应答体系造成不同程度的抑制。

乌药matK基因的生物信息学及多样性分析

对乌药[Lindera aggregate(Sims)Kosterm]叶绿体matK基因编码的蛋白序列进行了分析,并以11种山胡椒属植物构建了系统进化树。结果表明,matK基因全长为1628 bp,含有14个开放阅读框;亲水指数为-0.200,为亲水蛋白;乌药与桠乌药(Lindera obtusiloba)和三股筋香(Lindera thomsonii)的亲缘性比较近,与山胡椒(Lindera glauca)亲缘性最远。研究结果可为乌药种质资源鉴别、分类及多样性研究提供参考。

急性氨氮暴露对大弹涂鱼炎性反应相关基因表达的影响

为研究急性氨氮胁迫对大弹涂鱼炎性反应相关基因表达的影响,实验挑选初始体质量为(15.14±0.05) g的健康大弹涂鱼幼鱼180尾,进行96 h的急性氨氮胁迫实验。结果显示,大弹涂鱼96 h氨氮半致死浓度为8.99 mg/L总氨氮(0.11 mg/L非离子氨,T-AN);氨氮胁迫后TNF基因的mRNA表达量分别于12和96 h时显著上调,96 h时表达量达到0 h时的2倍;IL-1基因的mRNA表达量12 h时显著上调,为0 h时表达量的6倍;氨氮胁迫后IL-6基因的mRNA表达量分别于12和96 h时显著上调,表达量达到0 h时的1.5倍;氨氮胁迫后IL-8基因的mRNA表达量在24 h时出现显著下调。研究表明,大弹涂鱼96 h氨氮半致死浓度为8.99 mg/L总氨氮;半致死浓度的氨氮胁迫48 h后,TNF、IL-1、IL-6和IL-8基因的mRNA表达量持续升高,推测过度炎性应激可能是导致鱼类氨中毒死亡的原因之一。

牛磺酸和甲硫氨酸亚砜亚胺对高血氨症大弹涂鱼氧化应激和炎症反应相关基因影响的比较研究

为了查明氨中毒对大弹涂鱼的影响,以及牛磺酸和甲硫氨酸亚砜亚胺对鱼类高血氨症的缓释作用,本研究设置了4个处理组:组1腹腔注射氯化钠,组2腹腔注射醋酸铵,组3腹腔注射牛磺酸和醋酸铵,组4腹腔注射甲硫氨酸亚砜亚胺和醋酸铵。实验持续96h。结果发现,组2实验鱼肝脏中超氧化物歧化酶、过氧化氢酶、谷胱甘肽过氧化物酶和谷胱甘肽巯基转移酶基因的mRNA表达量显著最高,其次是组1,而组3和组4显著最低。同样,组2实验鱼肝脏中白细胞介素6(IL6)和IL 8显着高于其他组。肿瘤坏死因子基因的mRNA表达量,组1显著高于其他组,而IL 1基因的mRNA表达量,组4显著最高。结果表明:氨氮毒性能够影响鱼体内抗氧化酶系统及免疫应答,导致氧化损伤和炎症反应;外源性牛磺酸能够缓解鱼类高血氨症带来的负面影响;甲硫氨酸亚砜亚胺尽管能够缓解自由基造成的氧化损伤,但对炎症反应并未发挥有效的作用。

线上线下混合教学的生物化学课程实践与探索

生物化学是研究生命现象及其本质的一门学科,其在医药领域的地位举足轻重。通过探索线上线下混合教学的模式,全面梳理课程内容,开拓课程方向,以提高学生上课的兴趣,拓宽学生的视野,解决传统线下教学的问题。因此希望通过本文的研究能够为线上线下教学模式提供一定的帮助。

急性邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯(DEHP)暴露对黄颡鱼(Pelteobagrus fulvidraco)幼鱼炎性反应相关基因表达的影响

为了研究急性邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯(DEHP)暴露对黄颡鱼炎性反应相关基因表达的影响,挑选初始体重为(1.80±0.20)g的健康黄颡鱼幼鱼270尾,开展为期96 h的急性DEHP暴露实验。结果显示,在96 h毒性胁迫过程中,中、高浓度组实验鱼肝脏中肿瘤坏死因子(TNF)和白介素8(IL 8)基因表达量呈先升高后降低趋势;然而,高浓度组实验鱼肝脏中干扰素(IFN)基因表达量则呈逐渐降低趋势;DEHP暴露达12 h时,高浓度组实验鱼肝脏中TNF基因表达量显著高于其他组,而IL 8和IFN基因表达量在中浓度组最高;DEHP暴露分别达24、48和96 h时,中浓度组实验鱼肝脏中TNF、IL 8和IFN基因表达量均显著高于高浓度组。结果表明,黄颡鱼肝脏中炎性反应相关基因的表达与DEHP之间存在明显的剂量依赖效应,低浓度的DEHP暴露能够激活炎性反应相关基因的表达,而高浓度的DEHP暴露则会抑制其表达。

铁皮石斛叶绿体基因组特征与系统发育分析

采用Illumina Hiseq平台高通量测序,对药用植物铁皮石斛进行叶绿体全基因组序列测序、注释、组装及结构分析,从NCBI中下载已发表的13个兰科植物以及2个外类群进行系统发育分析。结果表明,全基因组大小为153 508 bp,大单拷贝区域为85 759 bp,小单拷贝区域为14 973 bp,两个反向重复区域为26 419 bp;共注释133个基因,93个蛋白编码基因,32个转运RNA基因以及8个核糖体rRNA基因,GC的含量占总碱基数量的37.51%;共检测到47个长重复序列,63个简单重复序列;系统发育结果与石斛亲缘性最近。

中国首次发现旋柄腐霉(Phytopythium helicoides)引起草莓根茎腐病

根腐病是草莓主要病害之一,其病原菌种类较多,国内已报道的病原菌有:立枯丝核菌(Rhizoctonia solani)、终极腐霉(Pythium ultimum)[1]、镰刀菌(Fusarium sp.)、恶疫霉(Phytophthora cactorum)、拟盘多毛孢菌(Pestalotiopsis sp.)[2]等。草莓根腐病危害根部、茎基部,严重的导致茎内部髓坏死,甚至整株枯死,近几年逐年加重,尤其是在夏季育苗期其病害蔓延快,严重影响草莓产业的发展。

三叶崖爬藤肉桂酸-4-羟化酶的生物信息学及体外功能研究

肉桂酸-4-羟化酶(C4H)是苯丙烷代谢途径的关键酶之一,在植物黄酮类物质的合成代谢过程中发挥着重要的作用。在受到低温胁迫时中药材三叶崖爬藤(Tetrastigma hemsleyanum)中具有药用价值的黄酮类物质总含量上升,但其机制尚不清楚。本研究通过实时荧光定量PCR (qRT-PCR)分析低温胁迫下三叶崖爬藤C4H (ThC4H)基因表达量上升的现象,并利用c DNA末端快速扩增(RACE)技术获得ThC4H基因的cDNA全长,随后在酿酒酵母中重组表达,检测其体外活性,并进行三维结构比对和底物分子对接研究。结果表明:该cDNA具有完整的开放阅读框1 518 bp,编码505个氨基酸。ThC4H具有C4H家族保守的P450结构域,与花叶地锦(Parthenocissus henryana)的C4H有91.88%的相似性。重组ThC4H蛋白具有体外催化反式肉桂酸生成4-香豆酸的能力。ThC4H、苔藓植物C4H和高粱(Sorghum bicolor) C4H (SbC4H1)与肉桂酸对接位置及形成的氢键基本一致,猜测其催化机制相似,而导致不同C4H酶性质差异的可能原因是2号环(loop)区域和血红素结合域中2个氨基酸的多样性。本研究为进一步探索三叶崖爬藤ThC4H蛋白在抗寒方面的功能提供参考。

三叶青块根发育时期RT-qPCR内参基因的筛选与体系建立

三叶青为珍稀药用植物,药用部位地下块根产量低,生长周期长,相关基因表达和调控研究缺乏,为了解其块根发育的分子机制,需筛选稳定表达的内参基因。本研究利用课题组前期的转录组测序数据,选取了β-actin、GAPDH、RNA polymerase Ⅱ和GBSS四个候选内参基因,以不同块根发育阶段的三叶青根、茎、叶、芽组织为材料,通过反转录PCR初筛,实时荧光定量PCR检测表达量,并利用geNorm、NormFinder、BestKeeper、Delta Ct程序和RefFinder在线网站评价内参基因的稳定性。结果表明:GAPDH在不同块根发育及不同组织中的稳定性优于其他基因;β-actin的扩增效果相对较差;经综合分析稳定性顺序为GAPDH>GBSS>RNA polymerase Ⅱ>β-actin,因此本研究认为在研究三叶青块根发育中选用GAPDH作为内参,在后续的基因定量表达验证中结果更为可靠。此外,也可以考虑GAPDH和GBSS或GAPDH,GBSS和RNA polymerase Ⅱ的多内参共同校准的方法以进一步提高结果的准确性。本研究建立了三叶青实时荧光定量PCR内参基因的筛选体系,为后期开展三叶青块根发育过程中基因的功能调控和表达研究提供了理论依据。

覆盆子及其近缘混淆品的PCR-RFLP鉴别研究

目的建立一种覆盆子特异性的分子鉴别方法。方法通过对覆盆子及其混淆品的ITS序列进行测序分析,根据差异位点设计限制性内切酶,采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性方法(polymerase chain reaction restriction fragment length polymorphism,PCR-RFLP)进行鉴别,建立并优化PCR鉴别方法,并对其稳定性和适用性进行考察与验证。结果设计的引物可实现对覆盆子及其混淆品序列的扩增,扩增产物为800 bp大小的条带,通过对限制性内切酶MboI进行酶切后的片段长度进行分析,仅覆盆子的序列可被酶切形成2个片段,而混淆品的序列不能被切开,从而特异性鉴别是否为覆盆子。结论本实验建立的PCR-RFLP方法可用于鉴别覆盆子。