胃癌组织中碳酸酐酶Ⅸ表达的临床意义及分子机制

目的探讨胃癌(GC)组织中碳酸酐酶(CAⅨ)的临床意义及其分子机制。方法采用基因表达谱动态数据分析(GEPIA2)数据库预测GC组织中CAⅨ基因的差异性表达,利用癌症数据分析(UALCAN)数据库分析CAⅨ表达与GC患者临床病理特征的关系,采用Kaplan-Meier Plotter分析CAⅨ对GC的预后价值;收集10例GC患者的癌患组织(GC组)及其癌旁组织标本(对照组),采用免疫组织化学法检测CAⅨ表达;采用交互式基因检索工具(STRING)和可视代综合发现(DAVID)数据库进行基因本体论(GO)及京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路分析预测CAⅨ的蛋白质互作关系及调控网络。结果GEPIA2数据库结果显示,与对照组比较,GC组CAⅨ的表达量降低(P<0.05);UALCAN数据库显示,CAⅨ的表达与种族、肿瘤分化等级、幽门螺杆菌感染有相关性(P<0.05);Kaplan-Meier Plotter数据库分析显示,低CAⅨ表达组与高CAⅨ表达组的5年无进展生存期(PFS)相比,差异有统计学意义(P<0.05);临床标本免疫组织化学结果显示,GC组标本中CAⅨ表达量较对照组降低(P<0.05),与数据库预测结果一致;STRING数据库分析显示,CAⅨ与缺氧诱导因子-1α(HIF1α)、溶质载体家族4成员4(SLC4A4)、芳烃受体核转位器(ARNT)等蛋白具有较强相互作用关系;GO分析显示,CAⅨ参与低氧反应下RNA聚合酶Ⅱ启动子的转录调节等过程;KEGG分析显示CAⅨ与癌症信号通路、缺氧诱导因子-1(HIF-1)信号通路的调节有关。结论CAⅨ在GC组织中呈低表达,其水平与GC患者肿瘤分化等级、PFS呈负相关,CAⅨ可能参与肿瘤代谢过程。

基于生物信息学的胃部“炎癌转化”过程中关键基因的筛选及其作用

目的采用生物信息学分析方法,探讨胃部“炎癌转化”过程中潜在的关键基因。方法从公共基因表达总库(GEO)中筛选与胃炎、胃癌前病变、胃癌相关的GSE130823、GSE55696的微阵列表达数据集,采用差异分析工具(GEO2R)分析共有的差异表达基因(DEGs),采用注释、可视化综合发现数据库(DAVID)对DEGs进行基因本体论(GO)分析及京都基因与基因组百科全书(KEGG)富集分析,采用蛋白相互作用数据库(STRING)和Cytoscape软件构建DEGs的蛋白质-蛋白质相互作用(PPI)网络,采用cytoHubba插件计算排名前10的DEGs作为枢纽基因(Hub基因),采用生存曲线分析排名前5的Hub基因与胃癌患者生存情况的关系;收集15例病理诊断为胃炎的胃组织、15例胃癌的癌组织及相应的癌旁组织,采用逆转录-实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)和蛋白质免疫印迹法(Western blot)分别检测degree值排名前2的Hub基因的mRNA和蛋白质水平进行验证。结果GSE130823、GSE55696分别筛选出DEGs 312个和2493个,二者交集基因113个(其中73个上调、40个下调);重叠DEGs在生物过程(BP)中主要富集于G蛋白偶联、蛋白质分解及细胞间连接等方面,细胞组成(CC)变化的DEGs显著定位于细胞膜的有机组成部分、细胞基质及细胞外空间等区域,分子功能(MF)变化的DEGs富集于序列特异性DNA结合、受体结合及分子结构活性等功能上,KEGG通路富集分析显示DEGs主要富集于胃酸分泌、精氨酸和脯氨酸的代谢、细胞粘附和癌症中的转录失调等通路上;排名前10的Hub基因为ATP4A、CLDN3、CLDN4、CLDN7、CXCL1、DEFA 6、GCG、SI、CDH 3及CLDN1,其中ATP4A、CLDN3、CLDN4、CLDN7、CXCL1与胃癌患者的总体生存期(OS)密切相关;ATP4A在胃癌中表达下调,CLDN3在胃癌组织中表达上调,与生物信息学分析结果符合。结论ATP4A、CLDN3与胃癌的发生发展密切相关,且ATP4A、CLDN3、CLDN4、CLDN7、CXCL1均与患者的预后生存有关。

头花蓼对幽门螺杆菌刺激骨髓来源巨噬细胞炎症反应的作用及机制

目的探讨头花蓼(PC)对幽门螺杆菌(H.pylori)刺激骨髓来源巨噬细胞(BMDMs)炎症反应的作用及机制。方法室温复苏H.pylori SS2000菌株,培养48 h并鉴定,将H.pylori与BMDMs共孵育,按照不同感染复数(MOI,细菌数∶细胞数)分为空白、25∶1、50∶1、100∶1、200∶1及400∶1组,并培养48 h,采用四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)检测各组BMDMs细胞活力;并于3、6、12及24 h收集细胞及上清,采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测不同MOI及刺激时间下白细胞介素-1β(IL-1β)IL-18的含量;取BMDMs分为空白组[不加H.pylori,加改良依格尔(DMEM)培养液]、模型组(加H.pylori,DMEM培养液)及PC治疗组(加H.pylori,DMEM培养液,0.08μg/L PC),采用Western blot检测各组BMDMs细胞质与细胞核中核因子κB单体p65(NF-κB/p65)的表达及细胞裂解液中NOD样受体蛋白3(NLRP3)、IL-1β前体(Pro-IL-1β)及细胞上清液中IL-1β蛋白的表达。结果MOI高于100∶1时,细胞抑制率增高,BMDMs的数量减少(P<0.05);模型组BMDMs多数变圆,表面不光滑,颗粒物质明显增多;MOI为100∶1且作用12 h时,BMDMs中IL-1β及IL-18含量达到最高;模型组BMDMs细胞质内NF-κB/p65蛋白表达较空白组减少、细胞核内NF-κB/p65蛋白表达较空白组升高(P<0.05),PC治疗组BMDMs胞内NF-κB/p65蛋白表达较模型组升高、核内NF-κB/p65蛋白表达较模型组减少(P<0.05);模型组BMDMs中NLRP3、IL-1β蛋白表达较空白组升高(P<0.05),PC治疗组BMDMs中NLRP3、IL-1β蛋白表达较模型组减少(P<0.05);各组BMDMs中Pro-IL-1β蛋白表达比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。结论PC可改善H.pylori引起的BMDMs细胞炎症反应,其机制可能与抑制NF-κB/NLRP3/IL-1β信号通路的激活有关。