反相HPLC色谱法测定盐芥和菠菜中的甜菜碱含量

本实验利用反相HPLC色谱法测定了盐芥和菠菜中的甜菜碱含量,实验分别以菠菜和盐芥的叶组织为材料,用去离子水提取甜菜碱.提取液经浓缩后依次通过阳离子交换树脂柱和阴离子交换树脂柱进行纯化,用NH4 OH洗脱阳离子交换树脂柱,洗脱液收集浓缩干后用磷酸盐流动相溶解.样品用C1 8反相色谱柱进行分离,流动相为5 0mmol/L的KH2 PO4 溶液(pH 4.5 6) ,色谱条件为0 .7ml/min ,192nm波长测定;此色谱条件能使甜菜碱与其它组分很好的分离,甜菜碱加样回收率达到90 %～98% .经测定,盐芥叶片中的甜菜碱含量为1.3 67mg/g ,菠菜叶片中的甜菜碱含量为1.65 6mg/g .

文昌鱼──研究脊椎动物起源和进化的模式动物

长久以来，文昌鱼一直被认为和生活在约５亿年前的脊椎动物的直接祖先相似。由于文昌鱼在 进化上的重要性，它在动物学研究史上发挥着关键作用。近１００多年来，文昌鱼作为研究对象曾数次受 到动物学界青睐或冷落。大约１０年前，随着分子生物学技术应用于文昌鱼研究，又激发了动物学家对 文昌鱼的研究兴趣，又一次出现对文昌鱼研究的高潮，并且一直持续至今。分子生物学研究结果表明， 文昌鱼样生物可能是环节动物样动物和最早的脊椎动物之间的进化中间体。因此，文昌鱼在动物学研究 史上好像绕了个大圈又回到了原处，在被忽视一段时间之后，又重新占据脊椎动物起源和进化研究中心 舞台的位置，成为研究脊椎动物起源和进化的模式动物。

甜菜碱的生物合成及其基因工程的研究进展

综述了甜菜碱的合成过程和催化酶类的相关特性 ,并对催化甜菜碱合成的胆碱脱氢酶 (CDH)、胆碱单加氧酶 (CMO)、甜菜碱醛脱氢酶 (BADH)、胆碱氧化酶 (COD)基因工程方面的研究进展进行了综述 .

鲈α-珠蛋白基因的克隆和序列分析

从鲈头肾cDNA文库中随机挑取噬菌斑,作为模板,以λZAPExpress载体两端含有的T3和T7启动子序列设计引物,用PCR方法扩增插入片断,从中克隆到血红蛋白α亚基的cDNA(Genebank登录号为EU588586)。该cDNA包含435 bp的开放阅读框,编码144个氨基酸。计算其可能的分子量为15864.51,PI为8.83。序列比较分析结果表明,在近端与血红素结合的组氨酸高度保守,与大菱鲆α类珠蛋白同源性最高,达83.3%,与金鲈和大西洋鳕的同源性分别为72.7%和67.8%,与非洲爪蟾α-珠蛋白同源性最低,为2339.4%。通过构建系统进化树,对鲈α-珠蛋白的系统演化进行了分析,并对其二级和三维结构进行了预测。

基因倍增和脊椎动物起源

有机体基因复制导致基因组复杂性增加及其和脊椎动物起源的关系已经成为进化生物学研究的热点。20世纪70年代由Ohno提出后经Holland等修正的原始脊索动物经两轮基因组复制产生脊椎动物的假设目前已被广泛接受。脊椎动物起源和进化过程中发生过两轮基因组复制的主要证据有三点:(1)据估计脊椎动物基因组内编码基因数目大约相当于果蝇、海鞘等无脊椎动物的4倍;原口动物如果蝇和后口动物如头索动物文昌鱼的基因组大都只有单拷贝的基因,而脊椎动物的基因组则通常有4个同属于一个家族的基因。(2)无脊椎动物如节肢动物、海胆和头索动物文昌鱼都只有一个Hox基因簇,而脊椎动物除鱼类外,有7个具有Hox基因簇,其余都具有4个Hox基因簇。(3)基因作图证明,不但在鱼类和哺乳动物染色体广大片段上基因顺序相似,而且有证据显示哺乳动物基因组不同染色体之间存在相似性。据认为第一次基因倍增发生在脊椎动物与头索动物分开之后,第二次基因倍增发生在有颌类脊椎动物和无颌类脊椎动物分开以后。但是,基因是逐个发生倍增,还是通过基因组内某些:DNA片段抑或整个基因组的加倍而实现的,目前还颇有争议。

一种大肠杆菌胆碱脱氢酶活性的测定方法

本文提出了一种简单易行的测定微生物中胆碱脱氢酶活力的方法。通过测定549nm波长下电子传递体系PMS(吩嗪二甲酯硫酸盐)-cty.c(细胞色素C)光吸收值的增加,就可以计算出胆碱脱氢酶活力。利用此方法测定了大肠杆菌胆碱脱氢酶热激诱导前后的活力,结果发现受到诱导的大肠杆菌中胆碱脱氢酶的活力明显高于对照组。

甜菜碱在养殖业中的营养机理

甜菜碱作为饲料添加剂已经在养殖业上得到了广泛的应用,它具有调节动物脂肪代谢、改善家禽的生产能力、促进动物的生长和抗球虫病等疗效。本文对甜菜碱在脂肪代谢和甲基代谢中的机理进行了阐述,对甜菜碱与甲硫氨酸和胆碱在添加剂中的添加效果进行了比较,并就其对饲料中维生素的保护作用和在水产养殖中的营养机理进行了综述。甜菜碱作为安全高效的营养性饲料添加剂,具有广阔的应用前景。

日本三角涡虫全能干细胞的分离培养与鉴定

涡虫具有极强的再生能力,并且认为涡虫体内存在一类具有增殖分化潜能被称为neoblasts的全能干细胞。这种细胞在涡虫体内可发生迁移、增殖和分化,对其个体组织器官损伤的修复具有重要作用。本实验中,三角涡虫经过饥饿处理后切取特定的组织块,然后再经过处理使组织块中的细胞分离出来。分离的细胞继续培养并通过碱性磷酸酶检测最终鉴定为neoblasts干细胞。

鳗弧菌质粒编码的铁吸收系统的分子调控

鳗弧菌是鱼类弧菌病的主要病原菌,该菌中质粒编码的铁吸收系统是重要的毒力因子.在铁吸收系统中,铁转运体系以及弧菌素合成基因受到AngR、TAF、Fur、反义RNAs、铁离子以及弧菌素等调控因子的调节,这些调控因子分别在转录或后转录水平参与铁吸收系统的正负调控.

海鲈核糖体蛋白L8cDNA的克隆与进化分析(英文)

本文构建了海鲈(Lateolabrax japonicus)头肾全长cDNA文库。PCR方法扩增得到海鲈的核糖体蛋白L8基因,全长848bp,编码257个氨基酸,含有L2及L2-C两个保守区。进化分析结果表明,以L8为参照的进化鉴定结果同经典的分子生物学标准18s鉴定结果十分相似,因此核糖体蛋白L8基因可以作为鉴定物种进化程度的新标准。

由不同接头分子介导的Toll样受体信号通路

Toll样受体(Toll-likereceptors,TLRs)是一类重要的模式识别受体(patternrecognitionreceptors,PRR)。Toll样受体信号通路既激活先天性免疫又对获得性免疫应答的启动发挥重要作用。一类包含TIR结构域的接头分子如MyD88、TIRAP、TRIF、TRAM可募集到不同Toll样受体的TLR胞质区,转导特异的信号通路。依据信号通路中接头分子的不同,Toll样受体信号通路一般分为MyD88依赖型信号通路和MyD88非依赖型/TRIF依赖型信号通路。

鲤鱼Xbp1基因克隆与组织特异性表达分析

利用RT-PCR和RACE技术克隆得到鲤鱼(Cyprinus carpio L.)X盒结合蛋白1(Xbp1)基因编码序列全长。生物信息学分析发现,鲤鱼Xbp1 mRNA的26 bp内含子及其两侧序列能形成典型的茎环结构,其蛋白结构具有1个保守的碱性亮氨酸拉链(bZIP)结构域;系统进化分析表明鲤鱼Xbp1与斑马鱼的亲缘关系最近;实时荧光定量PCR检测结果表明,两种亚型Xbp1 mRNA在鲤鱼不同组织中广泛表达,且未剪接型Xbp1 mRNA的表达量明显高于剪接型。

涡虫的基因沉默作用

涡虫具有惊人的再生能力,作为经典的模型生物应用于后生动物的研究工作。基因沉默是指生物体中特定基因由于外源性或内源性因素的作用而无法表达的现象。目前,RNA干扰作用作为诱导涡虫基因沉默的有效技术,在涡虫发育生物学和分子生物学的研究中发挥重要作用。对涡虫中的基因沉默作用进行了归纳总结,为理解涡虫再生的分子机制提供了基础资料。

RACE法克隆日本三角涡虫β-actin基因

采用cDNA末端快速扩增法(RACE),以日本三角涡虫cDNA为模板扩增β-肌动蛋白(β-actin)基因,对聚合酶链式反应(PCR)产物进行测序和拼接。经与NCBI核酸数据库进行序列比对,结果表明:产物的cDNA长度为1168 bp,开放阅读框ORF长999 bp,编码332个氨基酸,具有actin蛋白家族典型特征。

鲤鱼NOD1基因克隆与组织特异性表达分析

利用RT-PCR技术在鲤鱼(Cyprinus carpio)中首次克隆得到了NOD1基因编码序列全长。生物信息学分析发现,鲤鱼NOD1具有3个保守结构域和相应的保守位点,在进化中与草鱼亲缘关系最近;半定量RT-PCR分析NOD1基因在鲤鱼不同组织中分布发现,NOD1在头肾和血液中表达最高,在肌肉、皮肤和性腺中表达量最少;鳗弧菌(V.anguillarum)刺激后NOD1基因在肝脏、脾脏、头肾和前肠中表达量都有明显上升。研究结果显示NOD1在鲤鱼应对鳗弧菌刺激天然免疫过程中可能发挥着重要作用。

涡虫整体原位杂交方法的优化改良

从原位杂交样品的预处理、固定液选择、杂交温度和时长选择、封闭时长等方面对日本三角涡虫整体原位杂交技术进行优化改良。实验表明,采用NAC处理10 min、w=4%的多聚甲醛溶液固定、56℃杂交48 h以及封闭3 h的改良方法可获得高特异性、低背景且着色清晰的实验结果。

鱼类Mx蛋白研究进展

在脊椎动物中,干扰素诱导产生Mx蛋白,能使细胞进入抗病毒状态.I型干扰素通过与其受体的结合引发JAK-STAT信号转导途径的激活,导致了Mx蛋白及其他抗病毒蛋白的表达.Mx蛋白具有典型的结构特征,包括三联体ATP/GTP结合区、发动蛋白家族结构的特征序列以及亮氨酸拉链结构和定位信号.90年代起,鱼类Mx蛋白的研究逐渐引起人们的重视,并且发现polyI:C诱导表达的Mx蛋白具有部分抗病毒活性.现从Mx蛋白结构特征及其作用机制、鱼类Mx蛋白的表达和活性以及其在鱼类天然免疫研究中的意义3个方面对鱼类Mx蛋白进行了综述.