审判权本质再审视——观电影《真水无香》所感

能动司法是社会主义司法制度本质属性的必然要求,是新形势下人民法院服务经济社会发展大局的必然选择。本文从合理性、必要性和能动司法自身的优越性论述了能动司法的必然性,能动司法的自觉性、前瞻性、有序性、针对性和规范性,使能动司法更加契合为大局服务、为人民司法的时代要求。同时强调说明了能动司法的必要限度,并对其寄予希望。

角鲨烯通过调节细胞铁死亡减轻脑缺血再灌注损伤

目的:研究角鲨烯(SQU)对脑缺血再灌注损伤大鼠脑组织的保护作用及其抗细胞铁死亡的机制。方法:采用大脑中动脉栓塞(MCAO)2 h后复灌建立大鼠脑缺血再灌注损伤模型,术后12 h和72 h采用Longa神经行为学评分标准和TTC染色评价脑损伤。用FeCl3(200μmol/L)诱导PC12细胞建立铁死亡细胞模型,比较SQU和铁死亡抑制剂Fer-1或诱导剂erastin对细胞铁死亡的影响。MTT法测定细胞存活率,荧光显微镜检测线粒体膜电位,发色底物法测定细胞和大鼠脑组织中的铁离子含量、ROS荧光强度、谷胱甘肽(GSH)和丙二醛(MDA)水平,Western blot检测各组脑组织和PC12细胞转铁蛋白受体(TFR1)、脂酰辅酶A合成酶长链家族成员4(ACSL4)、谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)、膜铁转运蛋白1(FPN1)和胱氨酸/半胱氨酸-谷氨酸的转运蛋白轻链亚基SLC7A11的表达。结果:与MCAO模型组比较,各剂量(20、40和80 mg·kg^(-1)·d^(-1))SQU治疗组大鼠的神经行为学评分下降,脑梗死体积减小(P<0.05);在铁死亡细胞模型中,SQU可增加PC12细胞存活率(P<0.05);在相关指标检查中,SQU可下调大鼠脑组织和PC12细胞中TFR1、ACSL4蛋白表达,上调FPN1、SLC7A11和GPX4蛋白的表达,降低细胞铁离子浓度、ROS的荧光强度和MDA水平,增加细胞GSH的含量(P<0.05);SQU能拮抗erastin诱导的PC12细胞铁死亡,并且能增强阻断剂Fer-1抗PC12细胞铁死亡的作用。结论:角鲨烯对脑缺血再灌注损伤大鼠的脑组织有保护作用,机制可能与其降低细胞铁积累、提高细胞抗氧化能力、降低ROS和脂质过氧化水平从而降低细胞铁死亡的发生有关。

灵芝孢子油对抑郁小鼠行为学的影响及其神经生理机制

目的考察灵芝孢子油对慢性轻度不可预见刺激模型小鼠行为学影响及可能的神经生理机制。方法采用13种不同慢性轻度不可预见刺激对雄性BALB/C小鼠连续刺激建立小鼠抑郁模型。从第3周开始连续灌胃给予3个剂量的灵芝孢子油(850、283、141.5 mg·kg^(-1)),盐酸氟西汀(10 mg·kg^(-1))或空白溶媒(植物油)2周后,测定各组小鼠行为学变化,同时采用反相高效液相色谱法(RP-HPLC)测定海马谷氨酸(GLU)和γ-氨基丁酸(GABA),酶联免疫法测定脑源性神经营养因子(BDNF)的含量。结果与模型组比较,灵芝孢子油能增加抑郁小鼠的体重、糖水偏好率和旷场实验得分(P<0.01),缩短悬尾实验和强迫游泳实验的不动时间(P<0.05,P<0.01),明显降低海马GLU的含量(P<0.01),增加BDNF含量(P<0.01),但对GABA含量无影响(P>0.05)。结论灵芝孢子油对抑郁模型小鼠表现出明显的抗抑郁作用,其抗抑郁作用可能与其降低GLU和增加BDNF相关。

角鲨烯对抑郁模型小鼠行为学及谷氨酸毒性通路相关蛋白的影响

考察角鲨烯对慢性轻度不可预见刺激模型小鼠行为学及其谷氨酸毒性通路相关蛋白的影响。采用13种不同刺激[食物剥夺、噪音、闪光、热刺激(45℃)、制动、冷冻(4℃)、摇晃、湿笼、夹尾、饮水剥夺、游泳、电击和异物]对雄性BALB/C小鼠连续刺激35天建立慢性轻度不可预见应激模型。从第3周开始连续灌胃给予3个剂量的角鲨烯(80、40和20 mg·k^(g-1)·d^(-1))3周后,测定各组小鼠行为学变化,采用反相HPLC法测定海马谷氨酸(glutamate,GLU)含量,分光光度法测定超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(glutathioneperoxidase,GSH-Px)活力和丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量,取海马组织进行蛋白免疫印迹方法测定N-甲基-D-天冬氨酸受体亚基ε-2(N-methyl-D-aspartate receptor subunits epsilon-2,NMDAε2)、钙调蛋白激酶Ⅱ(calmodulin kinaseⅡ,Ca MKⅡ)和神经性一氧化氮合酶(neuronal nitric oxide synthase,NOS1)蛋白的表达。与模型组比较,角鲨烯能增加抑郁模型小鼠的体重、糖水偏好率和水平运动和垂直运动次数(P<0.05),缩短悬尾实验和强迫游泳实验的不动时间(P<0.05),降低海马GLU和MDA含量(P<0.05),升高SOD、GSH-Px活力(P<0.05),下调海马NMDAε2、Ca MKⅡ和NOS1蛋白的表达(P>0.05)。综上所述,角鲨烯对抑郁模型小鼠表现出明显的抗抑郁作用,在此过程中引起的氧化应激降低和GLU-NMDAε2-Ca MKⅡ-NOS1通路相关蛋白下调可能与其抗抑郁作用有关。

HPLC-FLD测定不同脑区3种单胺神经递质及其代谢产物含量

目的建立并优化测定脑组织中单胺类神经递质及其代谢产物含量的高效液相色谱荧光检测方法。方法采用Inertsustain C_(18)色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为甲醇和水,其中水相中每升含柠檬酸30 mmol、乙酸钠40 mmol、EDTA-2Na0.2mmol、辛烷磺酸钠0.4mmol(pH=3.8),梯度洗脱,流速为1.0mL·min^(-1),荧光检测波长λex=280nm,λem=330 nm。结果重酒石酸去甲肾上腺素、盐酸多巴胺、盐酸5-羟色胺、3-甲氧基-4-羟基苯乙胺、3,4-二羟基苯乙酸、高香草酸、5-羟吲哚乙酸7种成分在45 min内洗脱完全,分离效果良好;浓度0.9～400.0μg·L^(-1)内线性关系良好,且相关系数>0.99,平均回收率>80%。结论本方法简便、准确、分离度高、重复性好,适用于一般实验室脑组织中单胺类神经递质及其代谢产物的测定。

二甲双胍调节细胞自噬和焦亡发挥脑缺血再灌注损伤保护作用的机制研究

目的研究二甲双胍(metformin,Met)调节细胞自噬和焦亡保护脑缺血再灌注损伤(CIRI)的机制。方法采用线栓法阻塞SD大鼠大脑中动脉2 h后再灌注制备CIRI模型。分两组实验,第1组:采用3个剂量的Met(50、100、200 mg·kg^(-1)·d^(-1),ig)进行Met药效学和血糖评价。第2组:Met对损伤脑组织的细胞自噬和焦亡影响,采用腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)抑制剂化合物C(compound C,Cc,20 mg·kg^(-1)·d^(-1),ip)、自噬抑制剂三甲基腺嘌呤(3-MA,200 mmol·L^(-1)2μL·只-1,icv),caspase-1抑制剂Z-YVAD-FMK(Z-YVAD,8μg·kg-12μL·只-1,icv)分别阻断AMPK通路、自噬和细胞焦亡,考察Met对这些通路和脑损伤的影响。采用Zea-Longa评分评价神经功能,水迷宫实验考查大鼠记忆情况,TTC染色检测脑梗死体积,HE染色观察受损脑组织病理变化,Western blot测定受损脑组织AMPK、p-AMPK、微管相关蛋白1轻链3(LC3-Ⅰ、LC3-Ⅱ)、选择性自噬接头蛋白(p62)、炎症小体NLRP3、pro-caspase-1、半胱氨酸蛋白酶-1(caspase-1)的表达。结果各剂量的Met均使CIRI大鼠的神经功能评分降低,记忆力改善,脑梗死体积减小,脑神经元坏死数降低,对血糖没有影响。Met预处理能显著激活脑中AMPK通路(AMPK表达升高)和自噬活性(LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ升高,p62的表达降低),该效应被Cc抑制,提示Met所致自噬活性升高由AMPK所介导。用3-MA可阻断Met引起的自噬活性和脑损伤缓解作用,对AMPK表达没有影响,说明Met通过自噬发挥保护作用。CIRI大鼠高表达的caspase-1被Z-YVAD阻断,Met与其联用后进一步加强这个作用。说明Met通过抑制炎症小体表达来抑制细胞焦亡。结论Met对缺血再灌注脑损伤有保护作用,其作用机制包括激活AMPK通路,促进细胞自噬,通过自噬去除损伤的线粒体,减少了损伤的线粒体引起的NLRP3炎症小体活化导致的细胞焦亡,从而对缺血再灌注脑损伤起到保护作用。