正交试验设计优化流感病毒纯化工艺

目的通过正交试验优化流感病毒蔗糖密度梯度离心纯化工艺条件。方法以影响流感病毒纯化效果的蔗糖溶液用量、上样量、超速离心时间及上样速度为试验因素,每因素设3个水平,通过正交试验设计9组试验。每组试验流感病毒浓缩液纯化后获得的样品进行血凝滴度及蛋白含量检测,计算血凝滴度收率和蛋白去除率;根据正交试验血凝滴度收率、R值及K值结果,确定最适纯化工艺参数。采用最适纯化工艺对中试3批流感病毒浓缩液进行纯化。结果正交试验结果表明,影响流感病毒纯化效果因素的重要性依次为超速离心时间、蔗糖溶液用量、上样量、上样速度,最适纯化工艺参数为超速离心时间3 h,30%蔗糖溶液用量500 mL/台,上样量为700 mL/台,上样速度为60 m L/min。3批中试病毒浓缩液纯化后的血凝滴度收率均>90%,满足工艺需求。结论采用正交试验获得的流感病毒纯化工艺适合于规模化生产。

四价流感病毒裂解工艺的研究

目的研究流感病毒裂解最佳工艺条件。方法选取BV(NYMC BX-69A)流感病毒毒株,使用BV 1801批纯化液以曲拉通Triton X-100为裂解剂,选取不同浓度、不同裂解时间、不同蛋白质含量等因素,通过每组裂解试验后获得的裂解前后血凝素含量及蛋白质含量,计算血凝素回收率、纯度;40 000倍电镜下观察裂解程度。结果裂解剂曲拉通Triton X-100体积分数为0.5%时,纯度平均值为4.73,血凝素回收率平均值为71.75%;裂解剂曲拉通Triton X-100体积分数为0.7%时,纯度平均值为3.27,血凝素回收率平均值为82.00%;裂解剂曲拉通Triton X-100体积分数为1.0%时,纯度平均值为3.87,血凝素回收率平均值为61.46%。裂解时间为1 h时,纯度平均值为4.17,血凝素回收率平均值为71.75%;裂解时间为2 h时,纯度平均值为3.88,血凝素回收率平均值为82.00%;裂解时间为3 h时,纯度平均值为3.59,血凝素回收率平均值为76.75%。蛋白质浓度为800μg/mL时,纯度平均值为3.80,血凝素回收率平均值为93.00%;蛋白质浓度为1 200μg/mL时,纯度平均值为3.92,血凝素回收率平均值为91.00%;蛋白质浓度为1 600μg/mL时,纯度平均值为4.45,血凝素回收率平均值为77.50%。结论确定了四价流感病毒裂解工艺最佳参数为裂解剂曲拉通Triton X-100体积分数为0.7%,蛋白质含量为800~1 200μg/mL,裂解时间2 h,电镜下观察病毒颗粒完全裂解,血凝素回收率较高,符合工艺标准要求,满足规模化生产。