白色念珠菌3-磷酸甘油醛脱氢酶基因的克隆及表达

目的构建白色念珠菌3-磷酸甘油醛脱氧酶(GAPDH)的表达载体并使其在大肠杆菌中正确表达。方法提取基因组总RNA,PCR方法获得GAPDH基因,构建其原核表达质粒pET-32a(+)-GAPDH,转化大肠杆菌BL21菌株,经IPTG诱导产生蛋白,用SDS-PAGE和Western Blotting检测GAPDH蛋白表达情况。结果构建的白色念珠菌GAPDH基因表达质粒经序列测定证实,与GenBank数据完全一致。双酶切鉴定证实,克隆基因正确插入pET-32a(+)载体。在1.0 mmol·L-1的IPTG浓度诱导下表达,可观察到相对分子量51kDa的蛋白,经SDSPAGE和Western Blotting检测证实为GAPDH蛋白。结论实验成功克隆白色念珠菌GAPDH基因,并在大肠杆菌中正确表达,为白色念珠菌感染的候选疫苗奠定工作基础。

白色念珠菌3-磷酸甘油醛脱氢酶抗体的检测

目的:探讨白色念珠菌感染的患者中血清3-磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)抗体的检测及临床意义。方法:将先前制备的GAPDH蛋白进行纯化并测定蛋白浓度,应用纯化后的蛋白包被96孔板。将临床初步诊断为白念感染,并经实验室唾液培养法检测出白色念珠菌的患者31例,正常人对照10例。采取血清样本,用ELISA法检测GAPDH抗体。结果:病人组的OD值为1.27832±0.227217,对照组的OD值为0.98143±0.094286,病人组明显高于对照组(P<0.05)。结论:GAPDH蛋白在体内是高表达,是患者体内的一种保护性抗体。

阿魏酸钠改善伴糖尿病牙周炎大鼠牙周组织微循环

目的:研究阿魏酸钠对伴糖尿病的牙周炎大鼠牙周组织微循环的影响。方法:利用自主构建的伴糖尿病的牙周炎大鼠模型,检测阿魏酸钠干预1月、3月及血管内皮生长因子(VEGF)抑制剂(阳性对照)处理后牙龈出血指数、牙松动度、牙槽骨吸收值; HE染色检测大鼠牙周组织病理情况;血管渗透性染色检测牙龈血管渗透性;免疫组化检测VEGF及CD34在各组牙周组织内的表达,计算微血管密度(MVD)值。结果:阿魏酸钠干预后,牙龈出血指数、牙松动度明显减轻,牙槽骨丧失程度得到改善,且这种功效随干预时间延长而更加明显。HE染色结果表明,阿魏酸钠干预后,牙龈组织中炎症细胞显著减少,牙周膜排列整齐,可见成骨细胞。血管渗透性染色结果表明,阿魏酸钠干预后,牙龈血管渗透性较未干预组大鼠明显减小。免疫组化检测结果显示,阿魏酸钠干预后MVD计数明显降低,大鼠牙龈中VEGF阳性表达细胞明显减少,着色减弱。VEGF抑制剂处理后能得到与阿魏酸钠干预3月后一致的结果。结论:阿魏酸钠可能是通过抑制牙周组织VEGF表达,来改善伴糖尿病的牙周炎牙周组织微循环。