快速检测十足目虹彩病毒1 RPA-LFD方法的建立及初步应用

为建立一种高效、快速、简便的十足目虹彩病毒1(DIV1)检测方法,本研究以DIV1 ATPase基因为检测靶标,设计特异性引物和探针,采用方阵法优化反应温度和时间,结果显示,重组酶聚合酶扩增技术(RPA)最优反应温度为37℃,时间为15 min,结果观察时间为5 min,检测过程总时长为20 min,初步建立了DIV1的重组酶聚合酶扩增技术结合侧向流试纸条方法(RPA-LFD)。提取其他7种常见虾类病原基因组与DIV1基因组,采用该方法检测,分析其特异性;构建重组质粒标准品p UC57-DIV1,10倍倍比稀释后采用该方法检测,分析其灵敏性;以3种不同浓度的重组质粒标准品为模板进行批间、批内重复性试验。结果显示,该方法能特异性检测DIV1,与虾类其他常见易感病原均无交叉反应;其对重组质粒标准品的检测限为1×10^(1)拷贝/μL;批内和批间重复性试验的检测结果均一致,重复性好。利用该方法与已发表的荧光定量PCR(qPCR)同时检测15份感染DIV1的罗氏沼虾样品及40份临床样品,结果显示,该方法的阳性检测率为69.09%(38/55),阴性率为30.91%(17/55),与q PCR检测结果一致,二者的阳性符合率、阴性符合率、总符合率均为100%。综上所述,本研究建立的RPA-LFD方法检测DIV1具有快速、简便、灵敏度高且特异性强的特点,且不需要精密昂贵的仪器设备,为基层实验室及现场检测提供了可行技术手段。

高校缴费与电子票据集成管理平台研究

随着电子票据的普及步伐越来越快,其优越性能越来越得到人们的认可。提出一种将高校缴费平台、收费系统与电子票据集成的管理平台。该平台可集成各类电子票据的管理,包含税务电子票据和各类非税电子票据,实现缴费、开票的全流程管理。以缴费为流程起点,详细分析缴费完成后申请票据、发送开票请求并返回电子票据的过程及各种数据在各系统之间的流转过程。缴费人可以方便地通过手机、邮箱或平台等渠道获取电子票据。该平台投入使用后,可大大提升高校的票据管理水平,同时节省人力成本,对提高高校财务管理水平具有重要意义。

外泌体miRNA在类风湿关节炎中的发生、发展及临床价值

类风湿关节炎是发病机制复杂,病因尚未完全阐明,目前尚无根治方法。近年来,外泌体在自身免疫性疾病中逐渐受到重视,研究发现外泌体携带的微小RNA(miRNA)在基因表达中具有重要的调节作用,是细胞间物质、信号传递的重要媒介,不仅参与类风湿关节炎的发生、发展,还可作为类风湿关节炎早期诊断的标志物及治疗后反应的评估,有望成为类风湿关节炎的诊断标志物。通过对外泌体miRNA对类风湿关节炎的相关认识进行探讨,希望为miRNA在类风湿关节炎中的发生、发展及潜在的临床价值提供科学依据。

从“肝脾肾”论治类风湿关节炎研究进展

类风湿关节炎(RA)属于中医“痹证”范畴,目前称为“尪痹”“顽痹”的病因不外乎内外两个方面,外因为外感风、寒、湿等邪气,内因为素体虚弱、正气不足、肝脾肾虚。RA的病位在肝脾肾三脏,中医从肝脾肾出发,针对不同患者的证型,辨证论治,个性化治疗,在临床上取得良好疗效。现从中医脏腑辨证中肝脾肾三脏相关理论出发探讨RA发病的病因病机、治法治则、临床研究及基础研究。

IBI和IAA对云南红豆杉等三种植物的影响研究

长梗润楠(Machilus longipedicellata)、云南红豆杉(Taxus yunnanensis)、刺五加(Acanthopanax senticosus)是优良的用材、药用、绿化树种,本文通过L9(34)正交试验,对比不同植物种类在不同浓度吲哚丁酸(IBA)和吲哚乙酸(IAA)影响下愈伤组织的产生情况,结果表明:云南红豆杉的平均愈伤组织产生率极显著的大于刺五加的,刺五加的显著地大于长梗润楠的,IBA激素促进愈伤组织产生;IAA对愈伤组织产生在一定低浓度范围内影响较小,但达到或超过一定浓度时则表现为促进作用,适宜浓度的IBA、IAA溶液及其配比可提高愈伤组织产生率,这一结论可以为长梗润楠、云南红豆杉和刺五加大苗培育提供参考。

循环水养殖系统中高毒力嗜水气单胞菌的鉴定与药敏试验

为探究中华鳖(Pelodiscus sinensis)循环水养殖过程中出现体表穿孔和溃疡的病因,对患病中华鳖的肝、脾、肺和肾等部位取样并进行病原菌分离及革兰氏染色,利用16S rRNA测序和生化鉴定相结合进行细菌鉴定,通过毒力基因PCR检测和人工回感试验评估细菌的致病性,以纸片扩散法评估几种抗生素的抑菌效果,利用琼脂打孔法评估中药提取物的抑菌效果。结果显示,从病鳖的脏器中分离到一株优势菌AH0421,该菌为革兰氏阴性菌,菌体呈短杆状;菌株AH0421与嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)模式菌株ATCC 7966的16S r RNA序列相似性高达99.66%。菌株AH0421能利用葡萄糖、蔗糖和麦芽糖,具有O/129耐受性,其携带act、aerA、aha、ahh、ahp、ahpA、alt、ast、hlyA、lip、ompA毒力基因。回感试验出现与自然发病相似病症,菌株AH0421半致死浓度(LC_(50))为1.7×10^(6)CFU/mL。中药五味子提取物、诺氟沙星、多西环素、恩诺沙星、新霉素以及头孢克肟、头孢曲松等头孢类抗生素对该菌有较强的抑制作用。研究表明,五味子和多数头孢类抗生素可作为治疗菌株AH0421感染的参考药物。

益口槟葛对金黄地鼠健康的影响研究

目的:研究连续嚼食基于葛根制备的槟榔风味咀嚼块益口槟葛4周对金黄地鼠的健康影响,评估益口槟葛的嚼食安全性。方法:将40只金黄地鼠随机分为4组,分别为空白对照组、葛根组、益口槟葛组和槟榔组,每组10只。空白组金黄地鼠用10%水合氯醛以3mL/kg剂量进行麻醉,以保证各组处理条件一致,其他实验组金黄地鼠在麻醉后将葛根、槟葛或槟榔(均切碎呈小颗粒状)塞至两颊,每2天1次,共持续给药4周。每两周用游标卡尺测金黄地鼠口腔开合度;第4周对各组金黄地鼠进行高架十字迷宫实验,评估葛根、益口槟葛和槟榔对金黄地鼠行为能力的影响;饲喂嚼食4周后,处死各组金黄地鼠,检测各主要脏器指数、肝转氨酶活性,评估其生理健康状况;取颊囊组织进行染色,并提取RNA,检测与口腔黏膜下纤维化有关的关键基因表达情况。结果:饲喂4周后,各实验组地鼠摄食量及体质量出现明显下降。槟榔组转氨酶显著升高,肾指数各组间无明显差异。各组地鼠颊囊无明显外观改变,开口度无明显差异,组织染色结果显示各咀嚼组出现一定的黏膜组织改变,槟榔组出现更明显的炎性细胞浸润。mRNA水平上的纤维化相关基因差异表达提示,槟榔咀嚼组出现一定的口腔黏膜下纤维化征兆,益口槟葛组尚不明显。此外,高台十字迷宫实验结果表明,嚼食益口槟葛后,金黄地鼠活动兴奋性显著提高,表现出强烈的探索意识。结论:持续4周嚼食益口槟葛对金黄地鼠的健康无明显影响,未见对口腔的损伤,同时具有较好的神经兴奋作用。

从温病血分清、散、养之法论治系统性红斑狼疮

系统性红斑狼疮是一种自身免疫性疾病,常累及到身体的多个器官组织,严重影响病人的日常工作和生活质量。在临床中一般采用免疫抑制剂、激素等来进行治疗。近年来,中医药在该病治疗上疗效显著,越来越受到临床医师所关注。根据系统性红斑狼疮临床特点,其属于中医“阴阳毒”“红蝴蝶疮”等范畴。文章以中医古籍及相关文献、临床研究为基础,认为温病血分清、散、养之法在分析系统性红斑狼疮的病机及治疗中具有重要意义,可为该病防治提供参考。

BIM技术在机场市政施工管理中的应用

随着国家政策对智能建造的推动,BIM技术作为智能建造体系中最成熟的一部分,已经于众多项目中证明其在施工管理中的应用价值。广州白云机场T3第二航站区市政配套工程包含第二航站区室外工程及路侧市政交通系统,共计7.9 km主进场城市道路1条、回场匝道桥1座、进场隧道5条,在建设过程中存在进场协调难、交叉作业复杂、施工盲点多和进度管控滞后等问题。通过BIM技术在机场市政施工中的应用,发挥BIM技术的模拟性、可视性、协调性等方面的优势,提高施工效率,推进高质量工程建造,对以后的同类型市政项目有参考和借鉴意义。

黄芩总黄酮部位对常见水产致病菌的体外抑制作用

为寻找水产养殖领域天然、安全的抗生素替代品,探索黄芩醇提物对水产致病菌抑制作用的总黄酮部位.采用大孔树脂分离和抑菌圈法确定黄芩抗菌的总黄酮部位,采用紫外分光光度法和HPLC法分别对其进行定量和定性分析,采用琼脂稀释法测定黄芩总黄酮部位对7种水产致病菌的MIC.研究结果表明,黄芩中的黄酮类成分主要富集在30%醇洗和70%醇洗部位,并表现出明显的抑菌活性,其总黄酮含量达75.2%.黄芩总黄酮部位对其中6种水产致病菌的10个菌株均表现出较强的抑制作用,其MIC在0.36~1.43 mg/mL之间.黄芩总黄酮部位具有较广谱的抗水产致病菌作用,在水产养殖业有着广泛的应用前景.

基于肠道菌群探讨中西医治疗强直性脊柱炎的研究进展

强直性脊柱炎属于脊柱关节炎的一种类型。现阶段的研究显示,强直性脊柱炎的发病和疾病进展与肠道菌群生态失调有关,中医药对强直性脊柱炎的治疗及肠道菌群干预具有不错的效果,运动和膳食结构也可通过调控肠道菌群改善肠道屏障功能、调节肠道菌群稳态;此外,肠道菌群代谢组学可深入地表征疾病背后的致病机制,能够发现潜在的新生物标志物以用于强直性脊柱炎的诊治,靶向治疗也可调节肠道微生物群和肠道屏障功能。因此,肠道菌群作为治疗靶点备受关注,故基于肠道菌群综述中西医治疗强直性脊柱炎的相关研究。

龙运光运用侗医治疗类风湿关节炎经验

介绍龙运光运用侗医理论与方法治疗类风湿关节炎的临床经验。龙运光基于类风湿关节炎病因,提倡“对因施药,攻邪为先”,从关节疼痛的不同性质出发,治疗关节剧痛时常用伸筋草、莪术、红花;治疗关节冷痛则以川芎、当归相配伍;对于关节红肿热痛,龙运光常以姜黄、莪术为首要选择;对于关节屈伸不利,则以地血香与七叶莲论治,疗效显著。除此之外,药物的关键配伍与民族医药的使用也是龙运光教授治疗类风湿关节炎的独特优势,可为临床诊治该病提供新的思路。

《金匮要略》利小便法治疗痹证的应用浅析

利小便法适用于水湿之邪停滞机体部位趋于下、偏于里的疾病,以小便利、湿邪除为治疗目标。在运用利小便法治疗痹证的过程中,需根据患者体质、病因和病势的不同辨证施治,正确掌握利小便的应用要点,使邪尽去而津液不伤。基于张仲景相关理论,结合既往临床现实经验,总结出《金匮要略》利小便法治疗痹证的应用,并附医案以佐证。

从气血论治强直性脊柱炎

气血是形成并保持机体生命运动的基础物质,由脏腑功能运转产生。气血和则百病不生,在强直性脊柱炎的疾病发生、发展过程中,气血变化贯穿始终,体现脏腑功能状态,揭示其发病机理。腰背部疼痛是强直性脊柱炎最主要的临床表现,“不通则痛、不荣则痛”,气血的盛衰决定了其疼痛性质,故从气血辨治强直性脊柱炎有深刻的理论依据及较高的临床应用价值。强直性脊柱炎的主要防治要点为调理脏腑气血的盛衰及活血化瘀,以“补益、理气、活血、化瘀”为治则,以突出脏腑气血治疗特色,临床取得良好疗效。

侗医龙运光教授治疗痛风的临证经验

侗医是中国传统医学的组成部分,是侗族人民对医疗经验和知识的总结。侗医传承人龙运光教授根据痛风不同阶段的症状,将其分为急性期、稳定期、久病顽症期,并在各阶段辨证论治。急性期分型为寒湿痹阻证、湿热痹阻证,分别以散寒祛湿、清热祛湿为治法;慢性期分型为痰瘀阻滞、肝肾亏虚,以化痰行瘀、补益肝肾为治法;久病顽症期以攻坚破积、活血化瘀、通阳散结为治法。龙运光教授除应用侗族药物内服以外,还应用侗族独特的民间疗法,如蜂毒等。

侗医特色熏蒸疗法对强直性脊柱炎的治疗探析

侗医药来源于侗族人民的生活及医疗实践活动之中,其常用治疗方法简便,对生活中常见疾病疗效确切。强直性脊柱炎为临床中常见的风湿病之一,以腰背部疼痛为主要特征,属于侗医“腰痛”(给奎)或“腰腿痛”(啃奎霸刚)范畴。侗医药对治疗强直性脊柱炎具有独特的认识,其特有的熏蒸疗法就包括其中,随着时代的发展,这一疗法正变得日益丰富。通过查阅大量侗族医药古籍藏书,走访侗族民间医药人员,广泛收集现代侗医药文献及侗医药资料后,对侗医特色熏浴疗法治疗强直性脊柱炎及常用方药等进行论述,为临床治疗强直性脊柱炎提供治疗新思路及新方法。

泥鳅致病性维氏气单胞菌的分离与鉴定

从患病的泥鳅(Misgurnus anguillicaudatus)肝脏中分离得到优势菌NQ150728。对该菌进行了人工感染试验,并利用VITEK-2全自动微生物鉴定仪及16S rRNA、gyr B序列分析对纯培养细菌进行鉴定。此外,对分离的菌株进行药敏实验。结果显示,人工回感试验泥鳅患病症状同自然发病症状,证明其对泥鳅有致病性。VITEK-2全自动微生物鉴定仪鉴定菌株NQ150728为维氏气单胞菌(Aeromonas veronii)。16S rRNA、gyr B基因序列测定结果及系统发育树的构建也表明其为维氏气单胞菌。药敏试验结果表明,该菌对头孢曲松、利福平、恩诺沙星、四环素、氯霉素、头孢哌酮、氧氟沙星、洛美沙星、克拉霉素、氟罗沙星、头孢噻吩、多西环素、新霉素、头孢他啶、大观霉素、环丙沙星、呋喃妥因、头孢拉定、米诺环素、头孢氨苄、氨曲南、左氟沙星、甲氧嘧啶、甲氧胺嘧啶等24种药物高度敏感。

大口黑鲈弹状病毒的分离培养及其卵黄抗体的制备

本研究从爆发性死亡的大口黑鲈(Micropterus salmoides)鱼苗病样中分离培养1株大口黑鲈弹状病毒(M.salmoides rhabdovirus,MSRV)毒株,采用甲醛灭活大口黑鲈弹状病毒,制备佐剂灭活疫苗,免疫产蛋鸡,收集高免蛋,制备MSRV卵黄抗体,测定其效价、中和效果及对病毒复制和宿主细胞内凝集素基因(intelectin)表达的影响。结果显示,成功利用草鱼(Ctenopharyngodon idellus)卵巢细胞株CO细胞分离培养大口黑鲈鱼弹状病毒,并用于佐剂灭活疫苗的制备;MSRV佐剂灭活疫苗免疫蛋鸡,成功获得MRSV的卵黄抗体,效价为1∶256,稀释度为1∶64时的中和病毒的作用最为明显,中和作用率达38.29%以上,病毒核酸拷贝数明显降低。同时,还可上调细胞内凝集素的表达。研究表明,特异性卵黄抗体对大口黑鲈弹状病毒具有明显的中和效果,为后续卵黄抗体作为免疫制剂的应用奠定了基础。

一例异育银鲫(Carassius auratus gibelio)暴发性出血病病原分析

2016年6月,江苏某异育银鲫(Carassius auratus gibelio)养殖场暴发一种传染性急性出血病,造成养殖银鲫大量死亡。为分析此次疾病病因及流行规律,本研究从发病养殖场采集患出血病的异育银鲫,从细菌、病毒及寄生虫三个方面对病原进行了分析。采用病原菌分离、组织病理学观察、超薄切片电镜观察、病毒核酸分析、回感实验等对病原进行鉴定。结果显示从发病鲫鱼体内分离到病毒一株,未发现寄生虫及细菌感染。经测序及序列分析,该病毒为鲤疱疹病毒Ⅱ型(Cyprinidherpesvirus 2,CyHV-2)病毒,组织病理学观察结果显示患病鱼的鳃和肾脏有明显病变,电镜下可观察到病鱼脾脏组织有带囊膜的球形病毒,囊膜直径约为170-200nm,病毒衣壳直径约为110-120nm,核心直径约为60nm,用组织匀浆感染鲫鱼囊胚细胞系(CGB)可稳定地观察到典型的细胞病变,用患病鱼组织匀浆液人工感染异育银鲫的死亡率高达100%,荧光定量PCR检测到该病毒可感染多器官,其中以脾脏中病毒含量最高,其次是脑,肝脏中最少。本研究可为CyHV-2的诊断防控及疫苗研制提供资料。

两种荧光定量PCR方法检测猪瘟病毒的比较及应用

根据猪瘟病毒(Classical swine fever virus,CSFV)5端非编码区保守区域,设计猪瘟病毒特异性的引物和探针,建立了基于SYBR Green和TaqMan探针的两种荧光定量PCR检测方法。灵敏性和特异性试验结果表明,两种方法能够特异性地检测出不同型的猪瘟病毒,而对同属的牛病毒性腹泻病病毒以及其它一些主要猪病病原检测结果均为阴性。两种方法对猪瘟病毒C株的检测下限均为101TCID50,均高于常规的套式PCR。用携带该基因片段的重组质粒为模板进行检测,SYBR Green方法的检测下限为3×100copies,比TaqMan探针方法更加灵敏(3×101copies)。应用建立的SYBR Green方法对2009年采集于浙江地区不同猪场的20份病猪样品进行CSFV检测,有8份样品为阳性,与套式PCR方法检测结果一致。进一步应用SYBR Green方法对不同感染阶段细胞内病毒RNA复制水平进行检测,与病毒滴度的结果基本一致。因此,本研究建立的SYBRGreen荧光定量PCR检测方法能够应用于组织和培养细胞中猪瘟病毒的检测。