应用生物素标记的DNA探针通过菌落杂交试验检测沙门氏菌

本实验应用Bio-11-dUTP标记的两个沙门氏菌属特异性核酸探针(Bio-8-0kb探针和Bio-3.4kb探针)成功地通过菌落杂交试验检测了60个血清型中的100株沙门氏菌。生长在硝酸纤维素滤膜上的菌落,经过溶菌酶,蛋白酶K、RNase及苯酚-氯仿严格的处理程序处理后,可以有效地消除内源性生物素、糖蛋白及生物素类似物等易与链亲和素结合产生非特异性反应的物质,从而获得了特异的杂交结果。此试验有利于使沙门氏菌核酸探针检测技术在基层得到推广应用。

鹌鹑加工新工艺的研究

本实验以法国巨型肉鹌鹑为研究对象,针对鹌鹑个体小、肌肉薄的特点,研究出了新的鹌鹑熟食品加工工艺流程,并对最佳工艺条件进行了探索,比较了新旧两种加工工艺对鹌鹑制品出品率及营养成分的影响.结果表明,用浓郁型腌制液(4℃)腌制10～12小时,煮沸10分钟,植物油(160℃～180℃)油炸1.5～2.0分钟,为最佳工艺条件.新工艺加工后鹌肉灰分、无机元素、维生素损失均比传统工艺少.新工艺可有效地保存鹌肉的特有风味,同时嫩度、口感明显改善.

应用斑点酶联免疫吸附试验诊断猪旋毛虫病的研究

利用差速离心,TritonX-100处理,超速离心,在国内首次制得旋毛虫S_3抗原,其抗原性优于ES抗原。用该抗原建立诊断猪旋毛虫病的Dot-ELISA比常规ELISA敏感,与猪囊虫血清、猪弓形虫血清无交叉反应。对70份感染猪旋毛虫的阳性血清进行Dot-ELISA和常规ELISA检测,分别检出68份和66份,阳性符合率分别为97.1％和94.3％。对182份采自非疫区的被检仔猪血清进行检测,均末出现阳性,阴性符合率为100％。结果表明,Dot-ELISA除和常规ELISA一样具有敏感性高、特异性强、稳定性好等优点外,还具有快速简便的优点。

沙门氏菌特异性DNA探针的构建及初步应用试验

提取鼠伤寒沙门氏菌23566的染色体DNA,然后用核酸内切酶BamHⅠ或HindⅢ进行消化。将消化产物连接到质粒载体pBR325中,并转化大肠杆菌宿主HB101,最终获得51个重组克隆株。通过杂交试验表明,重组质粒pLS 2和pLS 3中的嵌入片段(分别约为3.0 kb和3.4 kb)能分别与被试验的33群72种146株沙门氏菌中的143株和144株发生杂交反应,而不与试验的51株肠道非沙门氏菌杂交。用这两个探针检测从临床和食品中新分离的29株沙门氏菌,均发生了阳性杂交反应;而与分离的19株非沙门氏菌未发生杂交反应。

T-2毒素的生物鉴定、提取及对动物的毒性

用家兔皮肤毒性试验测得三线镰刀菌污染玉米中T—2毒素的含量约为1.8g/kg试验灵敏度为0.08μg.此霉玉米经提取纯化后得白色针状结晶,根据毒素结晶的熔点、C、H元素含量、红外光谱、质谱碎片峰及1H核磁共振谱确证为T-2毒素,纯度为95.84%.毒素对锦鲤鱼苗72、96、120的LD_(50)分别为0.0847±0.0034ppm,0.0760±0.0053ppm,0.0705±0.0036ppm.每天连续口服毒素0.5～1mg/kg体重,可引起犬的出血性综合征,表现为呕吐、便血,尸检见肠道出血坏死,且充满大量的血液;组织学检查表明,肠粘膜广泛的出血坏死,牌小体萎缩和数量减少,骨髓造血细胞消失.将毒素给小鼠连续灌胃(2mg/kg体重),可引起骨髓核细胞数下降,但停毒后,逐渐恢复到正常水平.

人工流产刮宫物中绒毛膜促性腺激素的提取和纯化

以健康妇女人工流产的刮宫物为原料,经50%乙醇溶液抽提、醋酸钠50%乙醇缓冲溶液分级沉淀、硫酸铵分段盐析,最后用DEAE—纤维素柱层析纯化.终产品放免活性为3500IU/mg,产品总回收率为40～50mg‰.终产品经PAG圆盘电泳分析,只出现1条电泳区带,并与纯度相近的尿HCG产品的电泳特性一致.

肌旋毛虫功能性抗原实验研究

本实验应用生化萃取技术和体外人工培养技术,制备了肌旋毛虫匀浆(HO)抗原和排泄—分泌物(ES)抗原,并对两种不同来源抗原的部分生化特性和免疫学特性进行了比较。HO抗原通过SephadexG—200又分为第一峰(FP)和第二峰(SP)。在5～20％的聚丙烯酰胺梯度凝胶电泳和薄层聚丙烯酰胺凝胶等电聚焦电泳上,ES和FP抗原出现许多条电泳区带。ES、FP和HO抗原对小鼠的保护力(肌幼虫减少率)分别为78％,76％和46％。

脂肪酶产生菌的筛选、诱变及产酶条件的研究

从长春市油脂厂采集的土壤样品中分离到1株脂肪酶活力较高的白地霉1522(其发酵液酶活力为35U/mL)。以此为出发菌株,经紫外线、氯化锂、盐酸羟胺、亚硝基胍等诱变筛选后,获得1株高活力脂肪酶产生菌N79(其发酵液酶活力达80U/mL)。对诱变株N79最适培养条件的研究表明,其最适培养基组成为:蛋白胨4%,山梨醇0.75%,橄榄油0.5%,MgSO4·7H2O 0.1%;产酶最适发酵条件是,培养液起始pH为6.0～6.5,发酵温度为26～30℃,通气量为每250mL三角烧瓶中盛培养液30mL,发醇时间为32～36h。在量适培养条件下,其发酵液酶活力可达到105-115U/mL。白地霉N79的发酵液经硫酸铵盐析制得脂肪酶粗制品,它在聚乙烯醇橄榄油乳化液系统中,水解橄榄油的最适pH为7.8,最适温度为42℃,在pH4-8、4℃下存放24h及pH7.5、40℃下保温15min,酶活力不变。

旋毛虫S_3抗原的提取及其抗独特型抗体制备

通过匀浆、差速离心等方法提取旋毛虫肌幼虫S3抗原,并对其进行了琼脂双向双扩散、免疫电泳、聚丙烯酰胺梯度凝胶电泳、薄层等电聚焦电泳、肌幼虫孵化试验等免疫学和生化特性分析。以S3抗原免疫兔,再将其抗体免疫同种异体兔,经亲和层析共获得3株抗独特型抗体(R1、R2、R3)。固相放射免疫竞争抑制试验表明,随着抗独特型抗体浓度的升高,其对125I标记的S3抗原-兔Ab1系统及人Ab1系统抑制率均升高,其中R1株对以上两系统的最高抑制率分别达92%和68%。进而证实,3株抗独特型抗体可变区结构与旋毛虫肌幼虫S抗原的决定簇或其邻近结构是相似的,为种间交叉反应型抗独特型抗体。

抗旋毛虫单克隆抗体细胞林的建立及其特性鉴定

为筛选旋毛虫保护性抗原,建立了4株分泌抗旋毛虫McAb的细胞株。经连续培养30余代,仍稳定地分泌抗体。其中,2G3和2C10的靶抗原为旋毛虫幼虫表膜。免疫球蛋白 型及亚 鉴定表明,2G3和2C10为IgG_1,1D5为IgG_3,1C9为IgM。除2C10和IC9对伊氏锥虫可溶性抗原呈现阳性反应外,未见对猪圆线虫、猪囊尾蚴、伊氏锥虫表膜抗原和正常猪肉反应。经ELISA测定,2G3、2C10、1D5、1C9均可与施毛虫幼虫可溶性抗原作用,其腹水效价分别为1:50000、1:10000、1:1000、1:800。各McAb均与旋毛虫幼虫排泄分泌物抗原(ES抗原)作用,经ELISA测定表明,2G3腹水效价达1:320000。

肌旋毛虫免疫亲和层析抗原的制备及其特性

以Sepharose 4B为载体,兔抗旋毛虫多克隆抗体为配体,纯化了旋毛虫的S_3抗原,得到亲和层析抗原.本实验结果表明,存在于S_3抗原中的主要抗原成分,同样存在于亲和层析抗原中,亲和层析抗原的分子量范围在103000～40000 u之间,等电点范围在pH4.7～8.8之间.亲和层析抗原经转印后,在硝酸纤维素膜上至少有7条显色带,其中分子量为48000 u,50000u,58000u和87000u的4种蛋白的抗原性较强,而以分子量为48000u的蛋白抗原性最强.

空间条件对黄曲霉、米曲霉的诱变作用

为提高黄曲霉、米曲霉的蛋白酶活性及血粉发酵效果,将这两株菌的孢子于1988年8月卫星 搭载运行8d,然后对其诱变株的形态学、生理特性及发酵血粉的营养价值进行了观察和测定。结果,诱变 后的菌株生长速度快,孢子成熟早,米曲霉有10个菌落较对照组有明显变化。诱变后,黄曲霉碱性蛋白酶 活性平均提高230%,米曲霉平均提高200%;米曲霉中性蛋白酶活性平均提高223%。

鹌鹑熟食品加工工艺的改进及其效果(摘要)

鹌鹑肉营养丰富,口味鲜美.但目前多用传统禽类食品加工方法烹调,其出品率低,营养损失严重.本实验以法国巨型肉鹌鹑为研究对象,针对鹌鹑个体小、肌肉薄的特点,对传统的禽类食品加工工艺和配方进行了改进,筛选出了新的工艺流程,即白条鹌鹑腌制→皮肤嫩化→烫煮→油炸,并对最佳工艺条件进行了探索,比较了新旧工艺对鹌鹑制品出品率及营养成分的影响.

缩短牛蛙冬眠期的实验研究

牛蛙(Rana catesbeiana Shaw)是一种大型食用蛙,我国自1958年首次从日本引进以来,牛蛙养殖业有了很大发展.牛蛙在冬眠期,生长停滞甚至体重下降.本实验旨在通过让牛蛙在塑料棚内越冬,缩短冬眠期,提高成活率,以取得更大的经济效益.