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O型口蹄疫病毒VP1-2A基因及多表位片段在毕赤酵母中的表达 被引量:1
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作者 袭莹 朱战波 +6 位作者 金宁一 胡博 任静强 刘存霞 张军 王鹤 鲁会军 《黑龙江八一农垦大学学报》 2010年第5期60-63,共4页
利用毕赤酵母表达系统串联表达O型口蹄疫病毒(FMDV)VP1-2A基因及O型FMDV多表位片段(CTE),将O型FMDVvp1基因和CTE多表位片段克隆到毕赤酵母分泌性表达载体pPIC9K中,构建重组表达载体pPIC9K-VP1-2A-CTE并测序。经SalI线性化后,通过电击转... 利用毕赤酵母表达系统串联表达O型口蹄疫病毒(FMDV)VP1-2A基因及O型FMDV多表位片段(CTE),将O型FMDVvp1基因和CTE多表位片段克隆到毕赤酵母分泌性表达载体pPIC9K中,构建重组表达载体pPIC9K-VP1-2A-CTE并测序。经SalI线性化后,通过电击转化法将重组质粒导入毕赤酵母GS115中,并对表达产物用SDS-PAGE和Western blot进行分析。重组质粒通过电转进入毕赤酵母后,能表达相对分子量为41.8KD(CTE)和26.5KD(VP1-2A)的蛋白,经Western blot分析,两种蛋白均具有抗原性。在毕赤酵母中成功地表达O型FMDVVP1-2A蛋白和多表位片段(CTE),为研制新型口蹄疫的基因工程疫苗奠定了基础。 展开更多
关键词 口蹄疫 VP1-2A基因 多表位片段(CTE) 毕赤酵母 分泌表达
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健康仔猪肠道乳杆菌黑龙江地方株的鉴定与种属分析 被引量:6
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作者 刘宇 朱战波 +4 位作者 赵星成 袭莹 王洪伟 崔玉东 杨焕民 《中国微生态学杂志》 CAS CSCD 2008年第3期210-212,共3页
为了从健康仔猪肠道中分离筛选用于研制微生态制剂的乳酸杆菌菌株,选择黑龙江省大庆、哈尔滨及宝泉岭地区部分猪场,采集12-60日龄健康仔猪肠道粪样64份。选用MRS乳酸杆菌专用培养基分离培养乳酸杆菌,通过分离株的形态特征和培养特性筛... 为了从健康仔猪肠道中分离筛选用于研制微生态制剂的乳酸杆菌菌株,选择黑龙江省大庆、哈尔滨及宝泉岭地区部分猪场,采集12-60日龄健康仔猪肠道粪样64份。选用MRS乳酸杆菌专用培养基分离培养乳酸杆菌,通过分离株的形态特征和培养特性筛选出革兰阳性,厌氧,无芽胞杆菌48株。再通过生化试验鉴定和PCR种属分析,确定18株为乳酸杆菌。其中,罗伊乳杆菌7株,嗜酸乳杆菌5株,约氏乳杆菌2株,短乳杆菌1株,干酪乳杆菌假植物亚种1株,植物乳杆菌1株,詹氏乳杆菌1株。 展开更多
关键词 仔猪 乳酸杆菌 生理生化鉴定 PCR鉴定
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复合活菌制剂对断奶仔猪生长性能及血清溶菌酶含量的影响 被引量:18
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作者 刘宇 朱战波 +8 位作者 孙秀军 王玉海 车车 谭磊 崔莉 张军 袭莹 李冬野 杨焕民 《中国微生态学杂志》 CAS CSCD 2010年第9期784-787,共4页
目的观察复合活菌制剂对断奶仔猪生长性能及血清溶菌酶含量的影响。方法选择长白二元杂交断奶仔猪90头进行实验,断奶日龄为35 d。共分为5个组,每组设3个重复,每个重复随机选取健康仔猪6头。实验组一:饲喂基础日粮+0.1%复合制剂(纳豆杆菌... 目的观察复合活菌制剂对断奶仔猪生长性能及血清溶菌酶含量的影响。方法选择长白二元杂交断奶仔猪90头进行实验,断奶日龄为35 d。共分为5个组,每组设3个重复,每个重复随机选取健康仔猪6头。实验组一:饲喂基础日粮+0.1%复合制剂(纳豆杆菌,双歧杆菌,罗伊乳杆菌),实验组二:饲喂基础日粮+0.1%复合制剂(纳豆杆菌,双歧杆菌,干酪乳杆菌),实验组三:饲喂基础日粮+0.1%复合制剂(纳豆杆菌,双歧杆菌,嗜酸乳杆菌),实验组四:饲喂基础日粮+0.1%复合制剂(纳豆杆菌,双歧杆菌,罗伊乳杆菌,干酪乳杆菌,嗜酸乳杆菌),对照组:饲喂基础日粮。其中复合制剂中益生菌活菌数为109CFU/g。饲养30 d后观察复合活菌制剂对断奶仔猪生长性能及血清溶菌酶含量的影响。结果在日增重、饲料效率及血清溶菌酶方面,实验组一和二显著高于对照组(P<0.05);在腹泻率方面,实验组均显著低于对照组(P<0.05)。结论在仔猪日粮中添加复合活菌制剂可提高每头断奶仔猪平均日增重及饲料效率,降低腹泻的发病率,且增高仔猪血清溶菌酶含量,提高仔猪的免疫机能,从而提高经济效益。 展开更多
关键词 复合活菌制剂 断奶仔猪 生长性能 血清溶菌酶
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表达新城疫病毒F基因的重组鸡痘病毒实时荧光定量PCR检测方法的建立 被引量:2
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作者 任静强 朱战波 +8 位作者 贾鹏 赵权 袭莹 刘存霞 龙川 杜寿文 岳云强 鲁会军 金宁一 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2011年第3期273-279,共7页
采用荧光染料SYBR Green渗入法,通过对real-time PCR反应条件进行优化,建立了real-timePCR检测方法,用该方法定量分析新城疫病毒(NDV)F基因在重组鸡痘病毒(rFPV-F-VP0)第1、5、10、15、20代次中的表达整合情况。结果表明,建立的标准曲... 采用荧光染料SYBR Green渗入法,通过对real-time PCR反应条件进行优化,建立了real-timePCR检测方法,用该方法定量分析新城疫病毒(NDV)F基因在重组鸡痘病毒(rFPV-F-VP0)第1、5、10、15、20代次中的表达整合情况。结果表明,建立的标准曲线呈现良好的重复性和特异性,与模板浓度呈现良好的线性关系。在线性浓度范围内,随着模板量的减少,其对应的Ct值相应增大,0.99<相关系数(r2)<1,0.8<扩增效率(E)<1.2,熔解曲线为单一特征峰型。本试验精确定量了外源基因在重组鸡痘病毒中的表达水平,为阐明重组鸡痘病毒的表达机理提供了理论基础。 展开更多
关键词 新城疫病毒 F基因 SYBR Green 实时荧光定量聚合酶链反应 鸡痘病毒 基因表达
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Asia 1型FMDV复合多表位亚单位疫苗在毕赤酵母中的表达及其免疫原性 被引量:1
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作者 胡博 鲁会军 +11 位作者 李霄 叶明 朱战波 杜寿文 袭莹 王婧 韩佳丽 李洋 金扩世 田明尧 李昌 金宁一 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2010年第11期1217-1221,1225,共6页
目的构建以霍乱毒素B亚单位(Cholera toxin B subunit,CTB)为分子佐剂的Asia1型口蹄疫病毒(Foot-and-mouth disease virus,FMDV)复合多表位亚单位疫苗,在毕赤酵母中进行表达,并评价其免疫原性。方法构建毕赤酵母表达质粒pPIC9K-P1/2A-CT... 目的构建以霍乱毒素B亚单位(Cholera toxin B subunit,CTB)为分子佐剂的Asia1型口蹄疫病毒(Foot-and-mouth disease virus,FMDV)复合多表位亚单位疫苗,在毕赤酵母中进行表达,并评价其免疫原性。方法构建毕赤酵母表达质粒pPIC9K-P1/2A-CTB-TEpi,转化至毕赤酵母GS115中,甲醇诱导表达,表达产物经硫酸铵沉淀法纯化后,进行SDS-PAGE和Western blot分析。将纯化的P1/2A-CTB-TEpi蛋白和FMD灭活疫苗分别免疫BALB/c小鼠,以注射PBS作为对照,分别于0、21d各免疫1次。每周尾静脉采血,分离血清,ELISA法检测血清抗体水平;第2次免疫后10d,处死小鼠,分离脾脏淋巴细胞,进行淋巴细胞增殖试验和IFNγELISPOT检测。结果目的蛋白在毕赤酵母中经诱导表达后可分泌到培养上清中,在相对分子质量约为82600(P1/2A)和40500(CTB-TEpi)处可见2条特异性蛋白表达条带,占上清液中可溶蛋白的21%。纯化后的目的蛋白P1/2A和CTB-TEpi的比例约为1∶2,且具有良好的反应原性。P1/2A-CTB-TEpi蛋白免疫小鼠产生了较强的体液免疫和细胞免疫反应,其特异性血清抗体水平与灭活疫苗组差异无统计学意义(P>0.05),而淋巴细胞增殖水平和IFNγ分泌水平显著高于灭活疫苗组(P<0.01)。结论构建了以CTB为分子佐剂的Asia1型FMDV复合多表位亚单位疫苗,其免疫原性良好,为FMD多表位疫苗和亚单位疫苗的研究奠定了基础。 展开更多
关键词 口蹄疫病毒 多表位疫苗 毕赤酵母 免疫原性
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复合活菌制剂对断奶仔猪生长性能及血清溶菌酶含量的影响 被引量:1
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作者 刘宇 朱战波 +8 位作者 车车 谭磊 崔莉 张军 袭莹 李冬野 杨焕民 孙秀军 王玉海 《饲料与畜牧(新饲料)》 2011年第7期14-17,共4页
选择长白二元杂交断奶仔猪90头进行试验,断奶日龄为35d。共分为五个组,每组设3个重复,每个重复随机选取健康仔猪6头。试验1组:饲喂基础日粮+0.1%复合制剂(纳豆杆菌、双歧杆菌、罗伊氏乳杆菌);试验2组:饲喂基础日粮+0.1%复合制剂(纳豆杆... 选择长白二元杂交断奶仔猪90头进行试验,断奶日龄为35d。共分为五个组,每组设3个重复,每个重复随机选取健康仔猪6头。试验1组:饲喂基础日粮+0.1%复合制剂(纳豆杆菌、双歧杆菌、罗伊氏乳杆菌);试验2组:饲喂基础日粮+0.1%复合制剂(纳豆杆菌、双歧杆菌、干酪乳杆菌);试验3组:饲喂基础日粮+0.1%复合制剂(纳豆杆菌、双歧杆菌、嗜酸乳杆菌);试验4组:饲喂基础日粮+0.1%复合制剂(纳豆杆菌、双歧杆菌、罗伊氏乳杆菌、干酪乳杆菌、嗜酸乳杆菌)。对照组饲喂基础日粮。其中复合制剂中益生菌活菌数为l09cfu/g。饲养30d后观察复合活菌制剂对断奶仔猪生长性能及血清溶菌酶含量的影响。结果:在日增重、饲料效率及血清溶菌酶方面,试验1组和2组显著高于对照组(P<0.05);在腹泻率方面,试验组均显著低于对照组(P<0.05)。研究表明,在仔猪日粮中添加复合活菌制剂可提高每头断奶仔猪平均日增重及饲料效率,降低腹泻的发病率,且增高了仔猪血清溶菌酶含量,提高了仔猪的免疫机能,从而提高了经济效益。 展开更多
关键词 复合活菌制剂 断奶仔猪 生长性能 血清溶菌酶
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O型FMDV复合多表位在毕赤酵母中的表达与鉴定
7
作者 胡博 李昌 +9 位作者 王浩然 鲁会军 李霄 朱战波 杜寿文 叶明 袭莹 韩佳丽 王婧 金宁一 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第12期1634-1637,1641,共5页
将O型FMDV复合多表位CTB-TEpi与FMDV结构基因P1-2A(P1/2A)连入毕赤酵母表达载体pPIC9K,经SacⅠ线性化后,利用电转化法整合到毕赤酵母(Pichia pastoris)基因组中。通过G418浓度梯度筛选得到高拷贝阳性转化子GS115/P1/2A-CTB-TEpi。经甲... 将O型FMDV复合多表位CTB-TEpi与FMDV结构基因P1-2A(P1/2A)连入毕赤酵母表达载体pPIC9K,经SacⅠ线性化后,利用电转化法整合到毕赤酵母(Pichia pastoris)基因组中。通过G418浓度梯度筛选得到高拷贝阳性转化子GS115/P1/2A-CTB-TEpi。经甲醇诱导表达后,目的蛋白在毕赤酵母中获得成功表达,并在FMDV自裂解片段2A的作用下裂解为P1/2A和CTB-TEpi 2个片段,相对分子质量分别为81 800和39 400,占上清液中可溶蛋白的比例为25%。Western blotting分析表明,表达蛋白的2部分均可被抗O型FMDV的血清所识别,而且含有CTB片段的CTB-TEpi条带可以被兔抗霍乱毒素血清识别,证明表达的蛋白具有抗原活性,为进一步研究O型FMDV复合多表位亚单位疫苗的免疫效果打下了基础。 展开更多
关键词 O型口蹄疫病毒 毕赤酵母 亚单位疫苗
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