邻苯二甲酸酐修饰卵清蛋白体外抗单纯疱疹病毒Ⅱ型的活性研究

目的研究邻苯二甲酸酐修饰卵清蛋白(3-Hydroxyphthalic anhydride-modified ovalbumin,HP-OVA)体外对抗单纯疱疹病毒Ⅱ型(HSV-2)的活性。方法采用化学修饰的方法将3-羟基-邻苯二甲酸酐(HP)修饰卵清蛋白(OVA),合成酸酐修饰蛋白HP-OVA;选用HSV-2333病毒株及非洲绿猴肾细胞(Vero细胞)靶细胞,采用MTT比色法检测HP-OVA的体外抗HSV-2病毒活性及其对Vero细胞的体外细胞毒性;镜检观察HP-OVA对17株阴道收集的乳酸杆菌的抑菌作用。结果酸酐修饰卵清蛋白HP-OVA对HSV-2病毒具有明显抑制作用,其IC50为23.56±8.33μg/ml,且其对病毒作用靶细胞毒性较低,CC50>1mg/ml,对17株阴道乳酸杆菌均无明显抑制作用,MIC>1mg/ml。结论酸酐修饰蛋白HP-OVA体外有较好的抗HSV-2病毒的活性,有望被开发为预防性传播性疾病的候选杀微生物剂。

Transwell技术模拟人类免疫缺陷病毒感染黏膜及其他屏障系统的应用

近年来,由于Transwell小室能在体外模拟机体许多黏膜及生物屏障系统,如人生殖道黏膜、直肠组织黏膜以及血-脑屏障、血-视网膜屏障等,重现人类免疫缺陷病毒(HIV)感染机体的过程,对HIV感染机体的机制研究极为重要,因而被广泛应用。目前,尚无有效抗HIV疫苗问世,因此开发能阻断HIV性传播的药物是有效途径之一。应用Transwell技术深入研究HIV穿透黏膜及屏障系统感染机体的机制,也能为HIV防治药物的研发寻找新的作用靶点。本文就近年来Transwell技术在HIV感染黏膜及其他屏障系统中的应用作一综述。

作用于HIV-1gp120小分子HIV进入抑制剂NC-2的虚拟筛选及其作用机制

目的基于中和抗体VRC01与HIV-1 gp120的结合模式,利用计算机虚拟筛选,从IBS天然产物数据库中筛选靶向HIV-1gp120的小分子HIV-1进入抑制剂,并对其抗病毒活性和机制进行研究。方法运用MM-PBSA方法计算候选化合物与HIV-1gp120结合后自由能的变化;利用HIV-1假病毒、活病毒技术及细胞融合实验,检测化合物抑制HIV-1感染的活性;XTT比色法检测化合物对细胞的毒性;采用酶联免疫吸附测定法(ELISA)研究化合物体外抗病毒活性的机理。结果利用计算机从40 000个化合物中虚拟筛选出19个与gp120结合后自由能降低较大的小分子化合物,其中NC-2具有抑制HIV-1感染和细胞融合的活性,其抑制HIV-1实验株IIIB的IC50是1.95±0.44μmol/L,抑制HIV-1JRFL假病毒的IC50是10.58±0.13μmol/L。酶联免疫吸附法结果表明NC-2体外能抑制HIV-1 gp120与CD4的结合,但不抑制HIV-1 gp41六螺旋的形成。结论该计算机虚拟筛选的方法可为开发作用于HIV-1 gp120的小分子进入抑制剂提供参考。同时,通过计算机辅助设计加病毒活性筛选的方法,得到一个新颖结构的HIV进入抑制剂NC-2。

以艾滋病病毒gp41为靶点的芳基苯甲酸类化合物的设计、合成及活性评价

目的以艾滋病病毒(HIV)gp41为作用靶点,设计合成了12个含芳基取代的苯甲酸类化合物,并对其进行抗HIV活性测试。方法以卤代苯甲酸或间羧基苯硼酸为原料,通过Suzuki-Miyaura偶连反应及Knoevenagel缩合反应,引入含取代基的芳环及芳杂环。ELISA法检测其抑制HIV gp41六螺旋束形成的活性。荧光素酶法检测化合物抗HIV活性。结果化合物结构经NMR、MS得到确认,其中5个化合物(7b、7c、7d、7e、7g)具有抑制HIV gp41六螺旋束形成的活性,其中7d活性最强。该化合物能抑制HIV-1 SF33病毒株的复制,其IC50为20μmol/L。结论合成的芳基苯甲酸类化合物7d能通过抑制HIV gp41六螺旋束结构的形成来抑制HIV的复制。

E3泛素连接酶PARK2对人脑胶质瘤细胞侵袭与迁移能力的影响

目的探讨E3泛素连接酶PARK2影响脑胶质瘤细胞侵袭和迁移作用。方法采用免疫印迹法检测PARK2蛋白在脑胶质瘤细胞系中的表达情况;选用逆转录病毒载体p BABE-puro vector构建PARK2-WT(野生型)的稳定过表达细胞系;采用细胞划痕实验观察过表达PARK2后U251细胞迁移能力的变化;Transwell侵袭实验观察细胞侵袭能力的变化;Real-time PCR检测MMP1、MMP12和MMP13基因表达水平。结果筛选脑胶质瘤细胞中PARK2蛋白表达水平,U251和T98G蛋白表达水平较低,并构建U251和T98G细胞上PARK2过表达株;脑胶质瘤细胞中PARK2过表达后,细胞迁移能力显著降低(P<0.01);U251和T98G细胞中PARK2过表达组相较于转染空载体的对照组穿过Matrigel基质胶及滤膜的细胞数明显减少,差异有统计学意义(P<0.01)。结论过表达PARK2可以抑制脑胶质瘤细胞的侵袭和迁移能力。

精液源性病毒感染增强因子SEVI-HIV性传播中的重要因素

精液源性病毒增强因子(Semen-derived enhancer of viral infection,SEVI)是前列腺酸性磷酸酶(Prostatic acidphosphatase,PAP)位于PAP248-286的多肽片段,可增强人免疫缺陷病毒(Human immunodeficiency virus,HIV)的感染性。SEVI促进HIV感染的作用机制包括:①富含阳离子氨基酸残基的SEVI能通过静电作用降低HIV病毒颗粒与靶细胞之间的静电排斥;②SEVI在人体液中呈无序状态,利于病毒与靶细胞膜相互作用;③SEVI直接捕获HIV颗粒,提高病毒在靶细胞表面沉降速度,促进病毒与靶细胞的吸附和融合。目前已发现能抑制SEVI活性的物质包括:绿茶来源的EGCG(没食子儿茶素没食子酸酯)、氨基喹啉类小分子化合物Surfen、ThT类似物BTA-EG6等,能通过阻断HIV与SEVI结合或阻止其淀粉样纤维的形成,降低SEVI的病毒感染增强作用。研究SEVI的生物学特性及作用机制对防治HIV感染具有较为重要的指导意义。