肝移植急性排斥反应的生化诊断

目的 总结肝移植术后急性排斥反应 (AR)的诊断经验。方法 回顾性分析 70例肝移植患者术后AR的发生率 ;分析AR组、保存 再灌注损伤 (PRI)组移植肝活检前患者生化检测值。结果 42例次移植肝活检 ,17次发生AR ,2 2次为PRI ;3次为药物中毒。生化检测AR组 ,随发病进展 ,ALT、AST逐渐增高 ,成正相关 (P <0 .0 5 ) ;PRI组随发病进展 ,ALT、AST逐渐降低 ,成负相关 (P <0 .0 5 )。结论 移植肝活检及活检前生化检测对于AR的诊断与鉴别诊断有重要意义。

散发性结直肠癌1号染色体短臂遗传位点杂合缺失

目的:抑癌基因的杂合缺失(loss of heterozygosity,LOH)被认为是结直肠癌形成的关键步骤之一。本实验研究了结直肠癌1号染色体短臂杂合的缺失情况,并探讨其临床意义。方法:选取11个微卫星DNA标记与83例结直肠癌病例的肿瘤和正常组织进行PCR。PCR产物在ABIPrism377自动荧光测序仪上进行电泳,以GeneScan3.1和Genotyper2.1软件进行遗传位点扫描以及杂合缺失分析。结果:1号染色体短臂的平均杂合缺失率为18.00%,D1S468(1p36.33-36.31)位点的杂合缺失率最高,达36.54%。D1S2726位点的杂合缺失现象主要存在于直肠癌,缺失率为28.57%(6/21),而结肠癌的缺失率为0.00%(0/33),二者差异具统计学意义(P=0.002)。结论:在1号染色体短臂上可能存在与结直肠癌发生相关的抑癌基因,位于1p36.33-36.31这个区域。

基于Internet的远程监控系统开发技术研究

分析了基于Internet技术的远程监控系统的软件体系结构 ,对远程监控系统开发中所涉及的多用户同时操作、ActiveX控件开发与发布、现场远程监控代理软件设计等进行了讨论 ,同时给出了基于密码、ACL、数字证书和SSL等技术的自动化系统安全策略及实现方法。

肝癌组织中凋亡信号蛋白的表达及其临床意义

[目的]分析凋亡信号蛋白(FADD、TRADD、FasL、Fas和NFκB)在人类肝癌组织中的表达及其临床意义。[方法]采用Westernblot法检测肝癌组织中上述5种凋亡信号蛋白的表达情况。[结果]在35例HCC标本中,FADD、TRADD、FasL、Fas和NFκB蛋白表达分别为37.14%(13/35)、68.57%(24/35)、68.57%(24/35)、60%(21/35)和77.14%(27/35)。其中,Fas蛋白表达随肿瘤增大而下降,同肿瘤大小之间差异有显著性(P<0.05)。FADD和Fas两蛋白表达随肿瘤恶性程度增高,而明显下降,与病理分级间差异有显著性(P<0.01,P<0.05)。TRADD和Fas蛋白表达同甲胎蛋白水平呈正相关(P<0.01)。各蛋白表达同肿瘤转移无关(P>0.05)。[结论]肝癌细胞可通过下调引起凋亡的信号蛋白的表达,如Fas,FADD;和上调引起存活信号蛋白的表达,如TRADD,NFκB等机制的协同作用,来逃避凋亡的发生,从而达到维持自身稳定的目的,这对肝癌的发展起重要作用。

细胞凋亡检测用于肿瘤细胞株对化疗敏感性的研究

目的 评价 Annexin- V荧光标记 FACScan法、TU NEL法细胞凋亡检测在肿瘤细胞株化疗药物敏感性研究中的应用。方法 将 DDP、MMC、5 - FU、EPI按血浆峰浓度 (PPC)、1/10 PPC、1/5 PPC、5 PPC、10 PPC与结肠腺癌L o Vo和 L s- 174- t细胞温育 2 4及 48h,用 FACScan 法、TU NEL法检测细胞凋亡 ,用 MTT比色法检测细胞生长抑制率 ,并提取 DNA进行琼脂糖凝胶电泳。结果 L o Vo与L s- 174- t细胞经化疗药物诱导 48h后 ,FACScan检测的细胞凋亡率在 PPC时最高 ,TU NEL 法检测的凋亡率与 MTT法检的细胞增殖抑制率呈正的直线相关 (P<0 .0 5 )。结论 Annexin- V荧光标记 FACScan法检测细胞凋亡既能优选出敏感的药物 ,又能寻找合适的药物浓度 ,是目前优选有效化疗药物种类及剂量的一个可探索。

经肝静脉与门静脉离体灌注分离猪肝细胞的比较研究

目的 比较经门静脉顺行灌注法与肝静脉逆行灌注法离体分离屠宰场猪肝细胞并观察原代培养的肝细胞形态学变化。方法 经门静脉顺行和肝静脉逆行离体胶原酶灌注法分离猪肝细胞 ,并在含 10 %小牛血清的WilliamsE培养基中培养。结果 顺行灌注与逆行灌注法分离猪肝细胞的平均产量分别为 (8.8± 0 .5 )× 10 9 肝与 (1.5± 0 .1)× 10 1 0 肝 (P <0 .0 5 ) ,平均肝细胞活性为 (88.7± 1.5 ) %与 (90 .3± 1.5 ) % (P >0 .0 5 )。分离后的肝细胞增生活跃 ,生长良好 ,未见污染。结论 采用肝静脉逆行灌注法可以分离获得高产率、高活性肝细胞 。

肝细胞癌和肝硬化组织中增殖细胞核抗原及Ki-67抗原的表达及意义

为探讨肝细胞癌 (HCC)和肝硬化组织中增殖细胞核抗原 (PCNA)及 Ki- 67抗原的表达及意义 ,采用免疫组织化学技术检测 PCNA和 Ki- 67抗原在 HCC和肝硬化组织中的标记指数 (L I)。结果显示 , 、 、 级 HCC的 PCNA L I分别为 (2 6.9± 17.4) %、 (3 3 .1± 2 2 .7) %、 (73 .8± 16.3 ) % ,各级之间差异均有显著性(P均 <0 .0 5 ) ;Ki- 67L I分别为 (2 5 .8± 15 .6) %、 (5 8.2± 18.6) %、 (75 .3± 2 0 .2 ) % ,各级之间差异均有显著性 (P均 <0 .0 5 ) ;但各级 HCC中的 PCNA L I和 Ki- 67L I差异均无显著性 (P均 >0 .0 5 )。肝硬化组织中 PCNAL I为 (8.8± 5 .2 ) % ,Ki- 67L I为 (7.9± 4.4) % ,两者之间差异无显著性 (P>0 .0 5 )。提示 HCC及肝硬化组织中 PCNA和 Ki- 67抗原的阳性率基本一致 ,HCC的分化程度与 PCNA或 Ki- 67密切相关 ;原位检测 HCC组织中PCNA或 Ki- 67抗原的表达 ,有助于判断

激光捕获显微切割和基因芯片技术用于肿瘤实质细胞转录组的构建

目的：联合应用激光捕获显微切割和基因芯片技术构建纯化肿瘤实质细胞转录组。方法：应用激光捕获显微切割技术从肿瘤组织冰冻切片中获取纯化肿瘤实质细胞，提取RNA并对其进行线性扩增得到aRNA，合成cRNA探针后与全基因组基因芯片Affymetrix HG—U133．Plus 2．0 Gene—Chip杂交构建全基因组表达谱。结果：从5例结肠癌组织样本中各获取了3mm。细胞，抽提获得RNA118．4～300．3ng，混合后取100ng进行线性扩增获得aRNA 7ug。基因芯片各项质控标准符合基因表达谱芯片操作指南，共有18205条转录本表达，代表15276个基因。结论：联合应用激光捕获显微切割和全基因组基因芯片技术可构建纯化肿瘤实质细胞转录组。

结肠腺癌细胞株Fas/FasL的表达与凋亡的关系

目的 :研究结肠腺癌细胞株经不同化疗药物诱导后Fas FasL表达与癌细胞凋亡的关系 ,探索敏感化疗药物的筛选。方法 :将顺铂、丝裂霉素、氟尿嘧啶、表阿霉素按PPC(血浆峰浓度 )、1 10PPC、1 5PPC、5PPC、10PPC加入结肠腺癌LS174T细胞、LoVo细胞共孵 ,用流式细胞术 (FACScan)检测癌细胞Fas、FasL表达率及细胞凋亡率 ,并提取DNA进行琼脂糖凝胶电泳。结果 :FACScan检测显示LS174T细胞顺铂组、丝裂霉素组、表阿霉素组Fas表达率、细胞凋亡率在 1 5PPC或PPC时最高 ,Fas表达率与细胞凋亡率呈正相关 (P <0 .0 5 )。LoVo细胞经化疗药物诱导后Fas表达率与细胞凋亡率无显著相关 (P <0 .0 5 )。结论 :FACScan检测的癌细胞凋亡率可用于敏感化疗药物及其合适剂量的筛选 ,Fas表达率可能仅适用于部分癌症病人化疗药物的筛选 ;

原发性肝细胞癌中乙型肝炎病毒基因整合状态研究

目的 探讨原发性肝细胞癌 (hepatocellular carcinoma,HCC)与肝硬化 (liver cirrhosis,L C)组织中乙型肝炎病毒 (HBV)基因各片段的整合情况。方法 采用 PCR与 Southern杂交技术检则 HCC与 L C各 35例肝组织标本 DNA中是否存在 HBV基因的整合。结果 HCC组中 HBV DNA阳性率为 94 % (33/35 ) ,其中 X片段阳性率为 92 % (32 /35 ) ;HBV DNA整合率为 6 9% (2 4 /35 ) ,其中 X片段整合率为 6 9% (2 4 /35 )。L C组中 HBV DNA阳性率为 94 % (33/35 ) ,其中 X片段阳性率为84 % (2 9/35 ) ;HBV DNA整合率为 6 0 % (2 1/35 ) ,其中 X片段整合率为 4 0 % (14 /35 )。两组在 X片段整合率上存在统计学差异(P<0 .0 5 )。结论 HBV基因的整合在肝硬化与肝癌中是一个普遍的现象。 HBV基因的整合是癌变的早期事件。 HBV基因中的 X片段的整合与

人工肝在肝移植围手术期的应用

目的 探讨人工肝支持系统在肝移植围手术期的应用效果。方法 采用非生物人工肝治疗 9例等待供肝患者 ,3例肝移植术后患者 (包括 1例等待供肝成功过渡到肝移植患者 )。 9例等待供肝患者中 4例成功过渡到肝移植。结果 人工肝支持后患者肝性脑病有所好转 ,血清胆红素明显下降。 4例成功过渡到肝移植的患者中 2例痊愈出院 ,已存活 12和 14个月。结论 术前使用人工肝支持系统能改善患者一般情况 ;原位肝移植加人工肝支持系统是治疗慢性肝衰竭的有效方法。

83例散发性结直肠癌D22S274位点杂合缺失分析

目的 抑癌基因的杂合缺失 (LOH)被认为是结直肠癌形成的关键步骤之一 ,当一条等位基因已经异常的抑癌基因发生杂合缺失可导致肿瘤的形成。本实验通过对 83例散发性结直肠癌D2 2S2 74位点杂合缺失情况作一研究 ,并探讨其意义。方法 微卫星DNA标记D2 2S2 74与 83例结直肠癌病例的肿瘤和正常组织进行PCR反应。 83例散发性结直肠癌 ,男 4 0例 ,女4 3例 ,年龄 31至 84岁 ,中位年龄 6 6岁。PCR产物在ABIPrism 377自动荧光测序仪进行电泳 3小时 ,以GeneScan3.1和Genotyper 2 .1软件进行遗传位点扫描以及杂合缺失分析。LOH与临床病理参数之间的关系比较采用 χ2 检验 ,P <0 .0 5被视为有统计学意义。结果 D2 2S2 74 (2 2 q13.32 13.33)位点的杂合缺失率 34.0 4 %。直肠癌的杂合缺失率为 5 0 % (9/ 18) ,高于近端结肠癌的 12 % (2 / 17) (P =0 .0 18) ,远端结肠癌的杂合缺失率为 4 2 % (5 / 12 )较近端结肠的杂合缺失率高 ,但无统计学差异 ,然而将远端结肠、直肠一起考虑 ,它们的杂合缺失率 (14 / 30 ,4 7% )高于近端结肠 (2 / 15 ,13% ) (P =0 .0 15 ) ,提示远端结肠、直肠癌与近端结肠癌发生机制可能有所不同。结论 2 2 q13.32 13.33区域可能存在与结直肠癌发生相关的抑癌基因。

肝细胞癌p53蛋白、增殖细胞核抗原与临床关系的研究

目的 探讨在肝细胞癌中突变型 p5 3蛋白与增殖细胞核抗原 (PCNA)的相互关系及其意义。 方法 应用免疫组化ABC法检测肝细胞癌和肝硬化中 p5 3蛋白及增殖细胞核抗原。 结果 37例肝细胞癌 (HCC)中 p5 3阳性 19例 ,33例肝硬化标本中p5 3阳性 2例 ,两者有显著差异 (P <0 .0 1) ;HCC中PCNA阳性细胞均数显著高于肝硬化组 (P <0 .0 1) ;p5 3阳性者PCNA阳性细胞数高于p5 3阴性者 (P <0 .0 5 )。p5 3与PCNA两者表达存在显著正相关关系 (r=0 .5 936 2 ,P <0 .0 5 ) ,p5 3表达与年龄、性别、组织分化无关 ,PCNA表达分别与组织分化及血AFP成负相关及正相关。结论 p5 3基因突变在由肝硬化转变为癌过程中是频发事件 ,其表达异常与HCC发生密切相关。PCNA与 p5 3的正相关提示p5 3突变型主要存在于异常增生细胞中 ,且PCNA可反映癌细胞分化及增殖程度 ,可为肝硬变与肝癌关系的探讨及临床诊断、治疗、预后提供参考资料。

胆道持续外引流大鼠原位肝移植模型的建立

目的建立稳定的胆道外引流和胆汁收集的大鼠原位肝移植模型。方法在"双袖套法"技术基础上,引入大鼠躯干"马甲"式外固定器保护胆道引流管和胆汁收集装置。结果大鼠胆道外引流原位肝移植手术60次,手术成功率93.3%(56/60)。术后1d、1周和4周存活率分别为86.7%(52/60)、76.7%(46/60)和68.3%(41/60)。因胆瘘和胆道梗阻死亡各3例(10.0%)。结论本大鼠肝移植模型胆道外引流稳定,胆道并发症发生率低,可为肝移植后胆汁生物学分析研究提供技术支持。

散发性结直肠癌D10S1265位点的杂合缺失分析

目的:染色体上某特定位点遗传物质的丢失是肿瘤发生中的常见现象,抑癌基因的杂合缺失是结直肠癌形成中的关键步骤之一。本实验通过对83例散发性结直肠癌中D10S1265位点杂合缺失的研究,探讨其在结直肠癌演变中的作用。方法:荧光标记的多态性微卫星引物D10S1265与83例结直肠癌的肿瘤和正常组织进行PCR反应。PCR产物在ABIPrism377自动荧光测序仪电泳3h,以GeneScan3.1和Genotyper2.1软件进行扫描以及杂合缺失分析。其结果与临床病理因素进行卡方检验。结果:D10S1265位点(10q24.3)的杂合缺失率是50.0%,肝转移的7例未发现LOH,无肝转移病例达58.97%(23/39,P=0.014),但与淋巴结转移无关。另外,此位点的杂合缺失与Dukes'分期显著相关(P=0.013),与其他临床病理因素无关。结论:D10S1265位点附近可能存在与散发性结直肠癌有关的抑癌基因,此基因与结直肠癌的进展和肝转移相关。

同时性结直肠癌肝转移临床病理因素分析

目的 探讨结直肠癌发生肝转移与其临床病理因素的关系。方法 分析比较有肝转移 117例与DukesC或D期无肝转移 5 0例结直肠癌病人的临床特点、血清CEA水平、转移淋巴结、以及原发灶的病理类型和静脉侵犯。结果 以肝转移灶为首诊原因的有 2 1例 ,伴肝转移结直肠癌患者远距离淋巴结转移及镜下静脉侵犯发生率升高 ,与对照组比较差异显著 (P <0 .0 5 )。结论 要重视结直肠癌肝转移的早期诊断 。

原代猪肝细胞无血清培养

目的研究原代猪肝细胞无血清培养及肝细胞的功能。方法采用EGTA和胶原酶P两步法经肝静脉逆行灌注分离乳猪肝细胞,在无血清培养基中培养,并对不同培养时间的肝细胞生化合成及生物转化功能进行检测。结果肝细胞产量为(1.5±0.1)×1010/肝,活率为(90.3±1.5)%,接种培养后肝细胞增生旺盛,LDH漏出第2天达到高峰,然后逐渐下降并稳定于一定水平。随着时间的延长及肝细胞数量的增加,白蛋白合成及利多卡因转化率逐渐增加,呈时间及肝细胞数量的依赖关系。结论采用本法分离获取的猪肝细胞产率高、活性强、具有良好的生物合成及生物转化功能,可作为生物人工肝较理想的肝细胞来源。

肝移植急性排斥反应的诊断与治疗

目的 总结肝移植术后急性排斥反应 (AR)的诊治经验。方法 回顾性分析 5 7例肝移植患者术后AR的发生率和治疗结果。结果 2 1例患者术后因肝功能异常而行 38次移植肝活检 (术后 6～ 91d) ,11例 15次发生AR ,其中 8例为单次 ,3例为两次或两次以上 ,轻度 11次 ,中重度 4次 ,AR发生率为 19.3% ( 11/5 7)。 2 0次为单纯保存 -再灌注损伤 (PRI)。 3次为药物中毒。所有AR均经激素冲击或调整FK 5 0 6剂量后缓解。结论 移植肝活检对于AR的诊断与鉴别诊断有重要意义 ,只要给予及时的诊断与治疗 。

肝细胞癌中周期蛋白A表达与乙型肝炎病毒整合的相关性研究

目的 探讨周期蛋白A与乙型肝炎病毒 (HBV)整合的关系及其在肝细胞癌 (HCC)中的表达和临床意义。方法 分别采用聚合酶链反应 (PCR)、逆转录 (RT) PCR和western印迹法检测 3 5例HCC及其相邻非肿瘤组织中的周期蛋白A基因、mRNA和蛋白的表达 ;采用PCR和southern印迹法检测HCC标本中的HBx基因的整合。结果 3 5例HCC中周期蛋白A蛋白过表达率为 60 .0 % ( 2 1/3 5 ) ,mRNA过表达率为 42 .9% ( 15 /3 5 ) ,基因扩增率为 2 .8% ( 1/3 5 )。周期蛋白A蛋白过表达与肿瘤大小之间差异有显著性 (P <0 .0 5 )。结论 HBVDNA整合与周期蛋白A基因表达改变有相关性 ,周期蛋白A基因蛋白表达失控是肝细胞癌变中的早期事件 ,并且可能是HBV影响肝细胞正常细胞周期的重要因素之一。