犬红细胞膜仿生纳米载体的制备和体外毒性及靶向初探

为了提高纳米颗粒的安全性和靶向性,试验采用低渗处理法制备犬红细胞膜(RBCM),双乳法制备聚乳酸-羟基乙酸共聚物纳米颗粒(BLANK-PLGA),并用脂质体挤出器挤出法制备犬红细胞膜囊泡(RBCM-NVE)和犬红细胞膜仿生纳米载体(PLGA-RBCM);采用透射电镜、动态光散射技术对不同纳米颗粒的结构、大小和电位进行表征鉴定;通过稳定性试验考察不同纳米颗粒的粒径及聚集性变化;采用SDS-PAGE和Western-blot法验证挤出前后细胞CD47膜蛋白表达情况;通过犬乳腺肿瘤细胞(CIPp)摄取BLANK-PLGA和PLGA-RBCM研究纳米颗粒的同源靶向性;通过体外试验探究BLANK-PLGA和RBCM-NVE纳米颗粒的细胞毒性。结果表明:BLANK-PLGA呈球形结构,RBCM-NVE呈杯状囊泡结构,PLGA-RBCM呈明显的“核-壳”结构;BLANK-PLGA平均粒径为(305.17±2.59)nm,聚合物分散性指数(polymer dispersity index, PDI)为0.10±0.01,平均电位为(-3.86±0.59)mV;RBCM-NVE平均粒径为(200.50±0.26)nm, PDI为0.22±0.02,平均电位为(-9.60±0.88)mV;PLGA-RBCM平均粒径为(274.16±2.11)nm, PDI为0.18±0.03,平均电位为(-6.03±0.64)mV;第0~25天,在PBS中PLGA-RBCM粒径保持在300 nm以下,PDI为0.2左右,随着时间推移,BLANK-PLGA的粒径与PDI均明显增大,粒径大小不均;BLANK-PLGA和PLGA-RBCM在胎牛血清中4 h内吸光度没有较大变化;RBCM在通过脂质体挤出器挤出前后均保持相同的蛋白条带并且均表达CD47膜蛋白;CIPp细胞对PLGA-RBCM的摄取量极显著多于对BLANK-PLGA(P<0.01);BLANK-PLGA和RBCM-NVE与CIPp细胞共孵育6,12,24 h后细胞活力差异不显著(P>0.05)。说明成功制备的PLGA-RBCM具有良好的稳定性、安全性及对同源细胞的靶向性。

Ki-67在犬乳腺肿瘤的表达与分析

本试验通过免疫组化的方法,检测了从中国农业大学教学动物医院收集到的6个正常乳腺组织和135例乳腺肿瘤组织(良性30例,恶性105例)Ki-67的表达率。结果犬乳腺肿瘤组织中的Ki-67蛋白表达率明显高于正常乳腺组织(P<0.05);犬恶性肿瘤组织中的Ki-67蛋白表达率明显高于良性肿瘤(P<0.05)。表明Ki-67在恶性肿瘤里高表达,可以作为犬乳腺肿瘤疾病诊断的指标。

植筋技术在桥梁拼接施工中的应用

植筋技术用于桥梁拼接施工时,具有对原结构破损小、工艺简单、锚固后结构整体性好等特点。该文结合参建的沪宁高速公路扩建工程新、老桥梁的拼接,较详细地介绍植筋技术的施工工艺及施工中的注意事项。

水稳碎石基层裂缝的成因及防治

水泥稳定碎石基层是根据水泥、碎石、砂和水按一定比例进行配制的路面结构层承重结构,也是底基层与路面两层的中间结构,它具有强度高、水稳定性好的优点。但它和水泥砼路面一样施工工艺要由于水泥稳定碎石具有强度高且水稳定性好的特点,水泥稳定碎石结构作为高等级路面的基层,得到了越来越广泛的应用,且取得了较为丰富的经验。但由于其结合料为水泥,施工工艺要求较高,而且需要较好的施工管理环境,否则就极易产生早期裂缝。本文从原材料、施工及养护管理等方面的提出了综合的防治措施,以保证公路路面的正常使用。

SRC-3在犬乳腺癌中的表达及分析

犬乳腺肿瘤是兽医临床常见的一种母犬肿瘤疾病。类固醇受体辅助活化因子-3(Steroid receptor activation factor3,SRC-3)与多种肿瘤的发生、发展、转移及预后密切相关,已成为一个潜在的用于癌症诊断的癌基因标记物。本试验通过免疫组化的方法,检测了从中国农业大学教学动物医院收集到的68例乳腺肿瘤组织SRC-3的表达情况。结果显示,犬恶性乳腺肿瘤组织中的SRC-3蛋白表达率高于正常与良性乳腺肿瘤组织。结果表明,SRC-3在恶性肿瘤里高表达,可以作为犬乳腺肿瘤疾病诊断的参考指标。

UEA混凝土在合宁高速扩建桥梁拼接施工中的应用

合宁高速公路扩建工程中,为保证新拼宽的桥梁能与老桥共同受力,减少混凝土发生收缩徐变产生裂缝,减少结构整体的附加内力,设计新老、桥梁板纵向拼接缝采用UEA混凝土浇注。文章结合参建的合宁高速公路扩建工程新、老桥梁的拼接,详细介绍UEA混凝土控制裂缝的原理、配合比的确定、施工工艺及施工中的注意事项。

肿瘤疾病中MMP2与MMP9作为液体活检的生物标志物

基质金属蛋白酶(matrix metalloprotein,MMPs)家族既可以参与正常生理过程中细胞外基质的分解,如胚胎发育、生殖和组织重塑;也可参与疾病过程,如炎症反应、肿瘤中血管生成。基质金属蛋白酶家族中的MMP2和MMP9为Ⅳ型胶原酶能够降解细胞外基质,在调控肿瘤细胞生长、分化、侵袭、转移、肿瘤血管生成及免疫监视中起重要作用。发生肿瘤后机体血液中MMP2和MMP9表达异常,可作为液体活检的肿瘤标志物。小动物肿瘤性疾病的发生率正逐年增高,犬的乳腺肿瘤、肥大细胞瘤、黑色素瘤、淋巴瘤等恶性肿瘤具有高转移性和高致死率,临床上需要更多肿瘤早期诊断的方法,血液中的MMP2和MMP9具有成为肿瘤标志物的巨大潜力。

犬猫肿瘤样本库的发展现状及基本建立流程

生物样本库(biobank)是指具有系统性收集、储存和分发样本的存储系统,其建立有助于对疾病进行更为准确的诊疗。建立肿瘤样本库可以为肿瘤早期诊断试剂盒的研发、新药靶点的筛选与验证及肿瘤个体化治疗指导等提供服务平台。犬猫肿瘤样本库可提供高质量的生物样本,解决样本获取的难题,在研究和诊断疾病方面起着至关重要的作用。文章阐述了国内外犬猫肿瘤样本库的现状,指出了我国建设犬猫肿瘤样本库面临的问题,并总结了建立样本库的基本流程,以期为我国犬猫肿瘤样本库的建设提供参考。

犬血清中MMP2和MMP9与肿瘤疾病的相关性研究

为了在兽医临床上找到用于犬肿瘤疾病的血清生物标志物,试验采集113份犬血清样本,分别采用酶联免疫吸附测定(ELISA)法和明胶酶谱分析方法检测血清样本中MMP2与MMP9蛋白的质量浓度和活性,并对犬血清中MMP2和MMP9蛋白的质量浓度与活性进行了相关性分析。结果表明:肿瘤犬血清中MMP2和MMP9蛋白的质量浓度(中位数分别为126.76μg/mL和230.31μg/mL)均显著高于非肿瘤犬血清中MMP2和MMP9的蛋白质量浓度(中位数分别为58.90μg/mL和55.14μg/mL,P<0.05);≥7岁的非肿瘤犬血清中MMP2蛋白质量浓度极显著高于<7岁的非肿瘤犬(P<0.01),MMP9蛋白质量浓度略高于<7岁的非肿瘤犬(P>0.05);≥7岁的肿瘤犬血清中MMP2和MMP9蛋白质量浓度均略高于<7岁的肿瘤犬(P>0.05);<7岁和≥7岁的肿瘤犬血清中MMP2蛋白质量浓度均显著高于同年龄段的非肿瘤犬(P<0.05);不同肿瘤类型的肿瘤犬血清中MMP2蛋白质量浓度差异不显著(P>0.05);乳腺肿瘤、肉瘤和其他肿瘤中MMP9蛋白质量浓度极显著高于肥大细胞瘤(P<0.01),显著高于淋巴瘤(P<0.05);肿瘤犬血清中MMP2和MMP9蛋白的活性均略高于非肿瘤犬(P>0.05);在非肿瘤犬血清样本中,MMP2和MMP9蛋白的质量浓度与活性均无相关性;在肿瘤犬血清样本中,MMP2和MMP9蛋白的质量浓度与活性均呈弱相关性。说明肿瘤犬血清中MMP2和MMP9蛋白的质量浓度和活性均在一定程度上高于非肿瘤犬,具有作为肿瘤早期诊断和预后标志物的潜能。