规模化猪场猪繁殖与呼吸综合征病毒与副猪嗜血杆菌混合感染的诊断及防治

通过剖检病理变化、细菌分离鉴定、药敏试验和RT-PCR等方法确诊了一例高致病性猪繁殖与呼吸综合征及副猪嗜血杆菌的混合感染,在此基础上提出和实施了相应的防治措施。

牛源A型口蹄疫病毒结构蛋白VP1基因的克隆与序列分析

提取2株A型口蹄疫病毒FMDV L1和FMDV L2的RNA,用1对通用引物经RT PCR扩增出2株病毒VP1基因的DNA片段,将扩增的VP1编码序列克隆到质粒载体pGEM TEasy中,转入大肠埃希氏菌JM109,得到大量携带目的基因的质粒;经过重组质粒的鉴定、测序获得其核苷酸序列;利用序列分析软件及系统发生树绘制软件对FMDV L1和FMDV L2以及作为参考毒株的A22/India/17/77进行序列分析。结果表明,核酸序列中的变异多发区要多于氨基酸序列,氨基酸序列最明显的变异发生在构成FMDV抗原位点1的βG βH环内,其中毒株FMDV L1和FMDV L2RGD序列中的精氨酸(R)发生了变异,分别变成了亮氨酸(L)和谷氨酰胺(Q)。

一例猪繁殖与呼吸综合征病毒与副猪嗜血杆菌混合感染病例的诊断及防治

规模化养猪场常出现病毒与细菌混合感染疾病,严重影响我国养猪业的发展。广东某猪场的猪群发病,病猪表现为高热、嗜睡、精神沉郁、咳嗽、皮肤发红、眼结膜发炎、腹式呼吸等临床症状,发病率40%、病死率60%。通过病理剖检、细菌分离鉴定、药敏试验和RT-PCR等实验室检测,诊断为猪繁殖与呼吸综合征病毒变异株及副猪嗜血杆菌混合感染。在此基础上提出和实施了相应防治措施,疫病得到控制。

集约化猪场不同毒株猪繁殖与呼吸综合征弱毒活疫苗免疫后血液中持续带毒及抗体消长规律研究

某地区猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)与中国高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(hp-PRRSV)同源性极高,为了筛选适合该地区病情的疫苗,指导养殖户生产,试验选择hp-PRRS弱毒活疫苗(JXA1-R株)和PRRS弱毒活疫苗(VR-2332株)作为疫苗候选株,选取30日龄、健康状况良好、群体差异性小的断奶仔猪30头,随机分成A、B和C组,每组10头,A组注射hp-PRRS弱毒活疫苗(JXA1-R株),B组注射PRRS弱毒活疫苗(VR-2332株),C组注射相同剂量生理盐水作对照,免疫前和免疫后14、28、42、56、70、84d采集血清,通过淋巴细胞计数、血清病毒核酸检测、血清抗体检测等分析猪体内hp-PRRS弱毒活疫苗(JXA1-R株)和PRRS弱毒活疫苗(VR-2332株)免疫应答情况。试验结果显示,淋巴细胞数量方面,仔猪免疫后,淋巴细胞数量均上升,42d时A、B组均达到最大值,A组为19.3×109/L,B组为16.7×109/L,C组则一直处于原始水平;抗体阳性方面,14d时A组为80%,B组为60%,C组为0,42d时A组为100%,B组为80%,C组为0;病毒核酸阳性率方面,14d时A组为90%,B组为100%,C组为0,42d时,A组为40%,B组为70%,C组为0,70d时,A组为0,B组为20%,C组为0。由此可知,hp-PRRS弱毒活疫苗(JXA1-R株)能快速诱导猪发生免疫应答、产生免疫抗体,抗体持续时间长、效价高、稳定性良好,且疫苗毒在体内存在时间短、减毒时间快、安全性高,对所研究地区猪群免疫具有优越效果。

抗猪流行性腹泻病毒卵黄抗体的制备及应用

本试验利用猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)SC株免疫产蛋鸡,收集高免卵黄,采用水稀释法和水稀释-盐析法获得鸡源抗PEDV卵黄抗体,采用已建立的ELISA方法对卵黄抗体效价进行测定。以3日龄无母源抗体的易感仔猪为试验动物,对抗PEDV卵黄抗体的治疗效果及安全性进行测定,并进一步利用自然发病猪场的治疗效果进行验证。结果表明,经PEDV SC株细胞毒免疫的鸡可在2次加强免疫后15d产生高水平的特异性抗体。在实验室治疗试验中,攻毒治疗组仔猪的存活率达60%,攻毒对照组存活率为20%;用于自然发病猪场时,饲喂抗PEDV卵黄抗体饲料的仔猪存活率亦为60%,而自然发病对照组的存活率为10%。以上结果表明抗PEDV卵黄抗体对感染PEDV的仔猪有一定治疗作用。

H1亚型猪流感病毒一步法实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立及应用

为建立一种快速、简便、准确的方法以诊断和检测H1亚型猪流感病毒(swine influenza virus,SIV),试验根据H1亚型SIV血凝素(hemagglutinin,HA)基因保守序列,分别设计并合成1对特异性引物和1条TaqMan MGB探针,建立检测H1亚型SIV的一步法实时荧光定量RT-PCR技术。结果显示,该方法的敏感性可达102拷贝/μL,除H1亚型SIV外,对H3N2亚型SIV、H9N1亚型SIV、猪瘟病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪流行性腹泻病毒、猪传染性胃肠炎病毒的检测均为阴性,且应用该方法对疑似猪流感样品进行检测,其结果与SPF鸡胚分离病毒方法结果的符合率为94%。本试验结果表明该方法特异性强、重复性好,有望成为一种特异、敏感、快速、定量检测H1亚型SIV的方法。

口蹄疫O/China/99毒株在不同宿主系传代的3A和VP1基因变异研究

利用RT-PCR法扩增了经不同宿主系(乳鼠、BHK21细胞、PK15细胞)连传不同代次的口蹄疫O/China/99毒株的3A和VP1基因,并进行了核苷酸和氨基酸序列分析。结果表明,该毒株经不同宿主系传至90代后,VP1基因未发生大的变异,主要抗原位点也较稳定;而非结构蛋白3A基因却在不同宿主和代次发生突变缺失;经BHK21细胞传代后未发生缺失;经PK15细胞传代,在70～90代之间在第254～313位出现缺失;经乳鼠传代,在60～70代之间在第265～300位发生缺失,并在以后的90代毒中仍在此位缺失。这与代表性猪源流行毒O/YUN/TAW/97和O/HKN/21/70的3A基因在第276～305位发生缺失有相同之处。

猪繁殖与呼吸综合征病毒变异野毒株与JXA1-R疫苗毒株快速鉴别方法的建立

根据猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)变异野毒JXA1的基因变异序列和疫苗株JXA1-R的基因遗传标志设计合成了2对特异性引物,结合快速RNA抽提试剂和一步法RT-PCR,建立了JXA1变异野毒与JXA1-R疫苗毒的快速鉴别体系,其目的片段大小分别为4002、90 bp,该方法对猪瘟病毒、猪细小病毒、猪圆环病毒2型、猪伪狂犬病病毒的PCR检测结果均为阴性;对JXA1变异野毒与JXA1-R疫苗毒RNA的最低检测量分别为103、104拷贝/μL。该方法敏感、特异,适用于临床样品的检测。

高致病性猪繁殖与呼吸综合征活疫苗的免疫效果观察

使用高致病性猪繁殖与呼吸综合征(JXA1-R株)活疫苗对仔猪进行免疫,仔猪无不良临床表现;使用该疫苗对配种前母猪、怀孕80～90d母猪、临产前15d母猪进行免疫,母猪精神、食欲、体温均正常,并在预产期顺利产仔。JXA1-R株活疫苗表现出良好的安全性。使用JXA1-R株活疫苗对猪只进行免疫,7d即产生抗体;对仔猪进行免疫,21d～28d即能抵抗强毒攻击。恩平市种猪场和新兴商品肉猪场使用了JXA1-R株活疫苗,获得了满意的免疫效果,证明高致病性猪繁殖与呼吸综合征(JXA1-R株)活疫苗能预防猪繁殖与呼吸综合征的发生。

多表位基因工程疫苗的研究进展

多表位基因工程疫苗是运用重组DNA技术将多个编码抗原表位的DNA序列片段进行串联组合,然后重组入原核、真核表达载体或者病毒构建重组子,并进一步表达重组蛋白而制成的疫苗。多表位基因工程疫苗是最具开发前景的疫苗之一,在细菌、病毒、寄生虫等新型疫苗的研究中取得了很大的进步。本文就多表位基因工程疫苗的研究进行综述。

猪瘟诊断技术的应用进展

猪瘟是由猪瘟病毒（CSFV）引起的一种高度接触性传染病，被世界动物卫生组织（OIE）列为A类动物疫病。近年来，我国猪瘟的流行和发病特点发生了很大变化，影响了养猪业的发展。牛病毒性腹泻病病毒（BVDV）与猪瘟病毒（CSFV）同属于瘟病毒槿，且与CSFV存在血清学交叉反应，对猪瘟的诊断造成了干扰。此外，猪瘟免化弱毒疫苗（HCLV）的大规模应用，也给CSFV野毒感染猪和疫苗感染猪的鉴别诊断带来较大困难。

一例母猪初乳带毒致仔猪感染PEDV的病例报告

以一例猪场PED发生为案例,通过试验验证,极有可能是乳汁传播PED所导致的。因此,PED的防控应当抓住根源,做好综合防控和监测工作,及时淘汰感染猪只,特别是隐性感染的母猪,防止循环感染。猪流行性腹泻（PED）是由猪流行性腹泻病毒（PEDV）引起猪的一种急性高度接触性肠道传染病,以腹泻、呕吐、脱水和对哺乳仔猪高致死性为主要特征。

浅谈当前高致病性猪蓝耳病的特点及防控技术

高致病性猪蓝耳病是一种急性高致死性传染病,为我国养殖业带来了巨大的损失。本文阐述了当前高致病性猪蓝耳病的流行特点及其防控措施。

3株猪繁殖与呼吸综合征病毒的分离鉴定及ORF5基因的克隆与序列分析

猪繁殖与呼吸综合征（PRRS）是由猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）引起的一种急性接触性传染病,主要引起妊娠母猪的繁殖障碍及仔猪的呼吸道症状,因其具有高致病性和高死亡率,目前该病已成为危害养猪业的病毒性疾病之一[1-3]。PRRSV有2个基因型,分别为美洲基因型（VR2332）和欧洲基因型（LV）,目前我国发现的基因型均与美洲基因型的亲缘性接近[4]。

传染性胃肠炎病毒PY-D株的分离鉴定及其S基因B、C抗原位点的克隆与序列分析

猪传染性胃肠炎（transmissible gastroenteritis，TGE）是由猪传染性胃肠炎病毒（Porcine transmissible gastroenteritis virus，TGEV）引起的、猪的一种急性、高度接触性传染病，具有高致病性、高死亡率的特点，不同年龄和品种的猪对该病均易感，表现为呕吐、严重腹泻和脱水等临床特征，且该病在世界范围内广泛分布，我国从20世纪50年代末期就有该病的报道，近年来TGE在我国部分地区时有发生和流行，给养猪业造成了极大的危害。对该病的有效监测是预防该病的方法之一，而其中以病毒分离鉴定、抗体监测为主要内容。

一株类禽H1N1亚型猪流感病毒的进化研究

为了解猪流感病毒(SIV)的变异情况,2013年1月份从山西某养殖场采集呈流感症状的猪鼻拭子10份,采用常规方法接种10日龄SPF鸡胚,进行RT-PCR鉴定及全基因序列分析。结果表明:分离到1株类禽H1N1亚型猪流感病毒,命名为A/swine/Shanxi/02/2013(H1N1);全基因序列测定及同源性分析发现,8个基因片段均与2011年江苏地区流行的类禽型H1N1亚型猪流感病毒有较高的同源性;系统遗传演化发现,该病毒株是由2011年类禽型H1N1流感病毒A/swine/Jiangsu/40/2011(H1N1)进化而来的;HA1氨基酸位点差异分析发现,该病毒株与2009年人群中流行的甲型H1N1流感和经典H1N1毒株抗原性差异较大,其HA裂解位点基序为PSIQSRGLF,呈低致病性特征。

高致病性猪繁殖与呼吸综合征活疫苗的免疫效果观察

目前，国外已经越来越倾向于使用活疫苗防控猪繁殖与呼吸综合征的发生，如美国已批准Resp／PRRS、IngelvacPRRS MLV和BIV等商品活疫苗进入市场，笔者也一直从事猪繁殖与呼吸综合征（JXA1-R株）活疫苗的研制开发，现将其对猪繁殖与呼吸综合征的免疫效果介绍如下。

浅谈高致病性蓝耳病

2006年6月中旬，养殖业比较密集的江西南昌周边地区发生了一场严重的疾病，造成母猪、育肥猪大批死亡淘汰。随后此病从江西迅速向周边省份蔓延，包括江苏、湖南、河南、山东、河北、京津、辽宁一直到黑龙江，2007年春季又在广东粤西地区流行。此时，农业部及时部署开展各项防控工作，通过组织有关单位开展流行病学调查、