双基因双重组AcNPV的构建及其杀虫活性

质粒 pAcIEneo携带杆状病毒极早期基因IE1启动子驱动的新霉素抗性基因 (neo) ,经酶切回收后插入到质粒pAc34DZ1的SacI位点上 ,构建成多角体外膜蛋白基因 (pe)失活的转移载体 pAc34DZ2。我们曾构建了一个多角体完整 (ocu+ )的表达苏云金杆菌 (Bt)截短cryIAb基因的重组病毒 (1)vAcPhBtT。为了改进这一重组病毒的杀虫效率 ,将转移载体 pAc34DZ2与重组病毒 (1)vAcPhBtTDNA共转染Sf9细胞 ,进行第二次同源重组。由于neo基因的表达 ,用G4 18筛选得到重组病毒 (2 )vAcPhBtTPE-;Southernblot证明vAcPhBtTPE-的构建是正确的 ,经SDS PAGE分析 ,重组病毒 (2 )仍然能在昆虫细胞中表达 80kD的Bt截短毒蛋白 ,但不表达 34kD的多角体外膜蛋白。电镜观察重组病毒 (2 )无多角体外膜 ,碱解时病毒粒子释放的速度快于重组病毒 (1)。以重组病毒 (2 )感染甜菜夜蛾三龄幼虫 ,LC50 比野生型病毒小了接近 1倍 ,LT50 提前近 2d。

用昆虫病毒转移载体在大肠杆菌中表达苏芸金杆菌δ-内毒素基因

从八十年代初开始用昆虫核型多角体病毒(NPV)的多角体蛋白基因(ocu)构建转移载体以来,陆续表达了几十种外源基因。我们曾用大尺蠖核多角体病毒(BsNPV)的ocu基因构建了转移载体。

突变型绿色荧光蛋白基因在昆虫细胞和幼虫中的表达

用细菌—杆状病毒穿梭系统（Ｂａｃ－ｔｏ－Ｂａｃ）将一套含有绿色荧光蛋白基因（ｇｆｐＳ６５Ｔ）和完整多角体蛋白基因的表达盒转座到ＡｃＮＰＶ－Ｂａｃｍｉｄ的Ｔｎ７转座接受位点，从而构建出一种带有ｇｆｐ基因和完整多角体基因的重组杆状病毒，用这一重组病毒感染细胞能稳定地形成多角体，并在紫外光照射下产生强烈的绿色荧光，以重组病毒感染粉纹夜蛾（Ｔｒｉｃｈｏｐｌｕｓｉａｎｉ）幼虫后，在阳光下即可看到发射绿色荧光的幼虫，在手提式长波紫外光照射下绿色荧光更为强烈。

粘虫核型多角体病毒p35基因抑制细胞凋亡的功能研究

利用去血清方法建立 L s细胞凋亡的实验体系 ,证明 L s NPV p 35基因在 L s细胞中瞬时表达可以抑制L s细胞由于无血清造成的凋亡 .构建了在哺乳动物中高效表达 L s NPV p 35基因的载体 p Rc/ RSV- L p35 ,并导入Vero细胞瞬时表达 ,发现 L s NPV p35基因产物也可以抑制 Vero细胞由于病毒感染造成的凋亡 .用含 L s NPVp35的质粒与 v Ac Anh(Ac NPV p35基因缺失病毒 ) DNA共转染 Sf- 9细胞 ,可以使 v Ac Anh DNA在 Sf- 9细胞中形成多角体 ,并且传代后多角体不扩增 ,表明 L s NPV p35基因与 Ac NPV p 35基因具有功能互补性 .

大尺蠖核型多角体病毒多角体蛋白基因的结构分析

大尺蠖核型多角体病毒(BsNPV)的多角体蛋白基因(ocu)定位在2.3kb 的 BamHI-H片段上,用 Xhol、Smal、HindⅢ和 PstⅠ构建了 H 片段的物理图谱,并测定了两端636bp 序列。在5′端发现了杆状病毒 ocu 基因共有的典型特征,即:ATG 起始区;启动子区(14bp保守序列);TATA box 和 CATA box 区等。单一 Xhol 位点在 ATG 上游-15bp 处,适于作为构建 ocu 基因转移载体的插入位点。在这一基因5′端序列中发现了五个反转重复单元CGAGC GCTCG,讨论了这一单元在杆状病毒 ocu 基因高效表达中的调控功能。

聚合酶链反应技术在淋菌性尿道炎临床诊断中的应用

采用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术检测淋菌性尿道炎１９８例，阳性率为５９．１％，在慢性淋病标本中得到的阳性率为４３％。与涂片法比较，ＰＣＲ的阳性率显著高于涂片的阳性率。认为ＰＣＲ法是临床快速诊断淋菌性尿道炎的有效方法。ＰＣＲ法辅以被检者是否伴有相应的临床症状，可被做为治愈的评估标准。在临床诊断中，ＰＣＲ法适合推广应用。

携带苏芸金杆菌毒素基因的基因工程病毒杀虫剂的构建

携带苏芸金杆菌毒素基因(cryIAc)的杆状病毒转移载体pBsBt101 DNA与野生型苜蓿尺蠖核型多角体病毒(AcNPV)DNA共转染草地贪夜蛾(SF)细胞,通过体内同源重组得到没有包涵体的重组病毒,它上面的cryIAC基因在SF细胞中表达了内毒素蛋白,实验证明,表达的毒蛋白毒性很高,在第四天能100％杀死粉纹夜蛾幼虫,比野生型AcNPV高44％,杀虫时间缩短3～7天。

泌尿生殖道中人乳头瘤病毒的检测

人乳头瘤病毒（HPV）通过性传播感染可引起泌尿生殖器的多种病变。用HPV通用引物和分型引物（HPV6／11、HPV16／18型）扩增呼市地区72例怀疑为HPV感染的新鲜标本，结果：28例疣状物标本，HPVDNA阳性率为57．1％；其中HPV6／11型、HPV16／18型分别占62．5％和18．9％。14例取材于男性尿道棉拭中，HPVDNA阳性数为35．7％，其中HPV6／11型占60％，12例女性宫颈棉拭中HPVDNA阳性率为33．3％，其中HPV16／18型占50％。18例取材于膀胱肿块的标本，经病理诊断后再进行DNA扩增，移行细胞癌中，HPV16／18型占阳性数的41．7％，鳞状细胞癌中HPV16／18型占阳性数的50％，腺癌中未查见。在泌尿生殖道的良性损害中HPV6、11型多见，恶性增生中HPV16、18型多见，与许多HPV感染的流行病学资料相符合。

大尺蠖核多角体病毒多角体蛋白基因的物理图谱和部分序列测定

分子杂交证明,大尺蠖核多角体病毒(BsNPV)的多角体蛋白基因(ocu)定位在BamHI-H片段上。进一步构建了该片段的XhoⅠ,SmaⅠ,Hind Ⅲ及PstⅠ的物理图谱,测定了377个核苷酸序列。由于在所测序列中具有杆状病毒ocu基因的典型特征,如14bp保守序列和ATG上游的AT丰富区等,并经与AcNPV的ocu基因对比,我们认为,从BamH I-H片段5’端第26个核苷酸起始,包含了BsNPV ocu基因的全部序列。在ATG上游-15bp处有一个Xho Ⅰ位点,在此位点插入质粒pUC18的多聚接头,构建成带有多克隆位点的转移载体pBsA39。

一个新的凋亡抑制蛋白P49的表达及氨基酸序列分析

从海灰翅夜蛾核型多角体病毒 (SpliNPV)中新发现的p4 9基因可抑制病毒感染引起的草地贪夜蛾细胞Sf9的凋亡 用杆状病毒表达系统BactoBac克隆表达并收获P4 9蛋白 ,发现所测定的表达蛋白的氨基酸序列与由核苷酸推导的氨基酸序列一致 ,证明p4 9基因经克隆转染后得到正确表达 P4 9蛋白上 91TVTDG95 氨基酸序列为Caspase识别结构 比较P35和P4 9蛋白 ,两蛋白同源性约为 4 8.8% 。

多聚酶链反应快速诊断结核病的应用

多聚酶链反应快速诊断结核病的应用晓真，裴子飞，刘兰冰，王秀梅（内蒙古医学院，内蒙古自治区胸科医院）多聚酶链式反应（ＰＣＲ）已成为医学领域中基因诊断的重要工具之一。将其应用于临床结核病的诊断改变了传统病原学诊断方法的输出率低、耗时长、常延误治疗的状况。...

PCR快速检测生殖道沙眼衣原体

应用ＰＣＲ快速检测生殖道标本中沙眼衣原体，经１３４例非淋菌性尿道炎检测衣原体阳性率为３３．５％；１５２例淋球菌性尿道炎检测阳性率为２７．６％。本法快速、敏感、特异性好，可为临床早期诊断和治疗提供可靠依据。

杆状病毒P49蛋白的Caspase切割位点的鉴定

海灰翅夜蛾核型多角体病毒(SINPV)的p49基因,可抑制病毒感染引起的昆虫细胞sf9的凋亡.用杆状病毒Bac-to-Bac表达系统表达的P49蛋白可抑制Caspase的活性.通过氨基酸序列测定发现,P49蛋白的91～95位的氨基酸序列是91TVTDG95.P49蛋白在体外可被人及家蚕Caspase切割,切割后均产生约10和40 kD的2个片段.经定点诱变得到的P49蛋白94位氨基酸突变体不能被人及家蚕Caspase切割,同时也失去对Caspase的抑制功能.而91位突变体蛋白仍可被Caspase切割,并保留了对Caspase抑制的部分活性.P49蛋白不仅作用于下游的效应Caspase,也可作用于上游的启始Caspase,它是一个广谱的Caspase抑制剂.

海灰翅夜蛾核型多角体病毒P49蛋白的表达及其抑制细胞凋亡的机制

一个新克隆的海灰翅夜蛾核型多角体病毒（SlNPV）的p49基因可抑制病毒感染引起的昆虫细胞Sf9的凋亡.用杆状病毒表达系统表达的P49蛋白的氨基酸序列与推导的氨基酸序列一致,证明p49基因编码序列经克隆后能够正确表达.体内标记显示,p49基因在感染早期及晚期均可表达,以多角体基因启动子驱动p49基因的表达只是在晚期,但表达量明显高于WtSlNPV合成的P49蛋白.研究结果证实,SlNPV的p49基因像其他杆状病毒的凋亡抑制基因（p35）一样也是一个早期基因,但在晚期也可表达,与多角体基因启动子比较,p49基因的启动子是一个较弱的启动子.P49蛋白在体外可被人Caspase及家蚕Caspase所切割,切割后均产生约10和40ku的2个片段.P49蛋白又可明显抑制人Caspase-3及家蚕Caspase对其特异底物的切割,证明P49蛋白的凋亡抑制机制与下游Caspase有关.

人白细胞介素的新成员:IL-24,25,26,27

白细胞介素 (interleukin ,IL)是由多种免疫细胞 (活化的T 细胞 ,淋巴细胞 ,单核细胞等 )分泌的一类细胞因子 ,它们在免疫反应的调节中发挥重要作用 ,对治疗疾病有着重要的临床应用价值。到目前为止 ,人们已经发现了 2 7种白细胞介素。有些新成员能与其受体相互作用后引起一系列生理变化 ,如生长、增殖、分化和凋亡等 ,如IL 2 4 ,2 5和 2 7,而IL 2 6的生理功能还不太清楚。IL 2 4作为基因药物抑制肿瘤生长 ,显示了独特的临床应用前景。