CYP2E1稳定高表达肝细胞系的构建及其在药物性肝损伤活性筛选模型中的应用

药物性肝损伤是临床常见且严重的药物不良反应之一,对乙酰氨基酚是临床常用的解热镇痛药,是引起药物性肝损伤的常见因素.肝微粒体酶细胞色素P4502E1(CYP2E1)在对乙酰氨基酚诱导的肝细胞损伤中发挥了重要作用.由于体外培养的肝细胞系几乎不表达微粒体酶CYP2E1,采用CYP2E1-慢病毒转染人肝癌细胞系HepG2构建了稳定高表达CYP2E1基因的肝细胞系,利用该细胞系建立了对乙酰氨基酚诱导的肝细胞损伤体外筛选模型,并对实验室从中药香附中提取得到24个天然产物进行了活性筛选,发现了8个具有潜在体外抗药物性肝损伤活性的天然化合物.本研究为药物性肝损伤提供了合适的体外筛选模型,活性筛选结果也为传统中药香附的研究与开发提供了理论依据.

纸莎草的化学成分研究

采用正相硅胶柱、Sephadex LH-20、高效液相色谱、MCI等色谱方法从纸莎草全株中分离得到19个化合物,采用1D、2D NMR、质谱等技术鉴定化合物的结构,分别鉴定为:α-香附酮(1)、香附酸(2)、广藿香烯酮(3)、4,5,6,7,8,8a-六氢-3,4,8,8-四甲基-1H-3a,7-亚甲基甘菊环-4-醇甲酸酯(4)、(6S)4-烯-广藿香醇(5)、桉烷双烯萜(6)、β-谷甾醇(7)、(24R)-24-乙基胆甾烷-4-烯-3,6-二酮(8)、豆甾-4,22-二烯-3-酮(9)、(24R)-24-乙基-5α-胆甾烷-3β,5-二醇-6-酮(10)、豆甾醇(11)、豆甾-4-烯-6β-醇-3-酮(12)、豆甾-3,6-二酮(13)、豆甾-4-烯-3-酮(14)、顺,顺-9,12-十八(碳)二烯酸(15)、棕榈酸甲酯(16)、正二十八烷酸(17)、3-壬基环氧乙烷-2-甲酸甲酯(18)、9,10-二氯-十八烷酸甲酯(19)。所有化合物均为首次从纸莎草中分离得到。化合物1、2、3、5、6、10、12、13、16能够明显抑制TNF-α所诱导的质粒转染的HEK293T细胞中NF-κB信号通路的激活,IC50值在34.96~98.23μM之间。

JAK2/STAT3信号通路活化参与DEN诱导的小鼠原位肝癌

肝细胞癌是一种高死亡率的原发性肝癌,临床上具有早期发现困难、难治疗和易复发的特点.为了建立适用于本实验室的动物原位肝癌模型,采用二乙基亚硝胺(DEN)诱发C57BL/6小鼠形成肝癌,通过动态监测小鼠肝癌发展进程的病理学特征及生化指标,结合特异性免疫组织化学检测,发现与对照组相比,DEN给药后,小鼠体重随给药时间延长呈现明显降低,血清中谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)与肝脏组织中JAK2和STAT3蛋白表达显著增加,且小鼠肝脏形态及病理切片逐渐出现炎症-肝纤维化-肝硬化现象,并在第20周形成肝癌.结果表明JAK2/STAT3信号通路的激活,参与并促进了DEN诱导的小鼠肝脏炎症和癌变的发生,其信号的异常高表达有助于将其作为生物标志物对肝癌病变周期进行判断,也为后续关于JAK2/STAT3通路抑制剂对小鼠原位肝癌的治疗作用研究打下了基础.

甘丙肽受体2基因敲除小鼠的饲养繁育及基因型鉴定

目的饲养和繁育甘丙肽受体2基因敲除小鼠,对小鼠基因型进行分析和鉴定,并验证检测方法的适用性。方法将引进的GalR2基因敲除杂合子雄性小鼠和野生型雌性小鼠以1∶2的比例,或杂合子雌性小鼠和野生型雄性小鼠以2∶1的比例进行交配繁殖,获得的F1代杂合子小鼠进行同胞交配,获得F2代纯合子、杂合子和野生型小鼠。小鼠为2周龄时将其鼠尾剪取2~5 mm以获取组织DNA,使用PCR对目的基因片段进行扩增,并使用琼脂糖凝胶电泳法对基因型结果进行判定。结果GalR2基因敲除小鼠能够稳定繁育,并获得了一批基因敲除小鼠。F1代杂合子小鼠交配获得了3种基因型小鼠:纯合子(GalR2^(-/-)),杂合子(GalR2^(+/-))及野生型(GalR2^(+/+)),使用PCR法鉴定出小鼠的基因型。结论使用科学的繁育方式,以及通过PCR法进行基因型鉴定可以获得甘丙肽受体2基因敲除小鼠。