木薯棒孢霉叶斑病病原鉴定及其生物学特性测定

对中国木薯主产区的病害普查中，发现了一种新的叶斑病。病原菌形态鉴定和ITS序列分析表明其为山扁豆生棒孢（Corynespora cassiicola）。生物学特性研究表明，CMA或ME培养基、26～28℃、pH6、连续光照是其生长最适条件，光暗交替或连续光照适于产孢，孢子最适萌发温度和致死温度分别为28-30℃和55℃10min。接种试验表明该菌株和2株来自于番木瓜、2株来自于橡胶的C.cassiicola菌株均能侵染木薯和番木瓜．但致病力存在着差异。除一株来自番木瓜的菌株外，其余4个菌株均能侵染橡胶。

木薯褐斑病病原鉴定及其生物学特性研究

褐斑病是中国木薯生产中最为严重的叶部真菌性病害。采用多种分离方法,经致病性评价后获得该病的病原菌,形态观察和ITS序列分析结果表明其为亨宁氏钉孢(Passalora henningsii)。比较光照、菌丝打断、紫外线和菌丝打断-紫外等方法的诱导产孢效果,结果表明:只有菌丝打断-紫外诱导法能够产生大量分生孢子,CME(麦芽木薯叶)培养基、28℃、pH6.0～7.0、紫外线连续诱导、25 mL/皿、14～21 d为产孢最适条件。对菌株CPHHN02的生物学特性研究表明,CA培养基、26～28℃、pH6.0、连续黑暗、碳氮源分别为D-葡萄糖、D-甘露醇、D-乳糖和胰蛋白胨为菌株最适培养条件。大型分生孢子的最适萌发温度为26℃,致死温度为60℃10 min。

西瓜枯萎病菌T-DNA插入转化子库的构建及其质量评价

为研究西瓜枯萎病菌的致病分子机理,开展了病原菌的转化子库构建工作。采用携带潮霉素抗性p TFCM双元载体的农杆菌AGL-1介导的ATMT转化方法 ,获得菌株FON-01的转化子,通过表型观察筛选突变体。结果表明:当乙酰丁香酮(AS)浓度为200μmol/L、农杆菌OD600为0.4、分生孢子浓度为1×106个/m L时,于28℃共培养48 h转化效率高达(663.33±24.95)个/106个孢子。构建了总数为3 832个的转化子库并对其进行了质量评价,从2 201个转化子中筛选出菌落形态、生长速度及产孢量等方面有所变异的突变体73个。病原菌转化子库的构建为进一步开展致病分子机理及相关基因克隆等方面研究奠定基础。

辣椒新叶斑病病原鉴定及其生物学特性

2015—2019年,笔者在对海南地区的辣椒病害进行调查时,发现一种和常见病害症状不同的新叶斑病。田间采集病样后,经病原菌分离、显微形态观察和分子生物学鉴定,证明该病由新月弯孢[Curvularia lunata(Wakker)Boedijin]侵染引起,这是该种病原菌在中国危害辣椒的首次报道。生物学特性研究结果表明,玉米粉、30℃、pH 7.0、连续光照或光暗交替、麦芽糖和酵母提取物为病原菌最适培养条件,分生孢子最适萌发温度和致死温度分别为22~33℃和60℃(10 min)。12种杀菌剂的室内药剂筛选结果表明,45%咪鲜胺EW抑菌效果最好,浓度为1.0 mg/L时抑菌率达97.8%。16%乙霉威·10%嘧霉胺WP、25%三唑酮WP、65%代森锌WP和80%代森锰锌WP也有较好的抑菌效果,而70%甲基硫菌灵WP、80%多菌灵WP几乎无抑菌作用。

尖孢镰刀菌与寄主互作机理研究进展

综述了枯萎病病原菌致病机理及植物的抗病机理,内容包括信号传导系统、细胞壁裂解酶、参与克服植物防御响应系统的一些酶、代谢途径的致病相关基因及枯萎病抗病相关基因的研究,并对病原菌与寄主植物之间的互作机理研究的前景进行了简单评析。

木薯褐斑病菌的室内药剂筛选

采用孢子萌发法对分离自海南的木薯褐斑病菌进行了10种杀菌剂的室内筛选。结果表明,国光多菌灵(50%多菌灵WP)和咪鲜胺(25%咪鲜胺EC)的EC50值最小,抑菌效果最好;腐霉利(50%WP)的EC50值最大,抑菌效果最差。建议生产上使用多菌灵和咪鲜胺等来防治木薯褐斑病。

木薯细菌性枯萎病菌hrpG和hrpX基因的克隆和初步分析

根据黄单胞类病原菌hrpG和hrpX基因序列,设计简并引物,通过PCR扩增从我国木薯细菌性枯萎病菌中克隆到这2个基因。结果表明:10个菌株的hrpG基因编码区长度均为792 nt,编码263个氨基酸,相互之间最多有4个碱基和1个氨基酸的差异;而hrpX基因编码区长度均为1 431 nt,编码476个氨基酸,相互之间最多有4个碱基和3个氨基酸的差异。所获hrpG基因序列和辣椒斑点病菌等黄单胞菌同源基因相似性最高,核苷酸序列为95%,氨基酸序列为96%。所获hrpX基因核苷酸序列和辣椒斑点病菌等的相似性最高,为97%,而氨基酸序列和柑橘溃疡病菌等同源基因相似性最高,为99%。这2个基因的聚类分析结果表明,木薯细菌性枯萎病菌和豆褐色黄单胞菌、柑橘溃疡病菌和甘蓝黑腐病菌的亲缘关系最近。

国内木薯病害普查及细菌性萎蔫病安全性评估

2007～2010年,对广西、海南、云南等木薯主产区进行病害普查。结果发现,至今危害国内木薯的主要病害有7种,包括真菌病害6种[褐斑病(Cercosporidium henningsii)、炭疽病(Colletotrichum gloeosporioides)、离孺孢叶斑病(Bipolaris setariae)、棒孢霉叶斑病(Corynespora cassiicola)、白点病(Phaeoramularia manihotis)和萎蔫叶斑病(Cercospora vicosae)],细菌病害1种[细菌性萎蔫病(Xanthomonas axonopodis pv manihotis)],其中离孺孢叶斑病和棒孢霉叶斑病为新发病害;7种病害中褐斑病和细菌性萎蔫病发生面积最大,危害最为严重。风险评估结果表明,细菌性萎蔫病菌为高度危险性有害生物。

柑桔黄龙病环介导等温扩增检测方法建立及应用

以柑桔黄龙病(Citrus Huanglongbing,HLB)病原菌16s rDNA保守区域为靶标设计LAMP引物,建立柑桔黄龙病的环介导等温核酸扩增(loop-mediated isothermal amplification assay,LAMP)检测技术。LAMP检测方法具有极高的检测特异性和灵敏性,其检测下限约为1 pg/μL质粒DNA,是PCR检测灵敏度的100倍,能快速、准确地对田间疑似样品进行检测。建立的柑桔黄龙病LAMP检测方法是对黄龙病检测方法的拓展和延伸,可以很好地应用于田间检测,可满足基层以及科研单位对该病害检测的需要。

橡胶树多主棒孢病菌原生质体转化体系的建立

由多主棒孢病菌侵染引起的棒孢霉落叶病是严重危害橡胶生产的一种世界性病害,近年来在中国也有发生。在菌龄、细胞壁酶种类、酶作用浓度、作用时间、酶解温度、渗透压稳定剂等因素对橡胶树多主棒孢原生质体制备和再生影响分析的基础上,笔者首次建立了PEG介导的多主棒孢病菌遗传转化体系,并获得了多主棒孢病菌绿色荧光转化子。该体系中,多主棒孢病菌的原生质体再生率为19.12%,转化率为10.34个/μgDNA。

贵州省大豆孢囊线虫的发生与分布

大豆孢囊线虫病是威胁大豆生产的重大病害之一。2015-2016年,采用随机取样的方法对贵州省大豆孢囊线虫的发生和分布情况进行了调查。调查范围包括贵阳、六盘水、安顺、毕节、黔西南和遵义等6个地区下辖的14个县(区),共采集土样287份。调查结果表明,贵州省大豆孢囊线虫的总检出率为28.2%,其中毕节地区的大方县和赫章县孢囊检出率最高,分别达到46.7%和45.0%,而在遵义市、贵阳市和黔西南州孢囊检出率为0。六盘水地区的水城县孢囊发生量最大,平均孢囊数为3.4个/200g土,最大孢囊数达到17个/200g土;安顺地区的镇宁和关岭县大豆孢囊线虫发生程度最轻,每200g土样平均孢囊数分别为0.3和0.2个,最大孢囊数仅为2个/200g土。分离的孢囊主要形态特征与大豆孢囊线虫一致,并且ITS序列与甘肃大豆孢囊线虫种群序列一致性达100%。根据形态学观察和ITS序列分析比对,将贵州省采集到的孢囊线虫鉴定为大豆孢囊线虫。本研究结果可为有效防控贵州省大豆孢囊线虫病提供依据。

木薯疫霉根腐病病原初步鉴定及其生物学特性测定

2010年11月,在对海南省儋州市的木薯病害调查中发现一种根腐病。经致病性评价,分离获得病原菌。显微观察发现,菌丝无分隔,孢囊梗呈简单合轴分枝,孢子囊多顶生,倒梨形,厚垣孢子大量产生,球形、顶生。形态观察结果初步表明,其为棕榈疫霉(Phytophthora palmivora)。ITS序列分析表明,其和几株棕榈疫霉(HQ237481,HQ237478和HQ237477)的序列同源性为99%。生物学特性研究表明,OA或CMA培养基、26~30℃、p H 5、D-木糖醇、乙酸铵、光暗交替是病菌生长最适条件,菌丝致死温度为50℃,10 min。

茄子嫁接砧木对青枯病的抗性评价

利用伤根灌菌接种法对收集的15个茄子砧木材料（品种）、接穗及其嫁接组合进行了青枯病抗性评价,结果表明：青莲530、青莲605、青莲606和丁茄表现高抗,5个砧木材料中抗,2个感病,4个高感.在15个嫁接组合中,以青莲530、青莲605和青莲606对青枯病菌抗性最好,表现为高抗,其他2个抗病,5个中抗,而丁茄等4个嫁接组合表现感病,1个高感.3个野茄材料（青莲530、青莲605、青莲606）及其嫁接苗在接种5 ～10 d后开始发病,发病初期少量植株出现叶片萎蔫,病情稳定后,病情指数均保持在一个比较低的水平,对青枯病均表现为高抗.而供试的高感、感病砧木及其嫁接苗在接种茄子青枯菌5d后开始发病,60 d后病情开始稳定,病指指数超过54.44,多数植株枯死.青莲530、青莲605、青莲606 3个砧木材料的实生苗及其嫁接组合均对青枯病表现出高抗,具有良好的推广应用潜力.

海南省蔬菜根结线虫发生种类与分布

2014年-2018年,对海南省蔬菜根结线虫病害进行了田间随机采样调查和病原种类分子鉴定。结果显示,蔬菜根结线虫病在海南18市县均有发生,且大部分旱田连作地块病株率达到80%以上。进一步对采集的295份根结线虫样本种类进行了分子鉴定,共鉴定出象耳豆根结线虫、南方根结线虫和爪哇根结线虫3种病原种。其中,象耳豆根结线虫单一检出率达到62.37%,南方根结线虫单一检出率为23.39%,爪哇根结线虫的检出率仅为5.76%,象耳豆根结线虫和南方根结线虫复合侵染检出率为8.47%。除五指山市样本以外,海南其余17市县样本均检测到象耳豆根结线虫侵染为害。本研究显示象耳豆根结线虫为海南省蔬菜上的优势病原根结线虫种类,该结果对指导品种布局、制定根结线虫病害的防治策略具有重要意义。

阳光消毒防治海南冬季辣椒根结线虫病效果评价

辣椒根结线虫病在海南全省普遍发生,本研究通过对土壤覆盖透明塑料地膜,探讨阳光消毒对海南冬季露地辣椒根结线虫病的防治效果。结果表明,覆膜期间5、10、15、20cm土层最高温分别可达73、57.8、45.1、43.9℃。覆膜处理30～60d,土壤中根结线虫二龄幼虫数量减少54.8%～57.5%,辣椒移栽2个月后的防治效果可达65.9%～70.3%,移栽5个月后仍具有55.9%～59.1%的防治效果。不同覆膜时间处理间防治效果无显著性差异。海南拥有丰富的阳光资源,采用覆盖透明塑料地膜的方法对根结线虫具有良好的防治效果,可减少化学杀线剂的使用量,提高经济效益。

香瓜根结线虫种类鉴定及杀线剂的室内毒力测定

利用形态学与分子生物学方法,对采集于海南省文昌市乌鸡塘村香瓜根系上的根结线虫种群进行鉴定,明确其为象耳豆根结线虫(Meloidogyne enterolobii),同时测定3种常用杀线剂对象耳豆根结线虫2龄幼虫的室内毒力。结果表明,95%阿维菌素原药对象耳豆根结线虫2龄幼虫的毒杀效果最好,LC50值为0.351 mg·L^(−1);85%噻唑膦原药和95%氟吡菌酰胺原药对象耳豆根结线虫2龄幼虫的LC50值分别为0.82 mg·L^(−1)和7.783 mg·L^(−1)。