南阳牛血液基因组DNA提取与ANGPTL4基因的PCR扩增

采集20例南阳牛的血液,采用酚/氯仿法分离白细胞提取基因组DNA,并且对ANGPTL4基因部分序列(677～998 bp)PCR扩增条件进行了优化。结果表明,获得的牛基因组DNA经0.8%琼脂糖凝胶电泳检测,主条带清晰,表明获得的南阳牛基因组DNA可以用于后续实验;以所提取的基因组DNA为模板,优化ANGPTL4基因片段扩增的条件,结果表明,最理想的PCR扩增条件是模板量为2μL(50 mg/L),Taq聚合酶(5 u/μL)的量为0.8μL,退火温度为56℃,循环次数为35次。

逆转录环介导等温扩增检测风疹病毒RNA方法的建立

目的建立逆转录环介导等温扩增快速检测风疹病毒RNA的方法。方法选取保守基因E1设计引物,建立并优化RT-LAMP反应体系,同时进行特异性和敏感性评估。在此基础上应用建立的方法对46例ELISA检测阳性的孕妇血清标本进行检测,并与RT-PCR相比较。结果建立的方法仅对风疹病毒RNA扩增出特有的梯状条带,酶切结果与预期相符。46例孕妇标本经RT-PCR和RT-LAMP检测,分别检出28例和29例。结论该方法特异性强、敏感性高、简便快速且成本低,有望在临床检测中发挥一定的作用。