抗真菌多肽APS-1的分离纯化与特性

蜡状芽孢杆菌（Ｂａｃｉｌｕｓｃｅｒｅｕｓ）Ｓ１菌株对多种作物真菌性病害有良好的防效。本文报道了Ｓ１菌株产生的抗真菌物质的纯化及其部分特性。该菌株的发酵液经过酸沉淀和有机溶剂抽提、ＳｅｐｈａｄｅｘＧ１００与ＤＥＡＥ５２柱层析等步骤后，抗真菌物质得到纯化，硅胶薄层层析显色为单点。该物质在２７５ｎｍ处有吸收峰，对蛋白酶有一定耐受性，茚三酮反应呈阴性，但酸水解后，茚三酮反应呈阳性，双缩脲反应也呈阳性。氨基酸组分分析结果表明，该物质由谷氨酸、天门冬氨酸、酪氨酸、丝氨酸、苏氨酸、脯氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、缬氨酸和一种异常氨基酸组成。推测该物质为一种环状多肽，命名为ＡＰＳ１。紫外光照射和高压灭菌处理后，ＡＰＳ１的抗真菌活性损失不大。平板抑菌试验结果表明，ＡＰＳ１对９种供试真菌的孢子萌发有抑制作用。

绿僵菌分解昆虫外壳蛋白酶MAP-21的纯化与特性

以蝉蜕为底物诱导绿僵菌产生分解昆虫外壳蛋白酶。发酵液经超滤、UltrogelAcA54凝胶层析、制备IEF电泳 ,纯化了一种蛋白酶MAP - 2 1 ,SDS -PAGE电泳后经银染色呈单带。该酶的Mr为 2 7kD左右 ,pI为 7 6。它的特异识别氨基酸为Arg,其活性可被PMSF和TLCK抑制 ,表明其活性中心有Ser和His残基。它还可被胰蛋白酶的典型抑制剂Leu peptin、Antipain及STI等所抑制 ,而胰凝乳蛋白酶抑制剂TPCK和胰凝乳弹性蛋白酶抑制剂TEI对其活性无影响。专一底物和抑制剂特性试验结果表明MAP - 2 1是类胰蛋白酶。此外 ,该酶还可被EDTA所抑制 ,表明金属离子为其活性所必需。另外还研究了MAP - 2 1的最适作用温度和 pH ,以及温度耐受性等特性。

棕尾别麻蝇(Sarcophagab peregrina)幼虫与蛹血淋巴凝集素的纯化与特性

用亲和层析法纯化了棕尾别麻蝇幼虫和蛹血淋巴凝集素。以兔红细胞吸附幼虫血淋巴凝集素为抗原制备的抗体、胎球蛋白和甲状腺蛋白等三种亲和层析吸附剂纯化得到的幼虫凝集素是相同的 ,其分子量 73kD左右。用甲状腺球蛋白为亲和配基纯化的蛹血淋巴凝集素由二种亚基组成 ,其分子量分别为 30和 32kD。幼虫和蛹血淋巴凝集素活性的抑制糖明显不同 :乳糖、岩藻糖和N 乙酰半乳糖胺对幼虫血淋巴凝集素活性有抑制作用 ;而甘露糖胺、半乳糖胺和葡萄糖胺则对蛹血淋巴凝集素有一定抑制。而且 ,用兔红细胞吸附幼虫血淋巴凝集素为抗原制备的抗血清对蛹的凝集素活性无交叉反应 ,表明这两种凝集素是不相同的。虽然本文所纯化的麻蝇蛹血淋巴凝集素的分子量和Komano等报道的麻蝇蛹以及幼虫体壁伤害诱导的凝集素SPL相同 ,但其糖的抑制特性有明显差异。

免疫亲和层析法纯化棕尾别麻蝇(Sarcophagaperegrina)幼虫血淋巴凝集素

报道了利用免疫亲和层析法纯化棕尾别麻蝇幼虫血淋巴凝集素的结果．哺乳动物红细胞能够特异地吸附凝集素．用兔红细胞与麻蝇幼虫血淋巴凝集素形成的复合体免疫供血家兔，得到麻蝇幼虫血淋巴凝集素的抗体．再利用抗体制备亲和吸附柱，通过免疫亲和层析一次性纯化了麻蝇幼虫血淋巴凝集素． Ｓ Ｄ Ｓ Ｐ Ａ Ｇ Ｅ结果显示，该凝集素的分子量约为７３ ｋ Ｄ．这一结果，与用对麻蝇幼虫血淋巴凝集素有抑制作用的糖蛋白—胎球蛋白和甲状腺球蛋白为配基，亲和层析纯化的结果完全相同，表明用这种免疫亲和层析法纯化凝集素是可行的．为不清楚专一性识别糖或专一性识别糖不典型，难于用普通亲和层析纯化的凝集素，提供了一种有效的纯化方法．

免疫亲和层析法纯化苦瓜几丁酶

用扁豆几丁酶免疫家兔，获得抗扁豆几丁酶的抗体，将此抗体与Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ ４Ｂ偶联，制备免疫亲和吸附剂，用以纯化苦瓜几丁酶．苦瓜叶片的粗提液经过免疫亲和吸附柱后，可获得电泳纯的几丁酶，其分子量为３５ ｋＤ，与用几丁质凝胶为亲和吸附剂的纯化结果一致．表明利用植物几丁酶在结构上的保守性，用免疫亲和法可纯化不同植物的同类几丁酶．与几丁质凝胶亲和柱相比，免疫亲和法纯化植物几丁酶具有快速、亲和柱可重复使用等的优点．利用免疫亲和层析获得的纯化样品，研究了苦瓜几丁酶对真菌的抑制试验，研究结果表明，苦瓜几丁酶能分解棉花枯萎病菌的菌丝体细胞壁制备物，并对其孢子芽管的伸长有一定抑制作用．

苦瓜几丁酶的纯化及性质

几丁酶(EC 3·2·1·14)能将几丁质分解为寡聚N-乙酰胺基葡萄糖或N-乙酰胺基葡萄糖。几丁质是许多真菌细胞壁的主要成分。在高等植物中未发现几丁质的存在,但却广泛存在有几丁酶。近年来的研究表明,植物中的几丁酶在植物对病原真菌侵染所作出的保卫反应中有重要的作用。植物几丁酶的性质与功能已引起人们的兴趣和重视。苦瓜(Momordica charantia L.)是一种病害很少的蔬菜作物,其几丁酶的纯化及性质研究尚未见报道。为了探讨苦瓜抗病性的蛋白质基础,本文对此进行了研究。

对黄萎病不同抗性的棉花品种(系)的酯酶同工酶等电聚焦谱带分析

用注射法将黄萎病菌孢子接种到抗性不同的7个棉花品种(系)的茎中,利用等电聚焦电泳技术研究了供试材料接种后叶片的酯酶同工酶,结果表明,感病品系的酯酶同工酶谱与抗病品种(系)有明显差异,前者的主带比后者多2条。

苦瓜叶片几丁酶的纯化

利用亲和层析和Sephadex G-200柱层析纯化了苦瓜的几丁酶。纯化后的几丁酶在SDS聚丙烯酰胺凝胺胶电泳中为单带,分子量为35KD,表现内切酶活性,外切酶活性很弱。

多效唑对棉花主要病菌的抑制作用

研究了多效唑对4种棉花主要病菌的抑制作用。试验结果表明,多效唑明显降低病菌的生长速率;处理浓度为100ppm 时,4种病菌的生长完全停止;多效唑对4种病菌的抑制效应存在一定差异,棉花炭疽病菌对多效唑最敏感,其ED_(50)为2.5ppm 左右,其次为棉花立枯病菌和枯萎病菌,它们的 ED_(50)值分别为4ppm 和5ppm,黄萎病菌对多效唑的敏感度较小,其 ED_(50)值在10ppm 以上。在温室里试验了多效唑对棉花苗病的抑制作用,证明多效唑能有效地抑制棉花苗病。多效唑不仅是一种植物生长调节物质,也是一种优良的杀真菌剂。

利用分子标记预测杂交水稻产量及其构成因素

利用AFLP、RAPD、SSR技术分析了 10个恢复系和 5个不育系的 931个基因座 ,利用 15个亲本配制了 5 0个杂交组合 ,在泸州和重庆 2个环境下同时种植 ,考察了产量及其构成因素 ,从 931个基因座中筛选出了与之相关的阳性座位、增效座位、减效座位、非环境型座位 ,并分析了它们与杂种产量及其构成因素间的关系。结果表明 ,利用所有座位计算的遗传差异与产量及其构成因素的相关性 ,绝大多数性状未达显著水平 ,不能直接用来预测产量及其构成因素。阳性座位在一定程度上可以提高相关系数 ,因性状不同而存在差异 ,在多数性状上预测产量及其构成因素还有一定难度 ;增效座位和减效座位可以大幅度提高相关系数 ,在不同的环境下也表现一致 ,可以用来预测产量及其构成因素 ;非环境型座位计算的相关系数也较高 ,但低于增效座位和减效座位 。

时空操控棉花胚珠表皮细胞生长素的生物合成以提高纤维的产量和品质

传统育种方法在同时提高棉花纤维的产量和品质方面的作用是有限的。植物荷尔蒙吲哚-3-乙酸（IAA）在棉花纤维起始细胞中的积累促使我们研究利用基因工程方法增加胚珠表皮细胞中fAA水平带来的影响。

水稻PCR扩增模板的快速制备

用碱处理水稻嫩叶,取碱处理水稻叶片浸出液直接用作PCR扩增的模板,扩增结果稳定、准确,与常规提取的DNA扩增效果相比没有显著差异。用此方法制备的模板室温下2周之内、4℃下3周之内、-20℃下4个月以上扩增结果不变。此方法所需试剂均为常规试剂,具有需要材料少、成本低、简便、快捷等优点,尤其适合材料比较宝贵的转基因水稻的预筛选和大样本量的PCR检测,为分子标记技术的实际应用创造了条件。

棉花洞A雄性不育系花药发育的mRNA差别显示

应用cDNA AFLP(Amplifiedfragmentlengthpolymorphism)技术 ,分析了棉花洞A雄性不育和可育材料在花药发育过程中花粉发育相关基因表达的差异。结果表明 :在花药发育的相同时期 ,不育和可育花粉cDNA AFLP的谱带在单核期的差异大于减数分裂期。在花粉发育过程中 ,花粉发育相关基因的表达具有时空特异性。共回收了 6 4条差异cDNA片段 ,随机选择 3个片段标记为探针 ,RNA斑点杂交分析表明 ,GHA2 7具有花器官组织特异性 ,仅在花器官中表达 ;GHA2 8、GHA4 7则具有花药组织特异性且仅在可育花药中表达。序列相似性比较表明 :GHA2 7与植物ADP ribosylationfactor (ARF)基因有较高的相似性 ,而GHA2 8、GHA4

野败型杂交水稻恢复基因的AFLP标记研究

选择汕优６３ Ｆ_２的高可育株和高不育株分别建立 ２个基因池，利用 ＡＦＬＰ标记技术对 ２ 池间的多态性进行了研究。分析表明，６４组引物在两池间全部扩增出了稳定、清晰的带纹，共 计３ ４７７条带。多数引物在基因池间未呈现多态性，只有引物组合Ｅ－ＡＧＣ／Ｍ－ＣＡＡ在基因池 间表现多态性，用双亲、Ｆ_１、Ｆ_２单株以及生产和育种上的骨干不育系与恢复系验证均表明这组 引物所揭示的多态性片段与恢复基因有关（命名为ＡＰ_１）。ＡＰ_１为单拷贝，与恢复基因间的距离 为 ４．７６ｃＭ。

昆虫抗菌肽及其研究进展

昆虫是世界上最大的生物种群，据估计其种类多于１０６，个体数量超过１０１８，占整个动物数量的９０％。除海洋外，其余所有的生态环境都有昆虫的分布［１］，这表明昆虫有极强的适应能力和防御能力。但研究发现，昆虫并不具有高等动物那样高度专一的免疫体系，即昆虫缺...

球孢白僵菌降解昆虫体壁蛋白酶基因CDEP-1的克隆与序列分析

构建了球孢白僵菌不同诱导时间的混合cDNA文库。根据丝氨酸类蛋白酶的保守区域设计引物 ,以构建cDNA文库同样的mRNA为模板 ,采用RT PCR法得到长度为 5 94bp的片段BbP。序列测定表明BbP是球孢白僵菌类枯草杆菌蛋白酶Pr1的一部分。以BbP为探针 ,从上述cDNA文库筛选得到长度为 15 5 7bp的克隆CDEP 1。CDEP 1含有一个 1134bp的开放阅读框 (ORF) ,编码 377个氨基酸、分子量为 386 16、PI=8.30 2的蛋白酶前体。CEDP 1的核苷酸序列与蛋白酶K、金龟子绿僵菌Pr1、球孢白僵菌Pr1的同源性分别为 :5 7.9%、5 4 .7%、83.3%。根据cDNA序列扩增到CDEP 1的基因组序列 ,分析表明其中含有 3个内含子。Southern杂交表明CDEP 1在球孢白僵菌是单拷贝。

棉花LIM结构域基因(GhLIM1)的克隆和表达分析

LIM结构域蛋白是一个重要的发育调控因子 ,参与基因转录、细胞骨架建成和信号传导等许多发育调控过程。胞质骨架是形成和稳定细胞形态以及传递物质、能量和信息的重要成分。为研究棉花纤维细胞发育过程中胞质骨架的形成和作用机理 ,通过棉花纤维EST序列整合 ,从陆地棉徐州 14 2胚珠 (含纤维 )中扩增并克隆出棉花LIM结构域基因的编码区段。该棉花LIM结构域基因 (GhLIM1)长 84 8bp ,包含一个 5 70bp的开放阅读框 ,推导的氨基酸序列 (189个氨基酸 )与拟南芥、烟草和向日葵的LIM结构域蛋白有极高的同源性 ,而且两个LIM结构域完整。每个LIM结构域具有植物LIM结构域共有的双锌指结构C X2 C X17～ 19 H X2 C X2 C X2 C X16～ 2 4 C X2 H。RT PCR和Northern杂交分析表明 ,该基因 (GhLIM1)在陆地棉的根、茎尖、下胚轴、叶片、花蕾、花药、胚珠和不同发育时期的陆地棉纤维 (4DPA、12DPA、18DPA)以及海岛棉纤维 (18DPA)和中棉纤维 (12DPA)中均有表达 ,但GhLIM1基因在茎尖、纤维和有纤维的胚珠中表达量更高 ,因此GhLIM1基因应与棉花纤维发育有密切关系。

利用YADE法进行棉花基因组PCR步行

设计了一种依靠“Y”形接头延伸未知序列的方法 (YADE ,Y shapedAdaptorDependantExtension) ,成功地抑制了在未知序列扩增中的单引物扩增。用这种方法从棉花基因组中扩增了一个棉花胚珠cDNA片段F0 2 7的相邻序列———F0 2 7S和F0 2 7A。重叠分析表明 ,F0 2 7S与F0 2 7有 10 4bp的重叠 ,F0 2 7A与F0 2 7有 175bp的重叠。两个延伸片段分别含有 1和 3个可能的内含子 ,内含子均具有保守的边界序列GT -AG和与哺乳动物类似的分枝点序列。还对YADE法扩增未知序列的优缺点和可能的改进作了进一步讨论。

超量表达苹果酸脱氢酶基因提高苜蓿对铝毒的耐受性

在酸性土壤中,铝毒是许多作物正常生产的主要限制因子.虽可通过施用生石灰来改良土壤酸碱度,但只能改善土壤表层,在实际应用中受到很大限制.紫花苜蓿作为一种非常重要的牧草、饲料,在酸性土壤条件下苜蓿生长缓慢甚至死亡.我国南方水热资源丰富,但土壤多偏酸性,限制了苜蓿南移.有机酸能螯合铝离子,减轻铝对植物根系的危害.苹果酸是游离铝离子的有效螯合剂,而苹果酸脱氢酶(Malate Dehydro-genase,MDH)催化草酰乙酸形成苹果酸.本研究在苜蓿中超量表达苹果酸脱氢酶基因,通过抗生素筛选、组织化学染色和PCR扩增等技术鉴定出转化植株,并对转化株系进行了耐铝胁迫试验,比较分析了转基因株系与非转基因株系的的相对伸长量,转基因株系根相对伸长量比对照高出3.6%～22.5%.说明超量表达neMDH基因可提高了转基因苜蓿对铝毒的耐受性.

我国中籼杂交稻亲本的DNA变异性研究

利用 9个随机引物对 4 2个中籼“三系”杂交稻骨干亲本 (保持系和恢复系 )进行了 DNA遗传差异分析。结果表明 :恢复系、保持系遗传多样性小。恢保间遗传一致性高达 0 .87,遗传距离则为0 .1377。保持系已选育出较多的材料遗传差异超过了珍汕 97B,而恢复系选育仍未突破明恢 63,杂交稻遗传差异未明显大于汕优 63。双亲遗传差异小可能是产量徘徊的重要原因之一 ,限制因素在于恢复系。增加亲本遗传多样性和增大双亲遗传差异是当前中籼“三系”杂交稻育种的重要任务之一 。