Gli1抑制剂GANT61对髓母细胞瘤细胞增殖和凋亡的影响

目的 探讨Gli1抑制剂GANT61对髓母细胞瘤细胞增殖和凋亡的影响。方法 取髓母细胞瘤Daoy细胞,随机分为对照组和10、50、100μmol/LGANT61组,对照组加入0.1%DMSO,10、50、100μmol/LGANT61组分别加入10、50、100μmol/LGANT61和0.1%DMSO。采用MTT法测算细胞增殖抑制率,流式细胞仪检测细胞凋亡指数和细胞周期,qRT-PCR法检测细胞中Gli1、Bcl-2mRNA表达,Westernblotting法检测细胞中Gli1、Bcl-2蛋白表达。结果 各浓度GANT61组细胞增殖抑制率、细胞凋亡指数均高于对照组,且50、100μmol/LGANT61组高于10μmol/LGANT61组,100μmol/LGANT61组高于50μmol/LGANT61组(P均<0.05)。各浓度GANT61组G1期细胞比例均高于对照组、S期细胞比例均低于对照组,且50、100μmol/LGANT61组G1期细胞比例高于10μmol/LGANT61组、S期细胞比例低于10μmol/LGANT61组,100μmol/LGANT61组G1期细胞比例高于50μmol/LGANT61组、S期细胞比例低于50μmol/LGANT61组(P均<0.05)。各浓度GANT61组Gli1、Bcl-2mRNA和蛋白相对表达量均低于对照组,且50、100μmol/LGANT61组低于10μmol/LGANT61组,100μmol/LGANT61组低于50μmol/LGANT61组(P均<0.05)。结论 GANT61能够抑制髓母细胞瘤细胞的Gli1、Bcl-2mRNA及蛋白表达,从而抑制细胞增殖,增加G1期细胞比例,促进细胞凋亡。

GANT61对髓母细胞瘤Daoy细胞增殖、凋亡的影响及作用机制

目的探讨GANT61对髓母细胞瘤(MB)Daoy细胞增殖、凋亡的影响及作用机制。方法将人MB Daoy细胞正常培养24 h,然后分为4组:A组,培养液中加入0.1%二甲基亚砜(DMSO);B组,培养液中加入10μmol/L GANT61和0.1%DMSO;C组,培养液中加入20μmol/L GANT61和0.1%DMSO;D组,培养液中加入40μmol/L GANT61和0.1%DMSO。采用噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖,采用实时定量聚合酶链反应(PCR)检测GLI家族锌指蛋白1(GLI1)mRNA、GLI家族锌指蛋白2(GLI2)mRNA的相对表达量,采用蛋白质印迹法(Western blot)检测细胞周期蛋白D1(cyclin D1)、p21反胱天蛋白酶3(caspase 3)的表达水平,采用流式细胞术检测细胞周期。结果培养24 h后,C组和D组细胞的光密度(OD)值均低于A组,差异均有统计学意义(P<0.05);培养48 h后,C组和D组细胞的OD值均低于A组,D组细胞的OD值低于B组和C组,差异均有统计学意义(P<0.05)。C组和D组细胞中GLI1 mRNA和GLI2 mRNA的相对表达量均低于A组,D组细胞中GLI1 mRNA和GLI2 mRNA的相对表达量均低于B组,差异均有统计学意义(P<0.05)。C组和D组细胞中cyclin D1蛋白表达水平均低于A组和B组,p21、caspase 3蛋白表达水平均高于A组和B组,差异均有统计学意义(P<0.05)。B组、C组和D组中G0/G1,期细胞比例均高于A组,G2/M期细胞比例均低于A组,差异均有统计学意义(P<0.05);C组和D组中G0/G1,期细胞比例均高于B组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论GANT61对MB Daoy细胞具有抑制细胞增殖和促进细胞凋亡的作用,可能是通过调节GLI1、GLI2的mRNA水平进而影响cyclin D1、p21及caspase 3蛋白表达来实现。

努力提高执行代表职务的能力

我作为一名省人大代表,耳闻目睹了地方人大常委会走过的光辉历程和取得的辉煌业绩,我由衷地感到,地方人大常委会设立的20年,是人民代表大会制度不断发展完善的20年。以人民当家作主为核心的中国社会主义民主政治建设进程正在阔步前进,这充分说明,党中央关于在县级以上地方人民代表大会设立常委会的决策是无比正确的。作为人大代表。

miR-21对人髓母细胞瘤DAOY细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨miR-21对人髓母细胞瘤DAOY细胞增殖和凋亡的影响。方法人髓母细胞瘤DAOY细胞分为实验组、对照组和空白组。空白组不进行转染,加入等量DMEM培养基;对照组加入无义序列/脂质体复合物;实验组加入miR-21inhibitor脂质体复合物。3组细胞采用实时荧光定量PCR法检测miR-21和PRDX3mRNA表达水平,采用Westernblot法检测miR-21和PRDX3蛋白相对表达量,采用CCK-8法检测细胞增殖率,采用AnnexinV-FITC法检测细胞凋亡率,应用流式细胞仪检测细胞内活性氧水平。结果转染24、48h后,实验组细胞miR-21、PRDX3mRNA和蛋白表达水平明显低于对照组和空白组(P<0.05),对照组与空白组比较差异无统计学意义(P>0.05);转染24、48h后,实验组细胞增殖率[(4.20±0.29)%、(8.20±4.39)%]明显低于空白组[(48.19±0.42)%、(80.09±0.55)%]和对照组[(45.22±1.02)%、(78.28±1.04)%](P<0.05),细胞凋亡率[(7.17±0.21)%、(11.40±0.26)%]、细胞平均荧光强度(189.33±45.39、192.40±50.88)明显高于空白组[((3.20±0.26)%、(3.07±0.31)%,168.09±39.42、160.87±41.44)]和对照组[(3.47±0.32)%、(4.20±0.44)%,172.49±44.92、165.20±40.61](P<0.05),空白组细胞增殖率、细胞凋亡率及细胞平均荧光强度与对照组比较差异均无统计学意义(P>0.05)。结论抑制miR-21的表达可降低人髓母细胞瘤PRDX3的表达水平,促使细胞内活性氧水平增加,从而抑制细胞增殖与促进细胞凋亡。