猪胞内劳森菌抗体间接ELISA检测方法的建立及应用

猪增生性肠病(PPE),通常被称为猪回肠炎(PI),由胞内劳森氏菌(LI)感染引起。为建立检测LI抗体的间接ELISA方法,本研究构建LI外膜蛋白基因(LI0841)的重组表达质粒p ET28a-LI0841,经测序无误后转化BL21(DE3)宿主菌,经IPTG诱导表达,采用SDS-PAGE检测重组蛋白LI0841蛋白(rLI0841)的表达形式,经Ni柱纯化后采用western blot鉴定其反应原性。SDS-PAGE结果显示,在32 ku处出现目的条带,且其主要以可溶性形式表达;western blot结果显示,r LI0841能够与兔LI多克隆抗体特异性反应,表明纯化的r LI0841具有较强的反应原性,可作为包被抗原用于建立间接ELISA检测方法,经各反应条件优化初步建立LI抗体的间接ELISA检测方法。各反应条件的优化结果显示,4.38 ng/孔的r LI0841以4℃过夜包被最佳;血清最佳稀释度为1∶100,37℃反应0.5 h;羊抗猪Ig G-HRP最佳稀释度为1∶10000,37℃作用0.5 h;TMB底物37℃显色15 min。利用建立的间接ELISA方法检测猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒、猪伪狂犬病病毒、副猪嗜血杆菌、猪链球菌、传染性胸膜肺炎放线杆菌及经美国Biostone PPE抗体检测试剂盒检测为阳性的猪血清,评估该方法的特异性;将LI阳性血清2倍倍比稀释(1∶100~1∶51200)后,采用本研究建立的间接ELISA方法检测,评估该方法的敏感性;以同一批次和不同批次包被的酶标板分别检测5份不同LI抗体水平的猪血清,评估该方法的重复性。结果显示,该方法除能检测到LI阳性血清外,其余相关病原的阳性血清均为阴性,特异性较强;LI阳性血清1∶800稀释时检测结果仍为阳性,敏感性较高;对5份不同抗体水平的LI阳性血清的批内、批间重复性试验的变异系数均小于10%,重复性较好。利用该ELISA方法与美国Biostone公司PPE抗体检测试剂盒同时检测104份临床猪血清样品,比较二者的检测结果,并计算二者的符合率;采用建立的间接ELISA方法检测黑龙江、吉林等地区413份临床猪血清样品,分析LI在上述地区的流行状况。结果显示,两种方法的阳性符合率为90.91%,阴性符合率为91.84%,总符合率为91.35%;413份临床猪血清样品中LI的阳性检出率为59.81%(247/413),表明LI在黑龙江、吉林等地区的猪群中普遍存在。本研究建立了检测LI抗体的间接ELISA方法,该方法特异性强、敏感性高、重复性与准确性均较好,为临床PI血清流行病学调查提供技术支持。

中国水稻干尖线虫部分群体对水稻的致病力测定

为了解不同地理群体和寄主群体的中国水稻干尖线虫对水稻的致病力差异,通过室内水稻盆栽接种试验,对来自中国6个省、2种不同寄主植物上的水稻干尖线虫8个群体的致病力进行了测定和分析。结果表明,供试的8个水稻干尖线虫群体均能侵染供试的3个水稻品种,但不同群体对水稻同一品种的致病力,以及同一群体对不同水稻品种的致病力均存在差异;不同水稻品种被侵染后的症状也存在差异,仅有辽盐16被所有群体侵染后均表现"干尖"症状,武育粳3号和博优998没有明显"干尖"症状。供试的3个水稻品种接种水稻干尖线虫后均能抽穗,但是株高、穗长、单株穗数和千粒重受到不同程度的影响。此外,水稻干尖线虫对水稻的致病力与群体寄主相关,来自草莓的水稻干尖线虫群体对水稻的致病力明显弱于来自水稻上的群体;在供试的水稻干尖线虫群体中,HN-2群体对水稻品种辽盐16的生长影响最大,但在稻株上的虫量最少,显示该群体繁殖数量不大,但具有较强的致病力。这说明水稻干尖线虫在水稻上的繁殖数与致病力之间并不一定呈正相关。这些结果表明中国的水稻干尖线虫可能存在不同的生理小种或致病型。

中国不同地区水稻干尖线虫种群的繁殖特性研究

【目的】明确来自中国不同地区的水稻干尖线虫种群的繁殖特性。【方法】通过室内组织培养的方法,研究来自中国8个省15个种群的水稻干尖线虫,在灰葡萄孢菌上的繁殖力及其繁殖适温。【结果】在灰葡萄孢菌上,供试的15个水稻干尖线虫种群在20℃不能很好繁殖,其中有9个种群的繁殖适温是25℃,6个种群的繁殖适温是30℃;20℃时,繁殖量最大种群的繁殖率是22.2,繁殖量最小种群的繁殖率仅有0.9,有3个种群无雄虫存在;25℃时,繁殖量最大种群的繁殖率是3 523.8,繁殖量最小种群的繁殖率是207.2,只有1个种群无雄虫存在;30℃时,繁殖量最大种群的繁殖率是1 525.0,繁殖量最小种群的繁殖率是6.9,所有种群均有雄虫存在。【结论】来自中国不同地区的水稻干尖线虫种群均能在灰葡萄孢菌上繁殖,种群之间的繁殖力和繁殖适温均存在差异,地理来源较远的种群之间差异较大;在适温条件下,华南地区多数种群的繁殖力大于其他地区,种群繁殖特性与地理来源有一定关系;所有种群均能孤雌生殖,后代均以雌虫为主,但不同种群的雌雄比有较大差异。

基于OBIA的武汉城市圈1990年～2015年建设用地变化检测及时空特征分析

武汉城市圈是国家中部崛起战略和"两型社会"建设的重要支撑点,研究其建设用地扩张规律对区域城市规划及国家和区域经济发展政策的制定实施具有重要意义.该文以1990年~2015年的Landsat TM/OLI遥感影像为数据源,采用面向对象的影像分析(Object-Based Image Analysis,OBIA)方法提取了武汉城市圈的建设用地信息,并用扩张面积、速度、强度以及紧凑度等指数分析了建设用地扩张的时空特征.结果显示:1)利用多种指数及SPM自动确定分类阈值,能较好地提取建设用地,分类总精度为94.3%;2)武汉城市圈建设用地呈逐步增加趋势,总扩张面积约251 893.96hm^2,前10a(1990年~2000年)扩张缓慢,后15a(2000年~2015年)的扩张面积、速度、强度分别是前10a的6.98、4.08和4.65倍;3)各城市建设用地面积在1990年~2015年均呈上升发展趋势,各城市的空间形态呈现由北向南、由西向东趋于紧凑型的发展态势.

民俗文化产业发展的创新路径——以河洛地区为例

民俗文化产业有其特殊的国家背景,其有效发展的意义十分重大。民俗文化产业发展面对全球化冲击和激烈的市场竞争,必须进一步转变观念,可以从均衡城乡民俗文化产业生产投入和市场销售,开拓民俗文化产业生产多元业态模式,提高民俗文化产业对现代科技和传播媒介的使用率,建设民俗文化产业市场日常消费经营的多种渠道等方面着手,挖掘促进民俗文化产业深度发展的创新途径。

土壤加砷对魔芋砷的含量、吸收与分布的影响

为了认识土壤砷污染与植物砷含量的关系,进行土壤加砷盆栽魔芋试验.结果表明,本实验条件下,魔芋球茎和茎叶的砷含量范围分别为2.12～14.98和1.23～21.23μg g-1,均与土壤加砷量呈极显著的线性相关.在对照下,球茎砷含量高于茎叶,在土壤加砷下,茎叶的砷含量高于球茎.魔芋的富砷量与土壤加砷量呈极显著的线性相关,在低土壤砷水平下,魔芋球茎富砷量大于茎叶,高土壤砷水平下,魔芋茎叶的富砷量大于球茎.同对照相比,土壤加砷降低了魔芋球茎富砷量所占比例,增加了魔芋茎叶富砷量所占比例,低土壤砷水平下,球茎富砷量所占比例高于茎叶,高土壤砷水平下,茎叶富砷量所占比例高于球茎.魔芋对土壤加砷的利用量与土壤加砷量呈极显著的线性相关,魔芋对土壤加砷的利用率只有0.25‰～0.84‰.魔芋球茎和茎叶对砷的富集系数分别为0.03～0.13和0.07～0.13,同对照相比,土壤加砷降低了球茎的富集系数,增加了茎叶的富集系数,在对照下,球茎的富集系数高于茎叶,在土壤加砷下,茎叶富集系数高于球茎.总之,土壤加砷不仅显著增加了魔芋球茎和茎叶的砷含量,也改变砷在魔芋体内的分布格局,魔芋是吸收利用土壤砷能力弱的植物,魔芋通过将所吸收的砷转移到地上部分以适应砷污染土壤环境.

人性悲剧之歌——简评方方市民题材小说

如果说,文学有永恒主题的话,那么,这个永恒的主题就是"人".而文学艺术的每一个毛孔都透射着人性的光辉,人性问题亦如斯芬克斯之谜一样扑朔迷离."人性历来是哲学家、文艺家、教育家争论的一个问题.古往今来,曾经出现过各种各样的关于人性的理论.例如我国古代,儒家有‘仁者爱人'的思想,并且有性善、性恶、性有善有恶、性三品、性无善恶等学说."①方方关注的是人,是人生,她是人性解剖的能手,她在其小说文本中展示出人性的复杂.方方创作初期的一些作品,如<"大篷车"上>、<司机秦大宝的故事>、<一棵树>、<走向远方>、<看不见的地平线>、<寻找的故事>等等,其中虽不乏对人性的解剖,但始终带有一种明快的青春旋律,显露出作者对生活的热爱.直至1987年发表中篇小说<风景>起,方方的小说一扫前期作品的诗情画意与脉脉温情,一反往日精神至上的清纯雅淡,让人感觉到生活中那么多的苦涩、艰难和沉重.它彻底撕开了人性丑陋、阴暗、自私的一面,揭示出由于人性恶所酿成的人生悲剧和生活悲剧,从而使方方的创作走出了单纯幼稚,迈入了成熟沉思.

全球化背景下的民族思考——王安忆小说简论

王安忆对于民族问题的思考，在其小说中体现为从对民族个体存在的思考，到对本土民族传统文化的思考，再到对全球化背景下的不同民族问题的思考，呈现出一个逐步开阔的过程。本文要分析的是王安忆对于全球化背景下的不同民族问题思考，这里所说的全球化背景下的民族问题思考，意指对于世界不同国家民族相互接触之间产生的有关问题的思考。具体来讲，自20世纪90年代开始至21世纪初，王费忆小说中体现出对于世界不同民族相互之间问题的探讨。至于文本中所呈现的具体内涵，这里将按照王安亿不同时期的相关小说文本，依次进行分析描述。

王琦瑶形象意蕴探微

王安忆的长篇小说《长恨歌》以四十年代上海"沪上淑媛"王琦瑶四十年来的情爱经历为线索,记述了她如何演绎了一曲饱含长恨的悲凉之歌。掌权的李主任,专情的程先生,无结局的康明逊,游戏的萨沙,畸恋的老克腊,依次走入她孤单无依的生活,却最终一个个弃她而去。无论在物质依靠上,还是在精神寄托上,王琦瑶所经历的几个男人终成情爱泡影。

试评《历史无情》中的男女形象

<历史无情>是现代作家师陀的一部长篇小说,当我们从性别视角,站在性别立场审视师陀作为男性作家所塑造的男女形象时,作品中人物形象因性别差异所显示的支配与被支配、统治与被统治的不平等两性关系异常突出,正如美国妇女运动代言人凯特·米利特所言,两性关系是一种政治关系.

论方方小说的文化意蕴

方方是中国当代文坛上著名的小说作家，她被论者归为新写实小说的代表作家已是定论，同时，方方小说中蕴含着深厚丰富的文化意蕴。在其市民题材经典作品《风景》中，显现出棚户区生存环境所反映出的棚户区文化特征：痞性文化；在其知识分子题材作品《祖父在父亲心中》、《乌泥湖年谱》等中，折射时代环境对知识分子的文化投影；在其爱情婚姻题材作品《在我的开始是我的结束》、《奔跑的火光》中，展示出当代商业时代都市和乡村女性所处文化语境下的生存环境。初步探讨方方题材各异的小说中的文化意蕴，以便深入认识其小说在当代中国文坛的文化价值。

家庭观念的凤凰涅槃

在以往有关文学研究方法论的研讨中,我们根据阐释学的视角理论和西方女性主义有关人的自然性别与社会文化性别理论,提出了文学研究的性别视角问题。视角作为一种阅读阐释文本的角度,关系到对文本意义的发现和阐释,关系到阅读者、阐释者能够从文本中看到什么和对什么熟视无睹、视而不见。作为一种文学研究的方法论,性别视角的合理性和有效性,就在于作为个体的一个个女性或男性都既是一定民族的、阶级的人,同时又是有性别的人,而性别在绵延几千年的父权等级制社会里,形成了一整套严密的以自然性别为基础的男主女从、男优女劣的社会文化性别观念,文学作为人的情感的、意识的与无意识的表现,自然会自觉和不自觉地将这些历史与社会的性别内涵携带进文学文本之内,只有运用综合性的双性主体间性的性别视角,才能将它们被长期遮蔽和曲解的意义澄明彰显出来。我们这次“性别视角下的文学文本解读”便是一次具体运用性别视角来解读文学文本的实践。文学文本的意义是丰富的和非自明性的(那些浅薄的和直白的教条式的文本除外),任何自以为高明的阅读者和阐释者,都很难一次性地将文本的意义一网打尽。如果说有一千个读者就有一千个哈姆雷特是阐释学的真理的话,那么,我们作为这一千个读者中的一个,对自己所感兴趣的文学文本,也应该有锲而不舍、一读再读,不惜读它十几次、几十次、一百次的勇气。此次以性别视角解读文本的实践,期待参与者能找到一个自己感兴趣的理论的与实际的问题切入,组织起相关文本说清楚一个问题。这样,文本的涵盖面需要相应的广阔,女性文本、“男性文本”或古今中外的文本都可以根据阐释的需要走进我们的视野。不言而喻,这对于我们的文本分析能力和理论思维素质将是一次挑战。让我们共同面对这次挑战。

王安忆文本中的婚姻世界

婚姻问题是人类社会中两性关系形式的一种主要体现。在王安忆自20世纪80年代初以来到21世纪初的文本里,对于婚姻的探讨范围广泛,涉及到普通家庭婚内相处、婚外恋、城乡联姻、离婚、冥婚,知青背景下的婚姻、小新娘的婚姻、拐卖婚姻等。通过考察这些不同时代背景下的婚姻形态内涵,反映出王安忆在整个创作历程中对众多婚姻问题的自觉实验和探索,鲜明揭示出作家于平民婚姻立场下,重视两性婚姻中的精神因素,理性审视金钱地位权势地域的复杂影响,力图构建两性和谐婚姻状态的理想。但是,不可否认,王安忆20余年的婚姻文本中,所追求的理想婚姻世界是一个成功与失败相互交织的艰难过程。

论李准传统农村家庭关系观

家庭成员不同人际关系的和谐是家庭和谐的重要前提和基础,家庭的和谐有利于社会的和谐与发展。李准以河洛地区的农民家庭生活为创作蓝本,勾勒出农民家庭成员之间的和谐形态,寄予了作家和谐家庭观的文学审美理想。和谐的家庭理念对当下农村家庭关系建设具有借鉴价值。

论方方小说的荒诞意识

荒诞，本来是现代西方美学的专用语汇。20世纪50年代，英法等欧洲国家出现一种全新的戏剧——荒诞派戏剧。“人是痛苦无望的，世界是荒谬无序的”，是荒诞派戏剧所表达的社会生活感受与生命哲理。方方从敏锐的感觉出发，在日常的境界里体味出精致的哲理。她及时而准确捕捉到现世的荒诞感：现世世界如白雾般混沌，

李凖笔下的受难黄河叙事——以《黄河东流去》为中心

李凖对河流的叙事集中凝聚为受难黄河书写。荣获第二届茅盾文学奖的长篇小说《黄河东流去》是李凖依托黄河地理空间进行河流叙事的代表作品。文本从真实的黄河受难史史料出发预设受难黄河叙事空间,借助黄泛区难民家庭故事想象受难黄河叙事主体,从家国情怀、黄河文化精神建构受难黄河叙事思想,诠释生生不息的黄河精神,而这种迎难而上绵延不断的顽强生命力精神质素正是中华民族精神的体现,也是李凖进行黄河文学叙事与家国情怀表达的有机统一。

2016~2021年我国猪伪狂犬病病毒的分子流行病学调查与分析

为探究近几年猪伪狂犬病病毒(PRV)在我国的流行情况及遗传演化特征,本研究对2016年~2021年采自全国17个省、市和自治区的2299份临床样品经PCR检测,并利用PCR扩增阳性样品中的PRV gB、gE和gC基因并测序,采用MegAlign分析三者与GenBank登录的PRV参考株相应基因序列的同源性;利用MEGA 7.0分别构建上述3个基因的遗传进化树,并采用MegAlign分析gB、gE和gC蛋白氨基酸序列的差异,分析其遗传演化及分子特征的变化。结果显示,共扩增出24份PRV阳性样品,阳性率约1.04%,且不同年份及不同地区均有PRV的检出。PRV gB、gE和gC基因序列的同源性及遗传进化分析结果显示,3个基因及其编码氨基酸序列均与2011年以来的PRV变异株同源性最高,且均属于基因Ⅱ型PRV变异株;氨基酸序列比对结果显示,与基因Ⅰ型PRV相比,所测PRV gB、gE和gC中均存在特征性氨基酸突变位点:gB氨基酸序列aa75~aa77连续缺失3个氨基酸(SPG),aa93~aa94连续插入2个氨基酸(DG);gE氨基酸序列在aa48和aa496各插入1个氨基酸(D);gC氨基酸序列在aa63~aa69连续插入7个氨基酸AAASTPA。此外,本研究通过比对国内外经典株以及2011年以来国内PRV gE蛋白的氨基酸序列,确定了不同亚型PRV(即指基因Ⅱ型PRV变异株和经典株)的分子特征即基因Ⅱ型PRV变异株:gE aa496为“D+”或aa496为“D-”+aa448“I”;基因Ⅱ型PRV经典株:gE为aa496“D-”+aa448“V/A”。上述结果表明,我国现阶段仍以基因Ⅱ型PRV变异株的流行为主,进一步明确了不同基因型和亚型PRV的分子特征,对了解我国PRV的流行现状及当前流行株的分子特征具有重要意义,为PRV诊断试剂的研发及PR的防控提供了参考。

论方方知识者题材小说

当代小说家方方通过对知识者生活的描写,对人的存在和命运进行深刻的哲学反思。她笔下的知识者虽然生活的时代背景和生活阅历各自不同,却有着相近的精神血脉,呈现出具有家族谱系的人物类型:即祖父辈,父亲辈,我辈三代知识者。在他们看似不同的生命形式里折射出三代知识者相似的宿命悲剧:无处遁逃的生命定数。宿命,在方方笔下表现为一股神秘的力量,她形象地描绘出在宿命之手操纵下代际轮回的宿命悲剧,发出一声声宿命的叹息。

猪瘟病毒E2蛋白在大肠杆菌中的表达及其可溶性分析

旨在表达出囊膜糖蛋白E2,为猪瘟病毒的亚单位标记疫苗研制、血清学诊断等提供依据。以pMD-18T-E2为模板,扩增猪瘟病毒E2基因,克隆至原核表达载体pET-28a,构建重组原核表达质粒pET-28a-E2,并在大肠杆菌Rosetta(DE3)中诱导表达。结果显示,通过SDS-PAGE凝胶电泳可检测到46ku的蛋白条带,与预期结果一致;目的蛋白主要以包涵体形式存在。将E2蛋白变性纯化后,分别采用透析复性和稀释复性2种方法进行复性,成功得到可溶性E2蛋白。

南瓜花蕾大小与花粉发育时期关系的初探

以红香栗南瓜的花蕾为材料，用醋酸洋红染液压片法制片，在DMXY型生物数码显微镜下观察花粉发育情况，并探讨花蕾大小与花粉发育时期的相互关系．结果表明，以花蕾纵横径比作为判断南瓜小孢子发育时期的标准是比较科学的，当花蕾纵横比为1．9—2．1时，花粉基本处于小孢子母细胞时期；纵横比为2．1～2．2时，为花粉发育的二分体时期；纵横比为2．2—2．4时，为花粉发育的四分体时期；纵横比为2．4～2．6时，为花粉发育的单核期；纵横比2．6以上时，基本为花粉发育的后期．