禽偏肺病毒乳胶凝集试验检测方法的建立与应用

【目的】建立禽偏肺病毒乳胶凝集试验检测方法,以快速、有效、准确地检测该病毒。【方法】用制备的禽偏肺病毒抗体致敏乳胶,与禽偏肺病毒反应,优化最佳致敏条件,建立禽偏肺病毒乳胶凝集试验检测方法;对该方法的重复性与特异性进行检测,将该方法与套式RT-PCR进行比较,并将其用于临床病料的检测。【结果】禽偏肺病毒抗体致敏乳胶的最佳致敏温度为56℃,抗体最佳稀释度为1∶10(体积比),最佳致敏时间为120min。用建立的乳胶凝集试验检测方法和套式RT-PCR同步检测10份禽偏肺病毒尿囊液,两者的阳性检出率一致,总符合率为100%。应用该方法对采自山东省不同地区的68份可疑临床病料进行检测,阳性检出率为26.47%。【结论】建立了禽偏肺病毒乳胶凝集试验检测方法,该法具有快速、简便、准确、特异性强、重复性和稳定性良好等优点,是一种适于基层单位检测禽偏肺病毒的可靠方法。

坦布苏病毒的最新研究进展

自2010年春季以来，江苏、浙江、上海等地相继出现一种导致蛋鸭产蛋急剧下降的新发疾病，之后迅速波及福建、广东、广西、山东等全国多个省市的鸭场。到目前为止，全国大部分主要水禽养殖地区仍然受到该病的威胁。病鸭主要表现为高热、运动障碍、产蛋下降甚至停止，发病率高达100％，病死率在5％-10％之间。经研究证明该病的病原为鸭坦布苏病毒（DTMUV）。

商品肉鸭免疫抑制病病原体共感染情况调查

从山东省不同地区采集病、死肉鸭397份以及临床健康肉鸭200份,用特异性核酸探针对样品进行H9N2亚型禽流感病毒(H9N2AIV)、禽偏肺病毒(aMPV)、呼肠孤病毒(DRV)、鸭圆环病毒(DuCV)、传染性法氏囊病病毒(IB-DV)、禽网状内皮组织增生症病毒(REV)的检测。结果,自然发病肉鸭中H9N2AIV、aMPV、DRV、REV、DuCV、IB-DV检出率分别为57.43%、51.39%、38.54%、39.55%、29.47%、10.58%,且存在多重感染现象,二重和三重感染率分别为26.20%、18.89%,以aMPV和H9N2AIV、REV和DuCV检出率较高;而临床健康肉鸭群中H9N2AIV、aMPV、DRV、REV、DuCV、IBDV检出率均分别为7.00%、19.5%、15.5%、10.5%、24.00%、9.00%,呈阴性的和单一感染的样品分别占40.00%和28.00%;共感染率为32.00%,且主要是二重感染。上述结果表明,商品肉鸭群中普遍存在免疫抑制病病原体共感染的现象,这成为目前肉鸭发病和生长缓慢的重要流行病学因素之一。

1株B亚型禽偏肺病毒的分离与鉴定

从山东省多个地区的商品肉鸡养殖场采集64份疑似病料，通过RT—PCR方法检测出37份禽偏肺病毒阳性病料，以此作为病毒分离材料接种SPF鸡胚，盲传至第7代时鸡胚生长明显迟滞。取阳性尿囊液在CEF中培养，呈现禽偏肺病毒典型细胞病变（CPE）：细胞变圆、悬浮，有合胞体形成。将分离株接种于Veto细胞及DF-1细胞均出现类似病变。对分离株F基因进行测序，并与GenBank中发表的部分代表序列比较。结果显示，与B亚型禽偏肺病毒的核苷酸同源性最高，为97．4％～99．3％；与A亚型禽偏肺病毒核苷酸同源性较低，为77．4％～78．1％；而与C亚型禽偏肺病毒核苷酸同源性最低，为69．5％～69．7％。基因分型显示分离株为B亚型禽偏肺病毒，将该毒株命名为禽偏肺病毒SDWF株。

B亚型禽偏肺病毒对SPF鸡的致病性

利用分离的1株B亚型禽偏肺病毒,采用静脉注射和点眼滴鼻两种途径接种SPF鸡,并在接种同时免疫新城疫弱毒疫苗。在攻毒后3、6、9、12、15d,每组随机抽取3只翅下采血,检测血液生化指标,利用血凝和血凝抑制试验检测新城疫HI抗体效价;利用流式细胞术分析外周血CD4+/CD8+比值,ELISA试剂盒测定血清中IL-2、IFN-γ的含量;同时观察静脉注射组和点眼滴鼻组鸡的临床症状、剖检病变和病理组织学变化。结果表明,攻毒后9～15d,静脉注射组和点眼滴鼻组外周血CD4+/CD8+比值和血清IL-2、IFN-γ的含量均显著低于对照组(P<0.05),而静脉注射组与点眼滴鼻组间无显著差异(P>0.05);静脉注射组和点眼滴鼻组的免疫器官指数低于对照组,但各组间差异不显著(P>0.05);各组间新城疫HI抗体水平无显著差异(P>0.05);血液生化指标仅谷丙转氨酶(ALT)和谷草转氨酶(AST)在攻毒后显著升高(P<0.05),其他指标在各组间无显著差异(P>0.05);静脉注射组和点眼滴鼻组在感染后3～10d出现轻微临床症状;病理组织学检测结果显示,静脉注射组和点眼滴鼻组的呼吸道和肝脏病变最明显。综上所述,B亚型禽偏肺病毒感染SPF鸡后,在一段时间内抑制机体细胞免疫,导致免疫机能下降,并引起轻微的组织病变;B亚型禽偏肺病毒通过两种不同的攻毒途径对SPF鸡的致病性无显著差异。